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排序方式：

嗜水气单胞菌HBNUAh01外膜蛋白A基因在烟草叶片细胞中的瞬时表达被引量：2: 2012年; 【目的】从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)HBNUAh01中克隆外膜蛋白A(outer membrane proteinA,ompA)基因并在烟草(Nicotiana tabacum)叶片细胞中瞬时表达该蛋白。【方法】以嗜水气单胞菌HBNUAh01为模板进行嗜水气单胞菌外膜蛋白A(AhompA)基因片段的PCR扩增,并将其克隆到pEASY-Blunt Simple载体中以进行测序。测序正确的AhompA基因序列与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescentprotein,YFP)基因的表达载体pCAMBIA1300构建重组表达载体。将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101感受态细胞中,随后用阳性转化子转染烟草叶片细胞。使用激光扫描共聚焦成像系统(Confocal Laser Scanning Microscope)检测观察融合表达AhompA基因的黄色荧光蛋白并采用RT-PCR检测AhompA基因在烟草叶片中的转录情况。【结果】从嗜水气单胞菌HBNUAh01中克隆出大小为1032 bp的AhompA基因序列,并在烟草叶片中成功表达AhompA和YFP的融合蛋白。【结论】AhompA基因在烟草叶片细胞中的成功表达为进一步研究利用植物疫苗防治嗜水气单胞菌引起的水产动物疾病奠定了基础。; 张乐祎孙彩霞张亚宁杨俊青赵宝华; 关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白黄色荧光蛋白烟草植物疫苗

糖皮质激素受体α调节剂高通量筛选模型的建立及应用: 2014年; 目的建立不同分子作用机制的糖皮质激素受体α（GRα）调节剂高通量筛选模型，筛选新型糖皮质激素受体调节剂。方法克隆 GRα的配体结合域 LBD 和全长基因，构建哺乳动物细胞表达载体 pBIND-GAL4-GRα LBD、pTARGET-GRα，分别与已构建的含 GAL4响应元件5× UAS 的荧光素酶报告质粒 p5× UAS-luc 和含有4× GRE 的报告质粒pGRE-luc 共转染 HeLa 细胞，建立两种不同机制的报告基因细胞筛选方法，通过报告基因的表达检测化合物对 GRα受体转录调控功能的调节剂作用；利用实时定量 PCR 方法进一步验证化合物对糖皮质激素受体靶基因 mRNA 水平的调控作用。结果经过分别共转染表达质粒和报告质粒，GRα激动剂地塞米松可剂量依赖地诱导5× UAS-luc 和4× GRE-luc两个模型的荧光素酶的表达，在5× UAS-luc 模型中，最大上调倍数可达（9.0±0.2）倍，EC50值为（0.28±0.07）mmol/L， Z＇因子为0.52。在4× GRE-luc 模型中，最大上调倍数可达（3.2±0.3）倍，EC50值为（1.81±0.13）mmol/L，Z＇因子为0.49。利用模型 pBIND-GAL4-GRαLBD/p5× UAS-luc从2000多个微生物和植物来源的天然以及合成化合物中筛选得到1个微生物来源的天然产物黑麦酮酸 D，黑麦酮酸 D 对 GRα具有2-3倍的激动活性。进一步的定量PCR 的结果说明黑麦酮酸 D 能有效上调多个 GRα调控的靶基因的表达。结论两种报告基因筛选方法灵敏、稳定，可以用于 GRα调节剂的高通量筛选。; 孙彩霞张振亮郑海洲路新华郑智慧赵宝华段宝玲; 关键词：糖皮质激素受体Α 生物应答调节剂降血糖药高通量筛选

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孙彩霞

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