朱榴琴
- 作品数：13 被引量：13H指数：3
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- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 无PPI活性的trigger factor突变体的制备
- tigger factor是一种具有分子伴侣活性的肽脯氨酰顺反异构酶(PPI);体内和体外研究表明teigger factor具有促进蛋白质和新生肽链折叠的能力,但是这种能力是源自于trigger factor的肽脯氨酰...
- 刘川鹏黄国昌李震宇朱榴琴周筠梅
- 文献传递
- 枯草杆菌蛋白酶突变体的纯化和晶体生长被引量：1
- 1996年
- 应用基因工程手段，获得了枯草杆菌蛋白酶Ｅ的双突变体基因（Ｍ２２２Ａ，Ｎ１１８Ｓ），此基因在枯草芽孢杆菌中表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶，含Ｍ２２２，Ｎ１１８Ｓ碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析柱，再在ＦＰＬＣ层析系统上用Ｈｉｌｏａｄ２６／１０ＳＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ阳离子交换柱分离得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯的蛋白酶样品。突变体酶的等电点为ｐＨ８．９，分子量为２７４００，用四肽底物测得的动力学参数也有较大的变化。对该突变体酶进行了晶体生长研究，获得了较大的单晶体。
- 林峥朱榴琴马建华毕汝昌
- 关键词：枯草杆菌枯草杆菌蛋白酶突变体晶体
- 在双链DNA上直接进行的多点突变
- 1990年
- 基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体性能以外,
- 朱榴琴申同健
- 关键词：双链DNA多点突变
- 快速检查寡聚DNA片段序列的方法
- 1996年
- 以质粒为模板，用待测寡聚ＤＮＡ片段和通用测序引物进行ＰＣＲ（聚合酶链式反应），ＰＣＲ片段经纯化后插入到ｐＵＣ－１８或ｐＵＣ－１９的多克隆位点中，然后用通用测序引物测定重组质粒上待测寡聚ＤＮＡ片段，即可清晰、正确地知道它的序列．
- 朱榴琴吴宇杰
- 关键词：DNA
- 枯草杆菌碱性蛋白酶Ki2基因的序列测定及M222A定点突变
- 1996年
- 含有枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ２基因的１９ｋｂＤＮＡ片段用限制酶切成几个小片段，将这些片段分别插入Ｍ１３ｍｐ１８或Ｍ１３ｍｐ１９中，用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶Ｅ相比较，在结构基因部分仅有８个碱基不同，由此而导致两个氨基酸的差异。此１９ｋｂ的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＥ２，得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌ＤＢ１０４，结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ２基因在ＤＢ１０４中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将Ｋｉ２蛋白酶的２２２位甲硫氨酸突变成丙氨酸，突变后的Ｋｉ２蛋白酶具有抗氧化性。
- 朱榴琴赵玉凤
- 关键词：DNA序列定点突变抗氧化性
- 枯草蛋白酶E的定点突变及其对酶性质的影响被引量：4
- 2000年
- 用定点突变的方法研究S2 2 1C/P2 2 5A ,N118S/S2 2 1C/P2 2 5A ,D6 0N/S2 2 1C/P2 2 5A和Q10 3R/S2 2 1C/P2 2 5A突变对蛋白酶活性 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比的影响。结果表明 :S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比枯草蛋白酶E低 730 0 0多倍 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比是Subtiligase的 3倍 ;N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性和酯酶活性分别比S2 2 1C/P2 2 5A突变下降 3 6倍和 15倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 4倍 ,同时增加变体酶的热稳定性 ;D6 0N/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体下降 15倍 ,但对酯酶活性几乎没有影响 ,酯酶与蛋白酶活性之比增加 14倍 ,分别是S2 2 1C/P2 2 5A突变体和Subtiligase的 3 3倍和 10 3倍 ;但是 ,Q10 3R/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体增加 5倍 ,酯酶活性下降5 5倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 10 0 0倍。
- 杨永华蒋岚杨胜利吴宇杰朱榴琴
- 关键词：定点突变蛋白酶活性酯酶活性
- Trigger Factor体内分子伴侣作用与其PPlase活力无关而作用效果与其同底物的比例相关
- 大肠杆菌Trigger Factor是一种多功能蛋白,既是PPlase又是分子伴侣蛋白,并与新生肽链相互作用,帮助折叠.TF的这种特性可以用于防止大肠杆菌中表达的重组蛋白聚集形成包含体,提高活性重组蛋白的回收率.为了研究...
- 李震宇刘川鹏朱榴琴静国忠周筠梅
- 文献传递
- 枯草蛋白酶E的突变体被引量：3
- 2000年
- Ser236位于横贯枯草蛋白酶E的α螺旋末端,远离催化活性中心,Ser236的突变不会对酶的活性产生大的影响。用定点突变的方法对枯草蛋白酶E的基因进行改造引入Ser236Cys,可能会形成分子间二硫键,有利于提高酶的稳定性。Ser236Cys变体酶(BP1)活性是野生型蛋白酶E的15倍,热稳定性提高3倍;进一步在其他位点引入突变的变体酶BU1(A1a15Asp/Gly20His/Ser236Cys)和BW1(Ser24His/Lys27Asp/Ser236Cys)活性都比野生型蛋白酶E低,但BW1的稳定性稍高于野生型蛋白酶E。
- 杨永华吴宇杰蒋岚朱榴琴杨胜利
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶蛋白质工程稳定性
- V92A突变改变了鸡心脱血红素细胞色素c的折叠倾向性
- 1995年
- 鸡心脱血红素细胞色素c具有较其它种类脱血红素细胞色素c更强的自发折叠倾向性,部分折叠的鸡心脱血红素细胞色素c具有蛋白质折叠中间体的性质.
- 童俊超朱榴琴杨福愉
- 关键词：细胞色素突变体
- 枯草杆菌蛋白酶E的156和165位突变被引量：3
- 1997年
- 应用定点突变方法 ,在M2 2 2A突变的枯草杆菌蛋白酶E基因上进行E1 56S和V1 65I定点突变 .将突变基因插入大肠杆菌 枯草杆菌穿梭质粒 pBE 2中 ,在碱性和中性蛋白酶缺陷型的枯草杆菌DB1 0 4中进行表达 ,得到突变种 (M 2 2 2A ,E1 56S)和 (M 2 2 2A ,E1 56S ,V1 65I)蛋白酶E .性质测定表明 ,E1 56S突变使蛋白酶比活力增加 90 % ,并不影响酶的热稳定性和抗氧化性 .而V1
- 陈为东马建华朱榴琴
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶E稳定性突变
