张雪颖
- 作品数：16 被引量：46H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：军队“十一五”科技攻关课题国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- 恙虫病东方体Karp株主要外膜蛋白基因的克隆与表达
- 2003年
- 目的 :表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Karp株 5 6 0 0 0表面蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出 5 6 0 0 0成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建重组质粒pQE30 / 5 6 ,转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导表达、SDS_PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达。结果 :(1)获得长约 15 0 0bp的Ot.Karp株 5 6 0 0 0外膜蛋白基因 ;(2 )SDS_PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为 5 6 0 0 0的独特蛋白带 ;(3)表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4)重组表达质粒序列分析结果显示 ,pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报道的Ot.Karp株5 6 0 0 0外膜蛋白基因序列基本一致。结论 :获得了Ot.Karp 5 6 0 0 0蛋白基因 ,并在大肠杆菌中实现了表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性。
- 陈唯军陈香蕊牛东升张雪颖陈梅玲魏文进温博海
- 关键词：恙虫病东方体KARP株外膜蛋白基因克隆基因表达
- 山西省恙虫病调查与病原学研究被引量：6
- 2000年
- 目的 :1995年山西晋南地区发生恙虫病流行 ,我们对该地区人群进行了流行病学调查 ;并对从患者和野鼠体内分离的恙虫病立克次体进行了病原学研究。方法 :利用微量间接免疫荧光法(MIF)对恙虫病立克次体在人群中的流行进行了调查 ;采用MIF、PCR/RFLP和序列分析方法对恙虫病立克次体分离株进行了鉴定。结果和结论 :晋南地区人群血清恙虫病立克次体抗体阳性率为2 5% ;恙虫病立克次体山西分离株 (Sxh951,Sxh952 ,Sxh953,Sxm97)的血清型别为Gilliam株 ;序列分析提示 :在相对分子质量 560 0 0蛋白基因水平上 ,Sxh951株与Yongchon株亲缘关系最近。
- 陈香蕊于强张永国牛华郑乡占张金桐张雪颖段桂枝程聪
- 关键词：恙虫病流行病学病原学
- 巢式聚合酶链反应快速检测贝氏柯克斯体的研究被引量：7
- 2000年
- 目的 建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法 采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法 ,进行实验室模拟检测。结果 以贝氏柯克斯体com1基因 (编码 2 70 0 0蛋白 )为靶标设计了 2对引物 ;该引物特异性实验表明仅贝氏柯克斯体特异性片段可以扩增出来 ,其余相关立克次体均扩不出 ;敏感性测试结果可检测出 1.5fg的贝氏柯克斯体DNA ,可检测出 0 .0 0 1个鸡胚半数致死量 (CELD50 )的立克次体 ;以 10 0 0 0个CELD50 立克次体感染小鼠时 ,可于 2 4h在脾脏中检测出贝氏柯克斯体 ,检出率为 83.3% ;对人工模拟的灭菌牛奶、小鼠脏器研磨液、蜱组织研磨液、小鼠血液标本检测发现该法在牛奶和血液标本中的检测敏感性下降 3～ 4个滴度。结论 巢式PCR是快速检验贝氏柯克斯体的敏感特异的方法 ,经过进一步推广应用 ,有望应用于临床检验。
- 崔红张雪颖宫占威程聪陈香蕊
- 关键词：巢式聚合酶链反应贝氏柯克斯体
- 恙虫病东方体Karp株47kD蛋白基因的表达及DNA免疫初步研究
- 2003年
- 目的 观察恙虫病东方体Karp株相对分子质量 (Mr)为 47× 10 3 蛋白基因的DNA免疫效果。方法 将恙虫病东方体Karp株Mr 为 47× 10 3 的蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1( +) ,构建重组质粒pcDNA3.1 47。在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上 ,单独和将其与Mr 为 40× 10 3 重组蛋白联合免疫小鼠。在每次加强免疫之后 10d ,检测小鼠体液和细胞免疫反应。结果 质粒DNA和蛋白联合免疫组所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖反应均高于重组质粒DNA和蛋白单独免疫组 ,而第二次加强免疫后重组质粒诱导脾淋巴细胞的增殖情况则显著弱于其它免疫组 (P <0 .0 5 )。结论 重组质粒pcDNA3 .1 47和重组Mr 为 47× 10 3 蛋白在刺激小鼠免疫反应上具有相互加强作用。
- 牛东升陈香蕊陈唯军张雪颖陈梅玲崔红魏文进温博海
- 关键词：恙虫病蛋白基因DNA免疫
- 恙虫病东方体山西株56kD蛋白基因DNA疫苗的初步研究被引量：1
- 2003年
- 陈唯军陈香蕊牛东升张雪颖崔红魏文进陈梅玲
- 关键词：细胞免疫应答
- 山西恙虫病立克次体分型及其56-kD蛋白基因序列分析被引量：14
- 1998年
- 作者在我国新发现的山西恙虫病疫区病人血液中分离出3株恙虫病立克次体，SXh951，Sxh952，Sxh953。为明确其分类地位．对其进行了血清型，基因型和56－kD蛋白基因的部分序列分析。用免疫荧光抗体染色法将病人血清抗体与Karp,Gilliam．Kato株抗原反应．结果显示山西株与Gilliam型一致；用来自56－kD蛋白基因的引物扩增后，分别用限制性核酸内切酶Hinfl，HaeⅢ．Hhal消化DNA片段的多态性（PCR／RFLP）显示山西3株基因型一致，但均与Karp，Kato，Gilliam株的电泳图谱不同，显示为一独有的PCR／RFLP基因型；对Sxh951株56-kD蛋白基因片段扩增产物（1．2kb）进行DNA序列分析后．根据所推导氨基酸序列，比较Sxh951株与三个标准株氨基酸序列的同源性，发现Sxh951株与Karp、Kato和Gilliam株均有明显差异。对此，本实验室正在进一步研究，以便进一步确定其分类地位。
- 陈香蕊牛华张永国张雪颖于强
- 关键词：恙虫病立克次体血清型基因型
- 恙虫病东方体Sxh951株56kD蛋白的表达及其在ELISA中的应用
- 2004年
- 目的 构建含OrientiatsutsugamushiSxh95 1株 (Ot.Sxh95 1)相对分子质量 (Mr)为 5 6×10 3外膜蛋白基因 (sxh5 6 )的重组质粒pQE30 5 6 ,表达Mr5 6× 10 3蛋白并观察其在ELISA中的应用。方法 IPTG诱导sxh5 6重组质粒 ;观察SDS PAGE和免疫印迹结果 ;经Ni NTA亲和层析纯化后的重组蛋白分别与Ot.Gilliam、Ot.Karp、Ot.Kato感染鼠血清进行ELISA和免疫印迹检测。结果 SDS PAGE和免疫印迹检测显示有一Mr 约为 5 6× 10 3的特异蛋白带 ;ELISA和免疫印迹结果显示该重组蛋白只与Ot.Gilliam感染鼠血清呈阳性反应 ;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测小鼠血清抗体IgG ,特异性为 10 0 % ,敏感性 96 .6 7% ;检测人血清抗体IgG的敏感性为 88.0 8% ,特异性 96 .36 %。结论 表达的重组Sxh5 6蛋白具有良好的免疫反应性 ;其作为ELISA包被抗原 ,具有良好的特异性和敏感性。
- 陈唯军牛东升张雪颖陈梅玲温博海陈香蕊
- 关键词：恙虫病东方体克隆免疫印迹ELISA免疫反应性重组质粒
- 贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达被引量：2
- 2003年
- 目的 克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法 采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。结果 (1 )获得长约 760bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知com1序列相同。 (2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 7kDa处有表达条带。经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌体蛋白的 1 7 2 %。 (3)经分析 ,有较好的抗原性。 (4)表达菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于包涵体中。结论 贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达 。
- 魏文进崔红陈唯军牛东升张雪颖陈梅玲温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体克隆测序
- 河北省无极县杨坊小学生斑疹伤寒血清抗体调查及分型被引量：2
- 2003年
- 崔红张雪颖宫占威王建棉高方敏侯雨丰陈香蕊
- 关键词：小学生斑疹伤寒血清抗体
- 恙虫病东方体47kDa蛋白基因部分片段的克隆与表达被引量：2
- 2003年
- 目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot) 4 7kDa保护性抗原蛋白。 方法 采用PCR方法 ,从OtKarp株基因组DNA中扩增出 4 7kDa蛋白基因片段 ,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成重组质粒pBV -4 7。用该重组质粒转化E coli,转化子在 4 2℃诱导表达并对其鉴定。结果 (1)获得长约 14 30bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知 4 7kDa基因序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 4 0× 10 3 处有表达带 ;(3)经薄层扫描分析 ,目的蛋白占全菌蛋白的 19% ;(4)免疫印迹实验证明其具有免疫反应性。结论 获得了 4 7kDa基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了表达 ,表达产物具有免疫反应性。
- 牛东升陈香蕊张雪颖陈唯军陈梅玲崔红魏文进温博海
- 关键词：恙虫病东方体克隆
