龚劲松
- 作品数：25 被引量：33H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- G145R变异重组HBsAg ELISA检测质控参照品制备的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量,适量稀释分装,置-20℃冻存。采用不同方法对制备物的特异性与稳定性进行考核,并将其试用于对几种市售试剂盒检测变异能力的评价。结果:制备物中靶物质含量在0.50～32.00ng/mLwcHBsAg之间,在D12-ELISA检测中其信号的线性关系与质控血清有很好的一致性;反复冻融对其稳定性无显著影响;采用不同市售ELISA试剂检测时其反应信号强度各不相同。结论:本研究制备的G145R变异rHBsAgELISA质控参照品具有较高的稳定性、特异性与实用性;其研制为乙肝病毒免疫逃逸现象在基础、临床、诊断试剂研发,以及流行病学调查等方面研究的开展提供了重要的物质基础。
- 张波陈妍龚劲松张春燕黄永国张小燕田拥军杨东亮李方和
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- 14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用
- 2007年
- 目的 制备抗乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）的单克隆抗体，检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法，并做初步评价。方法 用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗．HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3，建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果 制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛，有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件，检测HBsAg的灵敏度较好，检测变异HBs舷的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论 用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。
- 田拥军张振华张正茂李磊覃莉龚劲松杨东亮陆蒙吉
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- HBV G145R突变对S蛋白及“a”决定簇合成肽抗原性影响被引量：2
- 2007年
- 人工合成G145R突变后HBsAg"a"决定簇多肽G145R-SP24,将G145R-SP24、重组G145R变异S蛋白及重组野生型HBsAg分组免疫BALB/c小鼠,制备相应抗血清。通过观察各免疫原与抗血清或抗G145R变异HBsAg McAb的免疫反应特征,分析并比较G145R突变后对S蛋白及"a"决定簇合成肽抗原性的影响。结果,几种免疫原均取得理想的免疫效果,ELISA证实各抗血清均有较好的特异性。G145R-SP24和G145R变异S蛋白免疫小鼠获得的抗血清效价较野生型HBsAg略低,且抗原性也发生了明显改变,G145R突变后"a"决定簇仍然具有较好的免疫原性;另外G145R-SP24与G145R变异S蛋白之间也显示出不同的抗原性,提示孤立的G145R变异HBsAg"a"决定簇与完整G145R S蛋白的"a"决定簇可能形成不同的空间构象。本研究为进一步探讨"a"决定簇突变后空间结构的变化规律与抗原性改变的特点奠定一定的基础。
- 黄永国李方和龚劲松田拥军张春燕张小艳杨东亮
- 关键词：基因变异合成肽多克隆抗体
- 酶联免疫吸附试验临床检测信号临界区(灰区)患者血清HBsAg携带状况的研究
- 2009年
- 目的探讨乙肝HBsAg酶联免疫吸附试验（ELISA）检测信号灰区与血清免疫逃逸变异HBsAg之间的关系。方法采用市售ELISA对一组临床患者做常规检测,根据检测结果选留ELISA信号处灰区（即P/C 1.2~5.0之间）的实验标本。采用G6-ELISA（本室研制,有极强免疫逃逸变异HBsAg检测能力）与市售（基本不具备免疫逃逸变异HBsAg检测能力）对选留标本进行检测,以差减ELISA确认其免疫逃逸变异HBsAg阳性数量,并采用雅培-化学发光及PCR对检测结果的特异性进行复核。结果自10 231例受检者中筛选HBsAg ELISA信号灰区标本244例。以G6-ELISA与市售ELISA检测结果并做差减分析显示免疫逃逸变异HBsAg阳性率为11.07%（27/244）,亚临界,临界及超临界各组阳性率分别为9.30%（8/86）,10.34%（15/145）及30.77%（4/13）,后者组阳性率显著高于前两组（P〈0.01）。考核结果显示,经ELISA差减分析确认的免疫逃逸变异HBsAg阳性血清雅培-化学发光检测阳性率为94.44%（17/18）,HBV DNA阳性率为33.33%（6/18）,其中两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本的HBsAg特异性亦为雅培-化学发光检测所证实。结论临床HBsAg检测样本中存在少量A（或P/C）值在ELISA信号灰区的异质化标本;免疫逃逸变异HBV感染是造成这一现象的主要原因之一。
- 张春燕龚劲松刘静华彭静黄永国张小燕李方和
- 关键词：乙型肝炎病毒基因变异乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附试验
- 鼠IgG定量ELISA实验参比品的制备及其应用
- 2007年
- 目的 制备一组用于小鼠IgG定量ELISA检测的实验参比品。方法 将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合，以葡萄球菌A蛋白（SPA）亲和层析纯化IgG，凯氏定氮法测定IgG含量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳作纯度鉴定并据此校正其IgG浓度，以特定保存液将其稀释成既定浓度系列，根据其在ELISA中的反应特征，制备浓度（自然对数）-A450值标准曲线，并将其用于对一组杂交瘤细胞培养上清中鼠单克隆抗体的IgG定量测定。结果提纯的鼠IgG经鉴定纯度达97．1％，且反应特性良好，其IgG含量与ELISA检测信号间有高度的相关性（r=0．990）。不同浓度的稀释系列经8次反复冻融，检测信号无显著变化，变异系数（CV）为1．87％～6．47％。将标准曲线计算所得浓度对设定浓度做回收实验分析，回收率89．1％～108．3％。并用其测得一组杂交瘤细胞培养上清的鼠IgG含量为8．0～51．5mg／L。结论 鉴定结果显示制备物定量准确，浓度范围适中，稳定性好，对于早期杂交瘤细胞分泌能力以及抗体稳定性的评价、单抗制剂的鉴定具有一定的应用价值。
- 黄永国张春燕龚劲松陈妍张波李方和
- 关键词：酶联免疫吸附试验单克隆抗体小鼠
- 乙肝病毒表面抗原G145R变异单克隆抗体的制备及其初步鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的：研制抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的单克隆抗体（mAb）。方法：将重组乙肝病毒G145R变异表面抗原以Al（OH）3佐剂化,常规免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术制备抗乙肝病毒G145R变异表面抗原的mAb。采用ELISA对制备物的效价与特异性进行鉴定,将其用于部分临床标本的检测,并与德国抗HBs mAb GL2.001进行比较。结果：获得1株稳定分泌抗G145R HBs mAb的杂交瘤细胞,命名为4-E12。该细胞株染色体数目为90条,所分泌mAb属IgG1亚类。其培养上清与腹水抗G145R HBs ELISA效价为（0.5-1）×10^3及（1-10）×10^6。经持续3月培养,低血清适应以及反复冻存与复苏后,其细胞增殖能力与上清抗G145R HBs效价与克隆化结束时大致相似。将其与德国抗G145R HBs mAb GL2.001相比,二者对重组乙肝表面抗原G145R变异S蛋白的反应性大致相当,灵敏度前者稍低于后者（分别为2.0μg/L与1.0μg/L）。对野生株表面抗原的检测前者在实验浓度范围内未显示有意义的反应信号,后者在与高浓度（1mg/L及以上）抗原反应时S/N值达到或高于3.9。将二者用于对一组特定患者的临床检测,其阳性率前者（17/200,8.5%）较后者（11.5%）略低,其差别经统计学比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：成功地制备了1株抗乙肝表面抗原G145R变异体的mAb,为乙肝G145R变异的基础、临床与流行病学研究提供了进一步的物质基础。
- 张小艳龚劲松张波刘静华黄永国张春燕李方和
- 关键词：乙型肝炎病毒HBSAG单克隆抗体
- 抗HBs mAb的研制及其对野生与免疫逃逸变异HBsAg的交叉反应特征被引量：9
- 2008年
- 目的：抗HBs G6mAb制备及其对重组野生与免疫逃逸变异HBsAg结合能力与特点的评价。方法：常规制备并纯化抗HBs mAb,以纯化抗HBs mAb IgG包被,采用ELISA对17种野生及“a”决定簇替代性变异全基因重组表达HBsAg进行检测,并与几种市售HBsAg检测试剂进行比较。结果：该杂交瘤细胞生长与分泌特性稳定,其培养上清与腹水效价分别为2048及4096×10^3;对野生HBsAg检测（ELISA）敏感性不低于0.125μg/L。该抗体可与15种变异抗原中12种发生反应（P/N≥2.5）,反应信号强度分别为低反应组（2份,与野生株A值比较,下同）平均7.55%;中反应组（1例）为59.40%;高反应组（9种）分别为野生株的92.1%-109.4%,低反应或无反应表达产物的免疫逃逸变异部位集中在HBV“a”决定簇I环的起始部即120-124序列之间。部分表达产物采用市售试剂作同步检测,平均显色强度高于或明显高于几种国内应用最为普遍的HBsAg ELISA（P〈0.05）。结论：抗HBs G6 mAb对多数免疫逃逸变异HBsAg有很强的结合能力,所针对的变异类型亦表现出某种特殊的规律。
- 李方和张小燕严兵张波黄永国张春燕龚劲松陈妍刘静华
- 关键词：基因变异HBSAG免疫逃逸
- 医院科研试剂管理工作的实践与探讨被引量：6
- 2018年
- 目的提高科研试剂管理的能力和水平，更好地为医院科学研究提供支撑。方法建立完善的科研试剂管理体系和构建科研试剂信息化管理系统，并在实践中不断总结和优化系统功能。结果使科研试剂管理的各项工作科学有序衔接，规范了医院科研试剂的采购和使用，有效降低了科研试剂的购置成本，保障了科研工作的顺利开展，为科研人员提供了便利和优质的服务，加快了科学研究的进程。结论完善的科研试剂管理体系可以为医院的科研工作提供有效的支持和保障，有利于医院科学研究的持续稳定发展。
- 袁雪峰李敬龚劲松巫艳蔡龙
- 关键词：信息化管理系统
- 抗HBV G145R HBsAg多克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的实验性rG145R变异抗HBs多克隆抗体。方法采用纯化全基因重组G145R变异HBsAg常规皮下免疫制备小鼠多克隆抗体,以间接ELISA、SDS-PAG及Western blot等多种实验对制备物进行鉴定,并初步应用于转染CHO细胞的化学染色。结果制备物在Western blot、ELISA中和试验与抗原替代ELISA中与重组G145R变异HBsAg及重组野生HBsAg等均有很好的特异性与反应性;对此两种抗原的ELISA效价前者显著高于后者(分别为51200与6400);将其用于2A8细胞(转染并分泌G145R HBsAg)爬片的PAP染色,亦取得较理想的实验结果。结论采用重组G145R变异HBsAg免疫成功制备出较高效价的抗体。鉴于该抗体同时与野生重组wHBsAg存在较强交叉反应,其与野生抗HBs的混合应用能增ELISA免疫逃逸变异的检测能力。
- 李佩珊龚劲松李时君张波陈妍项美娟李方和
- 关键词：乙型肝炎病毒基因变异合成肽多克隆抗体
- 流式荧光免疫微球分析技术的原理与特征被引量：2
- 2001年
- 李方和龚劲松
