方欣
- 作品数：15 被引量：35H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨髓间充质干细胞对钙化血管平滑肌细胞的调控作用被引量：1
- 2016年
- 目的研究骨髓间充质干细胞（MSC）对钙化血管平滑肌细胞（CSMC）的调控作用。方法以地塞米松、p甘油磷酸钠、维生素C作为钙化诱导剂（OS）诱导血管平滑肌细胞（SMC）钙化从而建立CSMC模型，采用VonKossa染色法评估钙化情况。随后将MSC与CSMC以1：1的比例分别培养于12孔Transwell板上室和下室，建立MSC干预CSMC模型。继而将SMC分为4组：正常组：正常SMC；钙化诱导剂组：SMC＋OS；钙化细胞组：CSMC；MSC干预组：CSMC＋MSC。其中，钙化诱导剂组应用OS培养基培养，其余各组均使用普通培养基培养。干预14d后收集各组SMC，检测碱性磷酸酶（AKP）活性评估SMC钙化情况，Westernblot技术检测SMC中Wnt5a及β-catenin蛋白表达。结果与正常组比较，钙化诱导后CSMC矿化结节明显增加，且钙化诱导剂组及钙化细胞组AKP活性、Wnt5a及β-catenin蛋白表达水平均明显升高。钙化细胞组与钙化诱导剂组比较，AKP活性、Wnt5a及β-catenin蛋白表达水平有所降低。不论与钙化诱导剂组还是钙化细胞组比较，MSC干预组上述检测指标均明显降低。结论MSC与CSMC间接接触可降低CSMC钙化程度，其可能通过旁分泌途径阻断Wnt5a／β-catenin通路从而减轻钙化。
- 朱蒙恩方欣管思明
- 关键词：间质干细胞血管钙化
- 复方黄连制剂对动脉钙化的防治作用被引量：7
- 2010年
- 目的:研究复方黄连制剂(黄连、黄芩、黄柏、栀子和甘草)对华法令和维生素D3诱发大鼠血管中膜钙化的干预效应。方法:SD大鼠40只,随机分成对照组、钙化组、复方黄连制剂预防组、复方黄连制剂治疗组。钙化组与药物干预组均给予华法令和维生素D3诱导大鼠血管钙化模型,复方黄连制剂预防组在制作模型前3天给予复方黄连制剂,治疗组则在模型制作完成后给予复方黄连制剂。对照组给予生理盐水。4周后,比较各组Von Kossa染色及血管组织中钙含量,以及血管壁骨保护素(OPG)mRNA和蛋白表达。结果:32只大鼠最终进入结果分析。与对照组比较,钙化组Von Kossa染色显示血管中膜有明显钙沉积,血管组织中钙含量显著增高,分别为(608.32±42.29)μg/g,(1139.47±230.03)μg/g;血管壁OPGmRNA和蛋白表达则明显减少。预防及治疗应用复方黄连制剂,血管中膜钙化明显改善,血管壁钙含量显著降低,分别为(854.77±12.99)μg/g,(875.78±27.23)μg/g;血管壁OPGmRNA和蛋白也显著增加。与钙化组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:预防或治疗使用复方黄连制剂可能通过增加血管壁骨保护素水平,明显改善血管中膜钙化。
- 方欣王斌李伟管思明
- 关键词：复方黄连血管钙化骨保护素
- 老年人退行性主动脉瓣病发病机制的研究进展被引量：5
- 2009年
- 老年人退行性心脏瓣膜病即老年人钙化性心脏瓣膜病，主要表现为心脏瓣膜纤维化及钙盐沉着，导致瓣膜增厚变形及僵硬度增加，引起瓣膜狭窄或关闭不全。瓣膜受累以主动脉瓣为主，其次为二尖瓣，单纯三尖瓣及肺动脉瓣受累较少。在65岁及以上主动脉瓣狭窄患者中，约有90％以上是主动脉瓣钙化所致，美国退行性主动脉瓣狭窄已经成为心血管疾病的第三位病因。老年人退行性主动脉瓣病的病因尚未完全阐明，现对其发病机制新进展进行综述。
- 方欣管思明
- 关键词：退行性心脏瓣膜病老年人钙化性心脏瓣膜病主动脉瓣钙化心血管疾病
- 氯沙坦干预瞬时受体电位通道C亚族表达发挥抗心肌纤维化的作用被引量：3
- 2009年
- 目的:研究氯沙坦对心肌纤维化大鼠心脏组织瞬时受体电位通道C亚族(TRPC)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、心肌纤维化组和氯沙坦组,用药后4周测心室重量指数、心肌胶原容积分数及心脏组织中TRPC通道mRNA及蛋白表达。结果:心肌纤维化组左室重量指数,Ⅰ,Ⅲ型胶原容积分数显著高于假手术组;氯沙坦组上述指标较心肌纤维化组明显降低。3组心脏均有TRPC1表达,但心肌纤维化组TRPC1 mRNA及蛋白表达显著升高,氯沙坦组TRPC1表达则明显减少(P<0.01);TRPC3,TRPC6 mRNA与蛋白表达3组差异无显著性。结论:SD大鼠心脏存在TRPC1、TRPC3和TR-PC6蛋白表达,心脏TRPC1蛋白可能参与心肌纤维化过程,氯沙坦可能通过下调心脏TRPC1通道表达发挥抗心肌纤维化作用。
- 方欣柯琴梅王斌李伟管思明
- 关键词：氯沙坦心肌纤维化瞬时受体电位通道
- 大鼠主动脉中膜平滑肌细胞向成骨样细胞转化中骨保护素和核转录因子κB受体配体的变化及意义被引量：1
- 2012年
- 目的研究大鼠主动脉中膜平滑肌细胞（SMC）向成骨样细胞转化过程中骨保护素（OPG）／核转录因子WB（NFκB）受体的配体（RANKL）的变化及意义。方法体外培养大鼠主动脉SMC，随机分为成骨样细胞组、阿托伐他汀组和SMC组，每组再分为早、晚2个亚组。成骨样细胞组在正常SMC培养液中加入口磷酸甘油和维生素C，他汀组在加入以上物质的同时再加入阿托伐他汀。早期组在第7天，晚期组在第14天进行检测。采用VonKossa染色、钙离子含量测定、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、骨钙素的Westernblot检测来判定钙化情况；采用实时定量PCR检测OPG和RANKI。的mRNA表达情况。结果成骨样细胞组中钙离子含量、Vonkossa染色、ALP活性、骨钙素均高于他汀组（F=0．27、2．48、6．14、10．21，均P〈0．05）。sMC组无论早晚期均有大量的OPG表达（早期2．71土0．08，晚期2．69±0．02），但无RANKL表达；他汀组（早期3．52±0．05，晚期2．50±0．03）和成骨样细胞组（早期4．18±0．10，晚期2．30±0．11）的早期OPG表达上升而晚期下降，而两组RANKI。表达在钙化中一直呈升高趋势（分别由1.01±0．19升高至2．40±0．10及1．70±0．07升至3．22±0．11）。SMC组、他汀组、成骨样细胞组随钙化程度的加重，OPG／RANKL比值呈逐步下降趋势（F=52．93，2．33，均P〈0．05）；同一组中，晚期亚组随着钙化的加重，OPG／RANKL比值也较早期明显下降（F=38．71，1．74，均P〈0．05）。结论OPG／RANKL的比值与SMC向成骨样细胞的转化程度呈负相关，且阿托伐他汀具有抑制钙化的作用。
- 聂斌管思明方欣周韶琼
- 关键词：骨保护素血管中膜
- 慢病毒载体有效转移并感染心肌成纤维细胞被引量：2
- 2009年
- 背景：心肌成纤维细胞过度增殖、胶原合成增多是心肌纤维化的主要病理基础。慢病毒载体系统是一种新型的基因治疗转移系统,能够高效感染分裂期和非分裂期细胞。目的：建立慢病毒载体有效转移并表达于大鼠心肌成纤维细胞的方法,为利用慢病毒载体介导心肌成纤维细胞的基因靶向治疗奠定基础。设计、时间及地点：对比观察,实验于2008-08/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院老年病及上海吉凯公司实验室完成。材料：新生13日的SD大鼠乳鼠30只;Lentivirus载体、Enhanced Infection Solution（ENi.S）、Polybrene均为上海吉凯基因化学技术有限公司产品。方法：采用差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞,在DMEM加入3个梯度Lentivirus感染细胞,将病毒复感染指数为200,20,2的3组细胞,每组分别加入①Lentivirus。②在细胞感染时添加polybrene提高感染效率。③在上述基础上加入具有促进病毒感染的细胞增强液（Enhanced Infection Solution（ENi.S））,感染4d。主要观察指标：①心肌成纤维细胞形态特征。②倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况及感染效率。结果：成功建立心肌成纤维细胞培养模型,当慢病毒对心肌成纤维细胞的复感染指数为20时,可以达到80%的感染效率,然而必须在培养基内加入多聚阳离子转染试剂Polybrene,以提高慢病毒载体的感染效率。结论：慢病毒载体较易感染心肌成纤维细胞,是具有发展潜力的心肌成纤维细胞基因靶向治疗的新载体。
- 方欣管思明李伟王斌
- 关键词：慢病毒载体心肌成纤维细胞绿色荧光蛋白基因治疗
- 大鼠主动脉钙化过程中骨保护素/NF-κB配体的受体变化及意义被引量：1
- 2012年
- 目的:研究大鼠主动脉钙化过程中骨保护素(OPG)/NF-κB配体的受体(RANKL)变化及意义。方法:60只SD大鼠随机分为钙化组、他汀组和对照组,每组再分早、晚期两个亚组。钙化组给予华法林灌胃,他汀组给予华法林和阿托伐他汀灌胃。早期亚组在第17天、晚期亚组在第34天取大鼠主动脉,用Von Kossa染色,以碱性磷酸酶(ALP)活性检测与骨钙素Western Blot检测来判定钙化情况,用实时定量PCR检测OPG和RANKL的表达情况。结果:对照组无论早晚期都有大量的OPG表达,但没有RANKL表达。钙化组和他汀组早期OPG表达上升,晚期下降,而RANKL表达在钙化过程中一直呈升高趋势;对照组、他汀组、钙化组随着钙化程度的加重,OPG/RANKL比值呈逐步下降趋势(均P<0.05);同一组中,晚期亚组随着钙化的加重,OPG/RANKL比值也较早期明显下降(均P<0.05)。结论:OPG/RANKL的比值与主动脉钙化程度呈负相关,且阿托伐他汀具有抑制钙化的作用。
- 聂斌管思明方欣周韶琼
- 关键词：动脉钙化骨保护素
- 血管中骨髓间充质干细胞在不同钙化环境中的分化研究被引量：2
- 2014年
- 目的 研究血管中骨髓间充质干细胞在不同钙化环境中的分化. 方法 应用华法林,维生素K1及维生素D3制作血管钙化模型.造模成功后,分别取正常SD大鼠动脉和大鼠钙化动脉与骨髓间充质干细胞（MSC）共培养,分为3组：正常组：正常动脉＋MSC;钙化诱导剂组：钙化诱导剂（地塞米松＋β-甘油磷酸钠＋ VitC）＋正常动脉＋MSC;钙化组：钙化动脉＋MSC.各组均培养3周,实验第10天时采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测骨保护素（OPG）蛋白分泌情况,3周后倒置显微镜观察各组细胞形态变化,ELISA检测总蛋白含量和碱性磷酸酶（ALP）活性,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测各组孤独受体2（Ror2） mRNA表达. 结果 钙化组中MSC自发增殖向成骨样细胞分化.与正常组相比较,钙化组中总蛋白含量,骨代谢标志物ALP活性,OPG均明显升高,而Ror2 mRNA表达则显著低于正常组.钙化诱导剂组中MSC未向成骨样细胞分化,与正常组相比,ALP活性无明显差异,但总蛋白含量及OPG均升高,Ror2 mRNA表达则低于正常组.其中,钙化组Ror2 mRNA表达明显低于钙化诱导剂组. 结论 在已钙化血管中,MSC向成骨样细胞转化,加重血管钙化;而当血管尚未发生钙化时,钙化诱导剂未诱导MSC向成骨样细胞分化,而是向平滑肌细胞分化,修复血管,这可能与血管中Ror2表达有关.
- 管思明辛花平方欣王志敏
- 关键词：间质干细胞细胞分化钙代谢障碍
- 瞬时受体电位通道C亚族在心室重构中的作用被引量：1
- 2008年
- 方欣柯琴梅管思明
- 关键词：膜电位心室复建
- 骨桥蛋白与高血压血管重构被引量：9
- 2007年
- 血管重构既是高血压发生的病理基础也是高血压维持发展的结构基础。高血压结构改变与血管细胞的增殖、迁移有关。骨桥蛋白是细胞外基质中的一种重要的多功能糖蛋白,由多种组织细胞合成和分泌,参与介导细胞黏附,增殖和迁移。近年来发现其在动脉粥样硬化、经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄、高血压等疾病引起的血管重构过程中发挥重要调节作用。本文就骨桥蛋白在高血压血管重构中的作用作一综述。
- 方欣管思明
- 关键词：骨桥蛋白高血压
