蒋岚
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 非水介质中稳定的多肽连接酶及制法和用途
- 本发明提供了一种衍生自枯草蛋白酶E的变体酶,它含有Ser221Cys、Met222Ala和Pro225Ala突变。较佳地,它还含有选自下组的突变:Asn118Ser和Ser24His/Lys27Asp/Ser236CYs...
- 杨永华蒋岚杨胜利
- 文献传递
- 青霉素G酰化酶操纵子的负调控因子的研究被引量：2
- 1998年
- 青霉素Ｇ酰化酶（ＰＡ）操纵子的调节基因（ｐａｃＲ）存在于青霉素Ｇ酰化酶结构基因（ｐａｃ）内部Ｄｒａ１Ｔａｑ１一段约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段内，此片段内含有２个ＯＲＦ。２个ＯＲＦ及其突变体分别克隆到ｐＵＣ１８得到一系列重组质粒，用这些重组质粒转化青霉素Ｇ酰化酶产生菌Ｅ．ｃｏｌｉＤ８１６，测定克隆片段对ＰＡ表达的影响。如果克隆片段含有具功能的ｐａｃＲ，诱导剂苯乙酸（ＰＡＡ）不能使由高拷贝ｐａｃＲ表达的阻抑物全部失活，部分阻抑物结合ｐａｃ操纵基因，阻碍ＲＮＡ聚合酶对ｐａｃ的转录，因此ＰＡ的表达量降低。结果表明，阻抑物是由ｐａｃ结构基因内部的ＯＲＦ２编码的蛋白因子，ｐａｃＲ即ＯＲＦ２。ＲＮＡＤＮＡ杂交实验证实了ｐａｃＲ在转录水平阻抑ｐａｃ的表达。
- 王宇澄蒋岚杨胜利
- 关键词：青霉素G酰化酶调节基因定点突变操纵子
- 枯草蛋白酶E的突变体被引量：3
- 2000年
- Ser236位于横贯枯草蛋白酶E的α螺旋末端,远离催化活性中心,Ser236的突变不会对酶的活性产生大的影响。用定点突变的方法对枯草蛋白酶E的基因进行改造引入Ser236Cys,可能会形成分子间二硫键,有利于提高酶的稳定性。Ser236Cys变体酶(BP1)活性是野生型蛋白酶E的15倍,热稳定性提高3倍;进一步在其他位点引入突变的变体酶BU1(A1a15Asp/Gly20His/Ser236Cys)和BW1(Ser24His/Lys27Asp/Ser236Cys)活性都比野生型蛋白酶E低,但BW1的稳定性稍高于野生型蛋白酶E。
- 杨永华吴宇杰蒋岚朱榴琴杨胜利
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶蛋白质工程稳定性
- 枯草蛋白酶E的定点突变及其对酶性质的影响被引量：4
- 2000年
- 用定点突变的方法研究S2 2 1C/P2 2 5A ,N118S/S2 2 1C/P2 2 5A ,D6 0N/S2 2 1C/P2 2 5A和Q10 3R/S2 2 1C/P2 2 5A突变对蛋白酶活性 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比的影响。结果表明 :S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比枯草蛋白酶E低 730 0 0多倍 ,酯酶活性与蛋白酶活性之比是Subtiligase的 3倍 ;N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性和酯酶活性分别比S2 2 1C/P2 2 5A突变下降 3 6倍和 15倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 4倍 ,同时增加变体酶的热稳定性 ;D6 0N/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体下降 15倍 ,但对酯酶活性几乎没有影响 ,酯酶与蛋白酶活性之比增加 14倍 ,分别是S2 2 1C/P2 2 5A突变体和Subtiligase的 3 3倍和 10 3倍 ;但是 ,Q10 3R/N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变使蛋白酶活性比N118S/S2 2 1C/P2 2 5A突变体增加 5倍 ,酯酶活性下降5 5倍 ,酯酶与蛋白酶活性之比下降 10 0 0倍。
- 杨永华蒋岚杨胜利吴宇杰朱榴琴
- 关键词：定点突变蛋白酶活性酯酶活性
- 新型枯草杆菌蛋白酶及制法和用途
- 本发明提供了衍生自枯草蛋白酶E的变体酶,它含有Ser226CYs突变。它还含有选自下组的突变:Ala15Asp/Gly20His和Ser24His/Lys27Asp。本发明的变体酶热稳定性以及在非水介质中的稳定性都显著提...
- 杨永华蒋岚杨胜利
- 文献传递
- 尿激酶原proUK的表达
- 该文就启动子,密码子、宿主和质粒稳定性等对proUK表达的影响进行了探讨.
- 蒋岚
- 关键词：尿激酶
- 青霉素G酰化酶调节基因的定位
- 1998年
- 为了定位青霉素Ｇ酰化酶的调节基因，从质粒ｐＰＡ６克隆了一系列青霉素Ｇ酰化酶基因（ｐａｃ）的片段，将这些重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉＤ８１６，测定克隆片段对ｐａｃ表达的影响。如果克隆片段含有完整的调节基因（ｐａｃＲ），诱导剂不能使由高拷贝ｐａｃＲ表达的阻抑物失活，部分阻抑物结合ｐａｃ操纵基因，阻碍ＲＮＡ聚合酶对ｐａｃ的转录，因此ｐａｃ的表达量降低。发酵结果表明，阻抑物可能是由ｐａｃ结构基因内部的ＯＲＦⅡ编码的蛋白因子。
- 蒋岚王宇澄蒋巧玲杨胜利
- 关键词：青霉素酰化酶调节基因基因定位
- 调控蛋白CRP和FNR对青霉素G酰化酶基因表达的影响被引量：1
- 1995年
- 青霉素G酰化酶的表达受多种因素的调控。利用crp和fnr基因缺陷型菌株研究了葡萄糖阻遏和氧调控的机制。结果表明:FNR对pac表达不起调控作用,CRP对pac基因表达有正调控作用,并且CRP的结合位点位于结构基因上游的DNA序列上。随后,测定结构基因上游调控区的DNA序列,发现可能的CRP蛋白结合位点的同源保守序列为TGTGA。
- 蒋岚杨胜利
- 关键词：青霉素G酰化酶基因调控
- 稀有密码子对proUK基因在大肠杆菌中高表达的影响被引量：21
- 1999年
- ＡＧＧ／ＡＧＡ密码子在ｐｒｏＵＫ基因中出现的频率高达２％，大肠杆菌中现有的编码ｔＲＮＡＵＣＵ的ａｒｇＵ基因不能满足ｐｒｏＵＫ高表达的需要。本文研究了ａｒｇＵ基因剂量对ｐｒｏＵＫ表达的影响，结果表明带有ａｒｇＵ基因的中等拷贝数质粒能促进ｐｒｏＵＫ基因表达。
- 蒋岚杨永华龚毅杨胜利
- 关键词：稀有密码子基因表达大肠杆菌
- 青霉素G酰化酶基因调控的研究
- 蒋岚
