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大肠杆菌表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的分离纯化及其二聚体分析被引量：1: 2007年; 采用阴离子交换和凝胶过滤色谱法纯化大肠杆菌高密度培养所表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(rSFH),经SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯度达到98%以上,每升发酵液得率约0.7g。同时利用疏水色谱、MALDI-TOF对纯化过程中出现的rSFH同源二聚体的分析和表面疏水面积的计算及利用高效排阻色谱(HPSEC)分析NaCl、温度对rSFH的可逆二聚化行为的影响,认为疏水作用在rSFH的可逆二聚化行为中发挥着重要作用。; 钟根深于爱平靳继德蒋中华吴祖泽; 关键词：葡激酶水蛭素二聚体疏水作用

聚乙二醇不同修饰度对水蛭素活性和半衰期的影响被引量：3: 2005年; 目的:通过优化聚乙二醇(PEG)对水蛭素的化学修饰反应条件,得到具有生物学活性、半衰期延长的修饰产物。方法:通过改变化学反应中聚乙二醇与水蛭素的比例获得不同修饰度的产物;采用SDS-PAGE分析产物的修饰度;TH发色底物法分析聚乙二醇修饰前、后水蛭素的活性;用凝胶过滤层析对水蛭素的PEG修饰产物进行分离纯化;采用部分活化凝血酶时间(APTT)鉴定PEG修饰水蛭素在动物体内延长半衰期的效果。结果:化学反应中PEG与水蛭素摩尔比超过3∶1时,水蛭素被修饰后抗凝活性明显下降。凝胶过滤层析方法分离得到不同修饰程度的水蛭素。活性分析表明,连接1个和2个聚乙二醇分子的水蛭素保持了原有活性,并可不同程度地延长体内半衰期;连接3个以上PEG的水蛭素活性明显降低。结论:通过控制PEG对水蛭素的修饰反应条件,得到了具有生物学活性、体内半衰期延长的修饰产物。; 于爱平刘玉英蒋中华董春娜钟根深吴祖泽; 关键词：水蛭素聚乙二醇化学修饰半衰期

重组大肠杆菌高密度培养被引量：21: 2005年; 重组大肠杆菌的高密度培养是增加单位时间/体积重组蛋白产率的最有效途径之一。如何在获得高密度的同时取得较高的单位时间／体积目的蛋白产率,是高密度培养(过程中亟待解决的问题,这与所选用的菌体、构建的表达系统、发酵时pH、溶氧、培养基成分及培养温度、质粒稳定性、代谢副产物的限制及对比生长速率的控制等因素有关。试从这些方面加以综述,分析这些条件对重组蛋白生产的影响,介绍大肠杆菌高密度培养领域的一些研究进展。; 钟根深石炳兴吴祖泽; 关键词：大肠杆菌比生长速率质粒稳定性

聚乙二醇修饰水蛭素的分离纯化与活性分析被引量：6: 2004年; 用活化的聚乙二醇(PEG)对水蛭素进行化学修饰,质谱分析表明,修饰产物是修饰度不同的分子质量相差5000u的水蛭素的混合物。用离子交换层析和凝胶过滤层析对反应产物进行分离纯化,离子交换层析难以达到完全分离;而采用凝胶过滤层析方法可较好地分离修饰度不同的各组份。生物学活性分析表明,不同的PEG修饰度对水蛭素的活性具有显著影响,连接1～2个PEG的水蛭素保持了原有活性,而连接3个PEG的水蛭素活性显著下降。; 于爱平蒋中华钟根深董春娜吴祖泽; 关键词：水蛭素聚乙二醇化学修饰分离纯化

溶栓和抗凝双功能葡激酶-水蛭素融合蛋白的表达及功能研究: ＜正＞背景溶栓和抗凝药物联合应用是目前临床治疗心脑血管血栓性疾病的普遍方案,所以具有溶栓-抗凝双功能药物的研发成为研究热点。天然的葡激酶（staphylokinase,SAK）是由某些金黄色葡萄球菌产生的一种外分泌蛋白,...; 于爱萍靳继德石炳兴董春娜钟根深王立生吴祖泽

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白工程菌的高密度发酵及其表达产物的分离纯化、二聚体分析及与凝血酶相互作用的研究: 目的：溶栓与抗凝药物联合疗法是当前血栓相关性疾病的重要临床治疗方案。重组SFH是葡激酶(SAK)和水蛭素(HV)通过一个Xa因子连接起来的融合蛋白，编码该融合蛋白的重组基因插入温控型表达载体pBV220，转化感受态大肠杆...; 钟根深; 关键词：葡激酶水蛭素分离纯化凝血酶; 文献传递

重组葡激酶和水蛭素融合蛋白的血栓靶向性机制(英文)被引量：8: 2008年; 为解释以凝血因子Xa(FXa)的识别序列为连接肽的葡激酶和水蛭素的融合蛋白(命名为SFH)在体内的强溶栓和低出血的特征,研究分析了SFH的两个血栓靶向性作用机理。首先采用ELISA和免疫组化的方法在体外分析了由水蛭素游离的C末端赋予的SFH对血栓的靶向性,结果显示SFH对凝血酶和富含凝血酶的血栓具有更高的亲和力。为阐明SFH抗凝活性在血栓部位的靶向性释放,构建表达了仅在水蛭素N末端连接FXa识别序列的水蛭素衍生物(命名为FH)。体外试验结果表明完整的FH无抗凝活性,在体内FH可以发挥抗栓作用,且出血副作用较低,这些结果说明FXa的识别序列可以封闭水蛭素的抗凝活性,在体内FH可以由于FXa的成功裂解而释放其抗凝活性,且其抗凝活性可能仅局限于血栓局部。这就间接说明了SFH的抗凝活性可以在血栓局部进行靶向性释放。以上两个血栓靶向性作用机理是SFH在体内发挥更高溶栓效率和降低出血副作用的重要机制。; 于爱平张传领董春娜于红阳钟根深王立生吴祖泽; 关键词：葡激酶水蛭素溶栓抗凝

表达重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的大肠杆菌工程菌的高密度培养被引量：6: 2006年; 采用溶氧反馈的分批培养流加补料的方法高密度培养重组大肠杆菌BL21（DE3）生产重组葡激酶．水蛭素融合蛋白。通过摇瓶培养对菌种和培养条件的初步筛选，采用溶氧反馈的流加补料策略，进行了5L发酵罐的合成培养基和复合培养基的发酵工艺研究。通过对培养条件的不断优化，重组葡激酶．水蛭素融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）里得到了高效表达，菌体密度最终达到115g／L（WCW）以上，可溶性重组融合蛋白占菌体总蛋白的30％以上，含量约为1．1～1．2g／L。5L发酵罐的发酵工艺参数在40L发酵罐中进行了放大培养，结果表明该工艺能有效地放大，可适用于工业生产。; 钟根深石炳兴王海东蒋中华吴祖泽; 关键词：重组大肠杆菌葡激酶水蛭素

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钟根深