吴宇杰
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 快速检查寡聚DNA片段序列的方法
- 1996年
- 以质粒为模板，用待测寡聚ＤＮＡ片段和通用测序引物进行ＰＣＲ（聚合酶链式反应），ＰＣＲ片段经纯化后插入到ｐＵＣ－１８或ｐＵＣ－１９的多克隆位点中，然后用通用测序引物测定重组质粒上待测寡聚ＤＮＡ片段，即可清晰、正确地知道它的序列．
- 朱榴琴吴宇杰
- 关键词：DNA
- 枯草蛋白酶E的定点突变及其对酶性质的影响被引量：4
- 2000年
- 用定点突变的方法研究S2 2 1C/P2 2 5A ,N118S/S2 2 1C/P2 2 5A ,D6 0N/S2 2 1C/P2 2 5A和Q10 3R/S2 2 1C/P2 2 5A突变对蛋白酶活性 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比的影响。结果表明 :S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比枯草蛋白酶E低 730 0 0多倍 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比是Subtiligase的 3倍 ;N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性和酯酶活性分别比S2 2 1C/P2 2 5A突变下降 3 6倍和 15倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 4倍 ,同时增加变体酶的热稳定性 ;D6 0N/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体下降 15倍 ,但对酯酶活性几乎没有影响 ,酯酶与蛋白酶活性之比增加 14倍 ,分别是S2 2 1C/P2 2 5A突变体和Subtiligase的 3 3倍和 10 3倍 ;但是 ,Q10 3R/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体增加 5倍 ,酯酶活性下降5 5倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 10 0 0倍。
- 杨永华蒋岚杨胜利吴宇杰朱榴琴
- 关键词：定点突变蛋白酶活性酯酶活性
- 枯草蛋白酶E的突变体被引量：3
- 2000年
- Ser236位于横贯枯草蛋白酶E的α螺旋末端,远离催化活性中心,Ser236的突变不会对酶的活性产生大的影响。用定点突变的方法对枯草蛋白酶E的基因进行改造引入Ser236Cys,可能会形成分子间二硫键,有利于提高酶的稳定性。Ser236Cys变体酶(BP1)活性是野生型蛋白酶E的15倍,热稳定性提高3倍;进一步在其他位点引入突变的变体酶BU1(A1a15Asp/Gly20His/Ser236Cys)和BW1(Ser24His/Lys27Asp/Ser236Cys)活性都比野生型蛋白酶E低,但BW1的稳定性稍高于野生型蛋白酶E。
- 杨永华吴宇杰蒋岚朱榴琴杨胜利
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶蛋白质工程稳定性
