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一种新的纤溶酶原激活反应动力学研究方法被引量：5: 2001年; 在溶栓研究中 ,纤溶酶原激活剂 (plasminogen activator,PA)激活纤溶酶原 (plasminogen,Plg)反应的动力学常数的测定占有重要地位 .在前人的研究中 ,虽然进行了这项实验 ,但是并未给出一个方便、快捷的测定方法 .所以建立一种更准确 ,更适合一般的实验室条件的 PA分子激活 Plg反应动力学常数的测定方法是必要的 .在对该反应进行数学分析的基础上 ,得到由可测量表示的纤溶酶 (plasmin,Plm)生成速度 (v(Plm) )的计算公式 ,由 v(Plm)及相应已知量可进一步推导出 Km、kcat的表达式 ,最终测得相应动力学常数 .用这种方法测定的由甲醇酵母 (pichia pastoris)表达的人单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (human single chain urokinase- PA,scu- PA)激活 Plg的反应的 Km=0 .648μmol·L-1,kcat=0 .0 62 6s-1,与文献报导相符 (Km=0 .4～ 1 .1 μmol· L-1,kcat=0 .0 2～ 0 .0 93) s-1,说明此方法是可靠的 .又因该法只需相应底物及酶标仪且为连续测定 ,所以十分简便 .; 党昕纪建国茹强杨晶鑫俞梅敏茹炳根; 关键词：纤溶酶原动力学常数纯化

单链尿激酶型纤溶酶原激活剂Kringle结构域催化功能探讨被引量：6: 2001年; Kringle(K)结构域广泛存在于与凝血和纤溶相关的各种因子中 .虽然 K结构域在一级结构上是一种比较保守的结构域 (与其他结构域相比 ) ,但是 K结构域的功能在各种因子中的作用有很大的区别 .为探讨单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (scu- PA)的 K结构域功能 ,构建了在 scu- PA的 K结构域的 1 1 8位 Gly与 1 1 9位 Leu之间插入 PRGDWR序列的突变体 (称为 insert mutant B,In B) ,并测定了野生型 scu- PA与 In B的纤溶相关反应的动力学常数 . scu- PA与 In B水解 S- 2 4 4 4反应的 Km 值无明显变化 (分别为 60 .4与 56.8μmol·L-1) ,而 In B的 kcat值 (0 .33s-1)比 scu- PA的 kcat值 (7.31 s-1)降低很多 ;In B激活纤溶酶原反应的 Km 值 (0 .397μmol· L-1)比 scu- PA Km 值(0 .648μmol·L-1)降低 40 % ,但 kcat值 (0 .0 1 65s-1)比 scu- PA的 kcat值 (0 .0 62 6s-1)降低 74% .以上结果说明 :K结构域主要与反应活性相关 ,而与酶及底物的亲和性无关 .; 纪建国茹强杨晶鑫俞梅敏茹炳根; 关键词：KRINGLE 结构域

纤维蛋白对尿激酶原激活纤溶酶原反应动力学的影响被引量：1: 2001年; 反应体系中存在的纤维蛋白 (fibrin)对尿激酶 (UK)、scu PA以及组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)激活纤溶酶原 (plasminogen)的反应有不同的作用 :UK、t PA激活 plasminogen的反应可被反应体系中存在的fibrin所加强 ;fibrin对scu PA激活 plasminogen反应的动力学常数无明显影响 ;但对小分子质量scu PA与单链抗体的嵌合分子激活 plasminogen的反应起明显的抑制作用 .为确定反应体系中存在的fibrin对scu PA的K区插入突变体 InB激活plasminogen反应的影响 ,测定了在反应体系中存在fibrin的情况下的InB激活 plasminogen反应的Kfibrinm 以及kfibrincat .Kfibrinm =4 2 μmol·L-1,远远大于无fibrin时的Km=0 379μmol·L-1,说明有fibrin存在时突变体InB与天然底物 plasminogen的亲和性降低了 .kfibrincat =0 10 7s-1,也远远大于无fibrin时kcat=0 0 16 5s-1,说明有fibrin存在时突变体InB对plasminogen的反应活性增强了 .原因可能是 :与fibrin结合的 plasminogen的构象发生了有利于被纤溶酶原激活剂水解的变化 .; 党昕杨晶鑫茹强袁洪生茹炳根; 关键词：纤维蛋白纤溶酶原动力学

人三叶因子3体外拮抗顺铂诱导HCT116细胞凋亡的蛋白质组学研究: 顺铂可引起消化道细胞凋亡,我们以差异展示蛋白质组学方法研究顺铂造成的HCT116细胞凋亡毒性以及TFF3保护细胞拮抗凋亡的机理。对未经处理、TFF3处理、顺铂处理以及TFF3+顺铂处理的四组HCT116细胞进行蛋白质组的...; 方敏茹强王洪云茹炳根; 文献传递

PRGDWR-尿激酶原双功能嵌合分子的性质研究被引量：3: 2001年; 为赋予单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (singlechainurokinase typeplasminogenactivator,scu PA ,尿激酶原 )以抗血小板聚集的功能 ,在scu PA的kringle区 118位Gly与 119位Leu之间插入PRGDWR序列 (insertmutantB ,InB) .利用甲醇酵母 (Pichiapastoris)进行分泌表达 ,经金属离子螯合亲和层析与S强阳离子交换层析 ,得到纯蛋白 .实验测定InB对人工合成底物S 2 44 4的酰胺解活性为 5 90 0IU/mg ,动力学常数为 :KInBm ,S 2 4 44 =5 6 8μmol·L-1,kInBcat,S 2 4 44 =0 33s-1;水解天然底物 plasminogen的动力学常数为 :KInBm ,plg=0 397μmol·L-1,kInBcat,plg=0 0 16 4s-1.InB激活 plasminogen的反应在有fibrin存在条件下InB的活性为无fibrin条件下的 46 3% .该突变体在体外激活 plasminogen的活性与同一系统表达的野生型scu PA基本相同 .该突变体表现出较强的抗血小板聚集活性 ,IC50 =12 7μmol·L-1,而野生型scu PA无此功能 .实验表明scu PA的K区插入突变体InB是一种极具潜力的双功能溶栓分子 .; 党昕杨晶鑫茹强茹炳根; 关键词：尿激酶原血小板聚集

RGD多肽与尿激酶原嵌合分子的构建及性质研究被引量：1: 2001年; 利用定点突变及DNA重组技术 ,将编码RGD多肽 (GPRGDWRMLG)的双链DNA片段 ,定向插入到相对于编码尿激酶原的Gly118 Leu119的cDNA分子中 ,构建了尿激酶原的嵌合体基因 ,并在甲醇酵母表达系统中进行了分泌表达。经过Zn2 + 螯合柱及SP阳离子柱两步层析后 ,目的蛋白质被纯化。经纤维蛋白平板测活 ,嵌合分子的比活为 6 5 0 0 0IU mg。嵌合分子与尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4作用的催化效率偏低 ,但具有较强的抑制血小板聚集的功能 ,抑制常数IC5 0为 2 1μmol L。以上结果表明嵌合分子不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 ,很可能是一种具有发展前景的双功能溶栓; 焦建伟茹强俞梅敏茹炳根; 关键词：尿激酶原 RGD多肽溶栓抗血小板聚集嵌合分子

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茹强