张慧敏
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：江南大学食品学院更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- β-甘露聚糖酶基因和木聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达
- 2012年
- 为实现β-甘露聚糖酶基因和木聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达,作者将经SalⅠ线性化的pPIC9K-xynⅡ电转化至工程菌GS115/Anman5A中,经G418浓度梯度筛选后获得能同时高产β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的双重重组子GS115/Anman5A-xynⅡ。SDS-PAGE显示目的蛋白的相对分子质量分别约为52 000,24 100。摇瓶发酵筛选出产酶活性最强的转化株,命名为GSMX2,随后对该菌株的表达条件进行初步优化,优化后的表达条件为:诱导时间120 h,培养基起始pH值为7.0,甘油添加量为1.5%,甲醇添加量为1.5%。在此培养条件下,产β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的活性分别达到37.1 U/mL和193.6 U/mL。
- 李剑芳赵顺阁邬敏辰张慧敏魏喜换
- 关键词：Β-甘露聚糖酶木聚糖酶共表达
- 木聚糖酶EvXyn11^(TS)耐热性与其N端二硫键的相关性分析被引量：8
- 2013年
- 【目的】以糖苷水解酶11家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS为研究对象,定点突变其编码基因Syxyn11,揭示EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性。【方法】对不同来源的、与EvXyn11TS一级结构相似度较高的若干11家族木聚糖酶进行多序列同源比对,发现只有耐热的EvXyn11TS在其N端存在一个二硫键(Cys5-Cys32);运用分子动力学模拟预测该N端二硫键存在与否对木聚糖酶热稳定性的影响。以人工合成的Syxyn11为母本,采用PCR技术将其编码Cys5的密码子TGT突变为编码Thr5的ACT,构建去除了N端二硫键的突变酶(EvXyn11M)的编码基因Syxyn11M;分别将Syxyn11和Syxyn11M在毕赤酵母GS115中进行表达,并分析表达产物EvXyn11TS和EvXyn11M的温度和pH特性。【结果】酶学性质研究结果表明:EvXyn11M的最适温度Topt由突变前的85℃降至70℃;EvXyn11TS在90℃的半衰期t1/290为32 min,而EvXyn11M在70℃的半衰期t1/270仅为8.0 min。【结论】运用分子动力学模拟预测了N端二硫键对EvXyn11TS耐热性的重要作用,并通过定点突变验证之,为其它与耐热EvXyn11TS一级结构相似的、11家族常温高比活性木聚糖酶的耐热性改造提供了新的技术策略。
- 闵柔李剑芳高树娟张慧敏吴静邬敏辰
- 关键词：木聚糖酶耐热性定点突变
- 圆弧青霉PG37脂肪酶的生物信息学分析
- 2010年
- 利用生物信息学软件对GenBank上登录的圆弧青霉PG37碱性脂肪酶(LipⅠ)进行预测和分析。结果表明,PG37LipⅠ全肽含多个疏水区域,无明显跨膜结构域,定位于胞外,N-末端20个氨基酸为信号肽;PG37LipⅠ成熟肽是等电点为6.16的疏水性稳定蛋白质,包含一个Lipase_3的结构域,属于α/β水解酶超家族,含磷酸化位点等多种功能性位点,具有脂肪酸代谢的功能;α-螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,在三级结构中,Ser132-Asp188-His2413个氨基酸残基组成酶活性中心。
- 李剑芳张慧敏邬敏辰
- 关键词：生物信息学碱性脂肪酶氨基酸序列
- 圆弧青霉脂肪酶基因序列的生物信息学分析被引量：7
- 2010年
- 从圆弧青霉PG37中克隆了碱性脂肪酶(Lip I)基因,并采用生物信息学分析了PG37 LipI基因携带的遗传信息。序列分析结果表明:Lip I DNA序列全长1 480 bp,不存在重复序列,含有5个内含子,5'端存在TATAbox和多个转录因子结合位点;cDNA序列全长1 128 bp,包含了转录起始位点、5'和3'非编码区及858 bp的开放阅读框架;Lip I编码区对TGC、GAC、TTC、CAC、AAG、AAC和TAC这7种密码子使用频率最高;比对LipI基因与Pichia pastoris基因组中的密码子使用频率,其中有21个密码子使用频率的比值相差较大。
- 张慧敏李剑芳邬敏辰
- 关键词：生物信息学碱性脂肪酶基因序列
- 脂肪酶氨基酸及其二联体与最适温度的相关性分析被引量：1
- 2011年
- 基于34条微生物脂肪酶序列,用多元逐步回归法分析了影响脂肪酶最适温度的氨基酸及其二联体。结果表明:与最适温度呈正相关性的氨基酸是Y,负相关性的有I、S、K;呈正相关性的氨基酸二联体有IR、KS、NY、SA、ST和YR,负相关性的有DK、DY、IS、KA、WS、YS和QI。通过对相关性氨基酸二联体在耐热和不耐热脂肪酶中空间位置的分析发现:与最适温度呈正相关性的氨基酸二联体多数位于α-螺旋区,且分布在酶蛋白表面;而呈负相关性的多数位于β-折叠区和无规则卷曲区,一般分布于酶蛋白内部,并常出现在多肽链的N或C端。
- 李剑芳张慧敏邬敏辰
- 关键词：脂肪酶热稳定性最适温度
- 圆弧青霉碱性脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达
- 2010年
- 目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达圆弧青霉碱性脂肪酶(Alkaline lipase,LipⅠ)。方法采用RT-PCR法从圆弧青霉PG37中扩增lipⅠ基因的cDNA片段,克隆入表达质粒pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-lipⅠ,转化入毕赤酵母GS115,筛选高拷贝重组子GS115/lipⅠ,甲醇诱导表达,并对诱导表达条件进行初步优化。结果 GS115/lipⅠ在培养基初始pH6.0,甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,于30℃诱导96h,发酵液上清中LipⅠ的活性为10.5U/ml。在培养基初始pH9.0,甲醇添加量1.0%的BMMY培养基中,24℃诱导120h,GS115/lipⅠ发酵液上清中LipⅠ的活性最高,达407U/ml。结论在毕赤酵母GS115中高效表达了具有活性的圆弧青霉LipⅠ。
- 谭中标邬敏辰张慧敏李剑芳
- 关键词：脂肪酶毕赤酵母基因表达
- 耐热木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质被引量：9
- 2013年
- 将一种11家族极端耐热木聚糖酶的密码子优化基因Syxyn11克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K-Syxyn11,将其经SalⅠ线性化后转化毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115。经G418筛选得到重组工程菌GS115/Syxyn11,用甲醇诱导表达重组木聚糖酶SyXyn11,酶活可达到17.74 U/mL。SDS-PAGE显示,SyXyn11的相对分子质量为31 000。SyXyn11的最适反应温度为85℃,在80℃以下稳定。最适反应pH为6.5,在pH 5.0~7.5范围内稳定。EDTA和大多数金属离子对重组酶的活性影响不大。结果表明Syxyn11成功在P.pastoris GS115中实现表达,而且重组木聚糖酶的耐热性并未改变。
- 张慧敏李剑芳邬敏辰魏喜换杨严俊
- 关键词：耐热木聚糖酶毕赤酵母异源表达酶学性质
- 木聚糖酶固态发酵培养基的优化
- 采用单因素试验和正交试验对宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YW-38菌株产木聚糖酶的固态发酵工艺条件进行了研究。结果表明,三角瓶优化培养基及发酵条件为:250mL三角瓶装8.0g基料(m(麸皮):m(玉...
- 邬敏辰张慧敏唐存多李剑芳
- 关键词：宇佐美曲霉木聚糖酶固态发酵正交试验
- 文献传递
