张忠东
- 作品数：14 被引量：71H指数：5
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白被引量：17
- 2004年
- 目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)核心启动子 (corepromoter)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体表面展示技术 ,以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 6个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索 ,确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白———羧肽酶N(CPN)。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。
- 张忠东成军钟彦伟王业东董菁陈天艳杨倩张树林刘妍
- 关键词：噬菌体展示技术乙型肝炎病毒核心启动子
- 应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白被引量：5
- 2004年
- 目的 筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机挑选的 12个克隆中得到 2个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过序列同源性分析 ,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶 5 (MAPKAPK5 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白 ,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础。
- 钟彦伟成军张忠东杨艳杰李强董菁黄燕萍刘敏王建军
- 关键词：噬菌体展示技术C型肝炎样病毒属病毒非结构蛋白质类基因文库
- 噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体被引量：9
- 2003年
- 目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv)。方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析。结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍。用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性。其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等)。对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的/4值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(P24)阳性克隆。提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTABSE载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构。结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv。
- 钟彦伟成军张忠东孙敏李强李克王琳李莉张玲霞陈菊梅
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白噬菌体表面展示技术酵母双杂交技术
- 应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白被引量：19
- 2004年
- 目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 4个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性分析 ,确定了和HBVSPⅡ结合的肝细胞蛋白———尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 4 (NADHDH4 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBVSPⅡ的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径。
- 杨艳杰成军陈东风钟彦伟张忠东王建军刘妍
- 关键词：噬菌体展示技术肝炎病毒乙型
- 乙型和丙型肝炎病毒对MAPKK信号转导的影响被引量：1
- 2003年
- 0引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生密切相关.虽然HBV和HCV感染与肝细胞癌之间的关系已经得到确定,但是具体的分子生物学机制还有许多工作要做.
- 张忠东成军钟彦伟张树林
- 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒MAPKK信号转导丝裂原活化蛋白激酶激酶
- 乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MAPKK信号转导影响的研究进展
- 2003年
- 张忠东成军钟彦伟张树林
- 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒MAPKK信号转导丝裂原活化蛋白激酶
- 丙型肝炎病毒蛋白对TRAF2蛋白信号转导影响的研究被引量：1
- 2003年
- 杨艳杰成军陈东风钟彦伟张忠东李强
- 关键词：丙型肝炎病毒信号转导生物学功能肿瘤坏死因子受体相关因子
- 乙型肝炎病毒增强子的结构和调控研究被引量：3
- 2003年
- 0引言
HBV属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.他的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有四个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心抗原(pre-C/C)、核酸聚合酶(P)、表面抗原(preS/S)和X蛋白(X).这些基因的表达受到顺式元件-启动子和增强子的调控.目前在HBV基因组已发现并鉴定的顺式元件有四个启动子(C、X、SP Ⅰ、SPⅡ)、两个增强子(Enh Ⅰ和EnhⅡ)和糖皮质激素应答元件[1-4].其中增强子的作用主要是调控HBV的转录和复制.
- 王建军成军刘妍张忠东杨倩杨艳杰
- 关键词：乙型肝炎病毒增强子启动子基因突变
- 乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响
- 2003年
- 0 引言生物细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号。信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的最终结果。相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应。
- 张忠东成军钟彦伟张树林
- 关键词：丙型肝炎病毒蛋白蛋白酪氨酸激酶信号转导脂多糖T细胞
- 抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体的制备及免疫组织化学研究被引量：2
- 2003年
- 目的:研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的人源噬菌体单链可变区抗体,并探讨其在临床病理学诊断中的应用价值。方法:以大肠杆菌表达的重组HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,利用抗原-抗体亲和性结合的原理,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)和DNA序列分析,获得HCV NS5A的人源单链抗体;用该抗体对7721转染全长HCV cDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV NS5A抗原进行免疫组化鉴定。结果:ELISA结果表明,制备的HCV NS5A人源单链抗体能与HCV NS5A抗原特异性结合;免疫组化结果表明,该抗体能够特异性识别HCV NS5A抗原,与正常肝细胞无交叉反应。结论:此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,为HCV NS5A病原的检测提供了新的有效的检测手段。
- 钟彦伟成军焦成松张忠东李强李莉陈菊梅
- 关键词：抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体医学细胞生物学人体免疫学
