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减毒沙门氏菌及其应用: 本发明公开了减毒沙门氏菌及其应用。本发明应用基因敲除技术，删除掉沙门氏菌(Salmonella pullorum)的体内定植基因和主要毒力基因，获得了双基因缺失的减毒沙门氏菌SM091-DED株，其微生物保藏号是：CGM...; 刘思国刘慧芳王秀梅于申业王牟平司薇杨志

副猪嗜血杆菌菌影的制备被引量：11: 2011年; 为研制副猪嗜血杆菌(H.parasuis)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建H.parasuis打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入E.coliβ2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入H.parasuis 5型菌株中。将含有打孔质粒的H.parasuis在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备H.parasuis菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。; 胡明明常月红张艳禾司薇谢芳于申业刘慧芳刘思国沈楠王春来; 关键词：副猪嗜血杆菌

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备被引量：11: 2008年; 本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-E.coli穿梭载体pGZRS-18中,构建胸膜肺炎放线杆菌打孔质粒。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌中,含有打孔质粒的胸膜肺炎放线杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,升温42℃诱导E基因的表达,制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本试验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂奠定了基础。; 常月红刘思国王春来刘慧芳司薇彭玮王聃赫明雷杜艳芬; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌

重排噬菌体E基因、含有该基因的打孔质粒载体及其应用: 本发明公开了一种经基因重排后获得的PhiX174噬菌体mE基因以及含有该基因的打孔质粒载体及其构建方法，本发明还进一步涉及该孔质粒载体在制备菌蜕中的用途，属于基因工程领域。本发明利用基因重排技术，对PhiX174噬菌体E...; 刘思国常月红刘慧芳王春来彭伟司薇; 文献传递

减毒沙门氏菌及其应用: 本发明公开了减毒沙门氏菌及其应用。本发明应用基因敲除技术，删除掉沙门氏菌(Salmonella pullorum)的体内定植基因和主要毒力基因，获得了双基因缺失的减毒沙门氏菌SM091-DED株，其微生物保藏号是：CGM...; 刘思国刘慧芳王秀梅于申业王牟平司薇杨志; 文献传递

大肠杆菌“菌影”的制备被引量：4: 2009年; 通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。; 彭玮王聃刘思国常月红王春来刘慧芳司薇赫明雷杜艳芬; 关键词：大肠杆菌

放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测被引量：1: 2010年; 为了筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白在肺泡上皮细胞上的作用受体,应用酵母双杂交技术构建诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,进行酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果表明,成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。表明pGBKT7-omp可应用在酵母双杂交系统中,用于寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质。; 倪宏波刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳王春来司薇常月红彭玮王聃赫明雷; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白自激活作用

猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建: 2009年; 本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系。利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证。结果表明,经过加入标签的Mini-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.coliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株。这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。; 赫明雷刘慧芳刘思国司薇王春来杨金国杜艳芬王聃; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌转座子

重组胎儿弯杆菌N端表面膜蛋白及其编码基因和应用: 本发明公开了胎儿弯杆菌N端表面膜重组蛋白及其编码基因，本发明还公开了该重组蛋白的制备方法及其在牛胎儿弯杆菌病血清学诊断中的应用。本发明对位于胎儿弯杆菌表面蛋白N端1398bp的基因进行了表达，所表达的可溶性蛋白(rSap...; 刘思国赵海玲刘慧芳王春来司薇; 文献传递

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司薇