董春娜
- 作品数：11 被引量：22H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 聚乙二醇不同修饰度对水蛭素活性和半衰期的影响被引量：3
- 2005年
- 目的:通过优化聚乙二醇(PEG)对水蛭素的化学修饰反应条件,得到具有生物学活性、半衰期延长的修饰产物。方法:通过改变化学反应中聚乙二醇与水蛭素的比例获得不同修饰度的产物;采用SDS-PAGE分析产物的修饰度;TH发色底物法分析聚乙二醇修饰前、后水蛭素的活性;用凝胶过滤层析对水蛭素的PEG修饰产物进行分离纯化;采用部分活化凝血酶时间(APTT)鉴定PEG修饰水蛭素在动物体内延长半衰期的效果。结果:化学反应中PEG与水蛭素摩尔比超过3∶1时,水蛭素被修饰后抗凝活性明显下降。凝胶过滤层析方法分离得到不同修饰程度的水蛭素。活性分析表明,连接1个和2个聚乙二醇分子的水蛭素保持了原有活性,并可不同程度地延长体内半衰期;连接3个以上PEG的水蛭素活性明显降低。结论:通过控制PEG对水蛭素的修饰反应条件,得到了具有生物学活性、体内半衰期延长的修饰产物。
- 于爱平刘玉英蒋中华董春娜钟根深吴祖泽
- 关键词：水蛭素聚乙二醇化学修饰半衰期
- 新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究被引量：2
- 2006年
- 水蛭素(hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用,尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明,此新型嵌合抗栓剂在不减少水蛭素抗凝血活性的同时, 又大幅度地降低出血副作用,具有非常重要的临床意义。
- 牛晋阳董春娜靳继德石炳兴吴祖泽
- 关键词：水蛭素
- 具重复Kringle结构分子系列缺失体和嵌合体的构建方法及验证
- 1999年
- 确定肝细胞生长因子 (HGF)、巨噬细胞刺激蛋白 (MSP)各 4个Kringle结构的共有序列并以此为基础设计公用引物 ,利用此公用引物可扩增出含不同数目Kringle的系列片段 ;以不同的组合方式连接 ,得到了系列缺失体和嵌合体 ;测序结果表明公用引物的简并性及所扩增序列与理论预期一致 .对以此法所构建的HGF/MSPK1缺失体表达后进行活性测定 ,提出MSP的K1是重要的功能决定区 .此外 ,提出了对内部存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆策略 .
- 宫锋董春娜张咏章扬培吴祖泽贺福初
- 关键词：KRINGLE肝细胞生长因子MSP嵌合体
- 溶栓和抗凝双功能葡激酶-水蛭素融合蛋白的表达及功能研究
- ＜正＞背景溶栓和抗凝药物联合应用是目前临床治疗心脑血管血栓性疾病的普遍方案,所以具有溶栓-抗凝双功能药物的研发成为研究热点。天然的葡激酶（staphylokinase,SAK）是由某些金黄色葡萄球菌产生的一种外分泌蛋白,...
- 于爱萍靳继德石炳兴董春娜钟根深王立生吴祖泽
- 人血清白蛋白和水蛭素融合蛋白表达载体的构建、在毕赤酵母中的表达和抗栓作用
- ＜正＞背景血栓相关性疾病已成为威胁人类健康最严重的疾病之一,在该类疾病的治疗过程中, 除了使用溶栓药物外,通常还需要使用抗凝药物以提高疗效和防止溶栓后再栓塞的发生。肝素是目前临床应用最多的抗凝药物,但其抗凝作用需要抗凝血...
- 靳继德于爱萍董春娜蒋中华吴祖泽
- 文献传递
- 水蛭素的NN-末端修饰及靶向激活
- ＜正＞一、研究目的和意义在我国和许多发达国家,心脑血管系统疾病已经居于各种死亡疾病之首。血栓形成是许多心脑血管系统疾病的重要诱因。抗栓治疗是治疗该类疾病重要而有效的手段,但目前的抗血栓药物普遍存在出血副作用问题。
- 于爱平张传领董春娜王立生吴祖泽
- 文献传递
- 聚乙二醇修饰水蛭素的分离纯化与活性分析被引量：6
- 2004年
- 用活化的聚乙二醇(PEG)对水蛭素进行化学修饰,质谱分析表明,修饰产物是修饰度不同的分子质量相差5000u的水蛭素的混合物。用离子交换层析和凝胶过滤层析对反应产物进行分离纯化,离子交换层析难以达到完全分离;而采用凝胶过滤层析方法可较好地分离修饰度不同的各组份。生物学活性分析表明,不同的PEG修饰度对水蛭素的活性具有显著影响,连接1～2个PEG的水蛭素保持了原有活性,而连接3个PEG的水蛭素活性显著下降。
- 于爱平蒋中华钟根深董春娜吴祖泽
- 关键词：水蛭素聚乙二醇化学修饰分离纯化
- 重组葡激酶和水蛭素融合蛋白的血栓靶向性机制(英文)被引量：8
- 2008年
- 为解释以凝血因子Xa(FXa)的识别序列为连接肽的葡激酶和水蛭素的融合蛋白(命名为SFH)在体内的强溶栓和低出血的特征,研究分析了SFH的两个血栓靶向性作用机理。首先采用ELISA和免疫组化的方法在体外分析了由水蛭素游离的C末端赋予的SFH对血栓的靶向性,结果显示SFH对凝血酶和富含凝血酶的血栓具有更高的亲和力。为阐明SFH抗凝活性在血栓部位的靶向性释放,构建表达了仅在水蛭素N末端连接FXa识别序列的水蛭素衍生物(命名为FH)。体外试验结果表明完整的FH无抗凝活性,在体内FH可以发挥抗栓作用,且出血副作用较低,这些结果说明FXa的识别序列可以封闭水蛭素的抗凝活性,在体内FH可以由于FXa的成功裂解而释放其抗凝活性,且其抗凝活性可能仅局限于血栓局部。这就间接说明了SFH的抗凝活性可以在血栓局部进行靶向性释放。以上两个血栓靶向性作用机理是SFH在体内发挥更高溶栓效率和降低出血副作用的重要机制。
- 于爱平张传领董春娜于红阳钟根深王立生吴祖泽
- 关键词：葡激酶水蛭素溶栓抗凝
- 人组织型纤溶酶原激活剂-水蛭素融合基因的构建及其在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2005年
- 构建并表达兼有溶栓和抗凝活性、减少出血副作用的人组织型纤溶酶原激活剂(t_PA)和水蛭素(HV2)的融合蛋白。通过提取总RNA和RT_PCR获得t_PA基因,与HV2基因通过活化凝血因子X(FXa)识别序列(IEGR)的对应碱基序列连接构成融合蛋白基因,融合蛋白基因经pGEM_T、pIC9克隆至表达载体pIC9K上,电转导入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115。转化子摇瓶内甲醇诱导表达。纤维蛋白平板溶圈法和纤维蛋白凝块法分别检测溶栓和抗凝活性。琼脂糖凝胶电泳结果显示克隆的t_PA基因片段大小为1700bp,序列测定结果表明其35位氨基酸由文献报道的精氨酸突变为色氨酸。限制性酶切和PCR鉴定结果均表明融合蛋白基因已克隆入表达载体和宿主菌。甲醇利用实验、G418抗性筛选获得多拷贝甲醇利用快型克隆。甲醇诱导表达产物具有纤溶活性并可被抗t_PA抗体抑制。完整融合蛋白无抗凝活性,但以FXa裂解后可释放抗凝活性。同时,融合蛋白以单链和双链两种形式存在。融合蛋白在血栓部位特有的FXa作用下靶向释放抗凝活性,具有溶栓抗凝双功能,有望降低临床出血副作用。
- 于爱平石炳兴董春娜蒋中华吴祖泽
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂水蛭素溶栓抗凝
- AP-1辅助激活因子JAB1的分子克隆及其与肝细胞生成素的相互作用被引量：1
- 2001年
- 利用酵母双杂交方法 ,用肝细胞生成素 (HPO)作为诱饵蛋白在人胎肝cDNA文库中筛选到能与HPO相互作用的蛋白 :AP 1辅助激活因子JAB1.并用PCR方法从人胎肝cDNA文库中扩出JAB1全长cDNA ,进行GST JAB1原核融合蛋白表达与纯化 .蛋白质结合实验表明 。
- 陆承荣李勇董春娜黎明王清明张成岗魏玉琳陈惠鹏贺福初
- 关键词：肝细胞生成素转录因子分子克隆JAB1
