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李裕昌: 作品数：50 被引量：61H指数：5; 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>

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Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证: 2014年; 目的：构建含Gluc-GFP的双标记系统，为研究病毒的体外标记和活体成像提供技术手段。方法根据文献报道合成split-GFP基因，将GFP拆分为G1-10与G11两部分，分别构建含G1-10与G11的pcDNA3．1表达质粒并通过荧光观察验证其相互作用。然后通过融合PCR技术将Gluc基因与G11基因通过Linker连接并插入到pcDNA3．1上，与G1-10表达质粒共转染293T细胞，测定细胞上清中Gluc荧光素酶的活性，并进行GFP荧光观察。为了更方便对病毒进行细胞水平的观测和筛选，利用慢病毒表达系统构建能稳定表达G1-10的MDCK细胞系，再向细胞系中转染G11质粒，通过红色荧光蛋白（ RFP）标记和嘌呤霉素的抗性对细胞系以及GFP活性进行筛选与验证。结果split-GFP基因共转染细胞后的荧光观察结果证实了split-GFP拆分策略的可行性。 Gluc-G11与G1-10质粒共转染后，细胞能够发出明亮的绿色荧光，上清中荧光素的活性也较高。在此基础上，建立的G1-10 MDCK细胞系能够稳定表达出G1-10，用G11质粒转染该细胞系后，可检测到GFP荧光。结论成功构建了含Gluc-GFP的双标记系统，split-GFP拆分策略可行，Gluc-G11不会影响荧光素酶Gluc的生理活性；G1-10细胞系的稳定表达可简化双标记系统的制备，为在细胞和活体水平研究病毒致病机制提供技术手段。; 张雪松户义康晓平张雨李裕昌吴晓燕杨银辉; 关键词：双标记分子成像病毒研究

VereFlu芯片检测H7N9亚型流感病毒的效果评价: 2014年; 目的:验证Vere Flu芯片检测H7N9亚型流感病毒的特异性和准确性,为应对流感疫情提供新的实验室检测方法。方法:对流感病毒H7N9亚型、H5N1亚型、H1N1亚型的病毒培养物及10份H7N9感染疫区的鸡肛拭子标本,提取样本的RNA,采用Vere Flu芯片法和Realtime RT-PCR两种检测方法。评估Vere Flu芯片的检测效果。结果:对于3种病毒培养物的检测,Vere Flu芯片均检测到不同亚型的特定阳性信号,每种亚型病毒均未出现交叉反应信号,表明Vere Flu芯片具有较好的检测特异性;10份未知标本中有8份检测流感病毒阴性,2份检测流感病毒阳性,编号为106号及503号,其中106号检测到H7及H9亚型的阳性信号,503号仅检测到H9亚型的阳性信号。Realtime RT-PCR对10份未知标本进行H7亚型核酸检测,从两份流感阳性标本中均检测到H7亚型核酸,高通量测序证实106号和503号标本中均存在H7及H9亚型核酸。结论:Vere Flu芯片可用于不同型别流感病毒的检测和分型,包括新爆发的H7N9亚型病毒同样适用,但检测H7N9亚型的灵敏度低于Realtime RT-PCR法。; 李裕昌张雨吴晓燕李佳明郑旸张晓松张雪松康晓平; 关键词：基因芯片

一种基于RPA技术的马尔堡病毒检测试剂盒及其应用: 本发明公开了一种基于RPA技术的马尔堡病毒检测试剂盒及其应用。通过实验证明：本发明的马尔堡病毒的RPA引物和探针可有效扩增靶基因，特异性达100％，灵敏度为1×10<Sup>2</Sup>copies/反应，病毒可达到与...; 杨银辉康晓平吴晓燕李裕昌姜涛曹雪峰李靖户义; 文献传递

TBEV对人神经细胞致病性的实验研究被引量：1: 2012年; 目的确定蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK－N－SH，取不同时间点的细胞培养上清，分别采用real－timeRT－PCR方法及空斑测定的方法测定病毒滴度，以确定TBEV在SK－N－SH细胞中的复制增殖情况；同时进行细胞形态观察及免疫荧光检测，以确定TBEV感染后的SK－N－SH细胞形态变化。结果TBEV感染SK－N－SH细胞后，可进行大量复制增殖，感染后3d，病毒滴度达到峰值，可达2．92×10＾7PFU／ml，感染细胞产生明显的形态改变，免疫荧光法可检测到细胞内的病毒粒子。结论TBEV可在人神经母瘤细胞SK－N－SH中大量复制增殖，并可造成细胞明显的形态改变，因此人神经母瘤细胞SK-N-SH可以作为TBEV培养良好的细胞模型。; 魏婧靖李裕昌吴晓燕司炳银张雨李靖户义祝庆余杨银辉康晓平; 关键词：蜱传脑炎病毒神经细胞

中医药治疗结肠黑变病的Meta分析被引量：5: 2018年; 目的运用循证医学方法评价中医药治疗结肠黑变病的临床疗效。方法全面检索2017—10以前国内外发表的中医药治疗结肠黑变病的临床试验文献,选择随机或半随机对照试验,运用Jadad量表对纳入的文献文献质量进行评估,用Rev Man 5.0软件对研究结果进行Meta分析,用漏斗图分析发表性偏倚。结果共13个文献满足纳入标准,均属于低质量文献。与对照组相比,中医药治疗结肠黑变病的临床总有效率[比值比(OR)=4.94,95%可信区间(CI)(3.33,7.32),Z=7.96,P<0.000 01]及肠镜下疗效[OR=4.20,95%CI(2.91,6.04),Z=7.71,P<0.000 01]更佳。漏斗图图形不对称,考虑存在发表性偏倚。结论中医药治疗结肠黑变病在缓解症状、改善肠黏膜病理状态方面疗效明确,与西医相比有一定优势。但所纳入的文献质量总体较低,且样本量小,可能存在发表性偏倚,影响论证的真实性,现有的证据还不具有充足的说服力。; 李红李裕昌李方玲; 关键词：结肠疾病中医疗法 META分析

检测蜱传脑炎病毒的单克隆抗体及其试剂盒: 本发明公开了一种检测蜱传脑炎病毒的单克隆抗体及其试剂盒。本发明所提供的检测蜱传脑炎病毒的单克隆抗体2B5由保藏号为CGMCC？No.8059的杂交瘤细胞株2B5产生,单克隆抗体2A10由保藏号为CGMCC？No.8060...; 李裕昌康晓平杨银辉吴晓燕张雨李靖户义祝庆余张晓松; 文献传递

一种重组增强型绿色荧光蛋白H5N1亚型流感病毒及其应用: 本发明公开了一种重组H5N1亚型流感病毒及其应用。该重组H5N1亚型流感病毒的基因组由如下a）和b）的8个RNA片段组成：a）与野生型H5N1亚型流感病毒基因组相同的7个RNA片段：编码PB2蛋白的RNA片段1、编码PB...; 李靖户义杨银辉祝庆余秦成峰孙伟康晓平吴晓燕韩鹏飞张雨李裕昌李佳明; 文献传递

检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒: 本发明公开了一种检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒。本发明提供的试剂盒，包括6种捕获抗体，每种所述捕获抗体为将抗体与点样液混合得到的混合液，每种所述捕获抗体中所述抗体在对应的所述捕获抗体溶液中的浓度...; 康晓平李裕昌杨银辉林方范丽魏婧靖户义李靖常国辉祝庆余; 文献传递

重组酶介导扩增方法快速检测寨卡病毒被引量：5: 2018年; 目的建立寨卡病毒一步法重组酶聚合酶等温扩增检测方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),为国境口岸提供现场快速检测方法。方法根据寨卡病毒基因组保守片段NS2a设计引物和探针,建立寨卡病毒RT-RAA检测方法。用合成的含有寨卡病毒基因序列的质粒测试方法的重复性和灵敏度,用登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒核酸测试方法的特异性。结果寨卡病毒一步法RT-RAA检测时间短(<20min),对寨卡病毒阳性质粒检测下限为10~3拷贝/μl,重复性好,与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒无交叉反应。结论建立的寨卡病毒一步法RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适用于口岸现场快速检测。; 袁帅郑夔洪烨孙芳芳黄吉城李小波戴俊师永霞康晓平李裕昌

虫媒病毒和呼吸道病毒Array-ELISA检测方法的建立: 背景:虫媒病毒是一些通过吸血节肢动物叮咬敏感脊椎动物而引起的自然疫源性疾病及人兽共患病的一群病毒，包括14个病毒科，500多种病毒，其中130余种可引起人、畜疾病，主要表现为发热、皮疹、关节痛、出血热和脑炎等。近年来，随...; 李裕昌; 关键词：虫媒病毒呼吸道病毒; 文献传递

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