徐秋芳
- 作品数：43 被引量：95H指数：5
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项江苏省农业科技自主创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学航空宇航科学技术交通运输工程更多>>
- 水稻幼苗酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：13
- 2018年
- 为解析水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)与寄主水稻的互作机制,筛选水稻中与病毒互作的蛋白,以易感RBSDV的水稻品种日本晴3~4叶期的组织样品为材料,通过提取总RNA后分离获得m RNA,合成cDNA双链后连入pDONR222载体,获得初级文库。初级文库的滴度为6.6×10~6CFU/mL,库容为1.9×10~7CFU,重组率>95%,插入片段平均长度>1 kb。提取初级文库质粒,通过重组反应将水稻cDNA文库转移至pGADT7-DEST载体,构建获得水稻幼苗的酵母双杂交cDNA文库,文库的滴度为4.5×10~6CFU/mL,库容为1.3×10~7CFU,重组率>95%,cDNA插入片段平均长度>1 kb。采用RBSDV候选基因进行文库筛选,结果表明所构建的酵母文库可用于筛选病毒互作蛋白。
- 朱佳慧徐秋芳袁平平倪海平周益军蒋选利杜何为
- 关键词：水稻酵母双杂交水稻黑条矮缩病毒滴度库容重组率
- 利用RT-LAMP方法快速检测飞虱体内水稻黑条矮缩病毒
- 本发明提供了一种飞虱体内水稻黑条矮缩病毒的快速检测技术及其在病害诊断和预测预报上的应用方法。利用这一方法可以排除南方水稻黑条矮缩病的干扰，快速鉴定出飞虱体内是否携带水稻黑条矮缩病毒，进而采取针对性的防治策略，减少病害带来...
- 周彤周益军杜琳琳兰莹徐秋芳孙枫范永坚
- 文献传递
- 一种调控昆虫体内病毒增殖的方法
- 本发明公开了一种调控昆虫体内病毒增殖的方法，即通过靶向调控昆虫体内3，5‑二磷酸磷脂酰肌醇(PI(3，5)P<Sub>2</Sub>)的含量控制昆虫体内病毒增殖。通过显微注射等方式施加PI(3，5)P<Sub>2</Su...
- 徐秋芳王海涛董岩
- 利用RT-LAMP方法快速检测植株中南方水稻黑条矮缩病毒
- 本发明提供了一种水稻和玉米等植株上南方水稻黑条矮缩病毒的快速检测技术及其在病害诊断上的应用方法。利用这一方法可以排除水稻黑条矮缩病的干扰，快速鉴定出南方水稻黑条矮缩病毒植株样品，进而采取针对性的防治策略，减少病害带来的损...
- 周彤周益军杜琳琳兰莹徐秋芳孙枫程兆榜
- 灰飞虱actin基因的克隆及原核表达
- 2014年
- 通过生物信息学分析获得了灰飞虱actin基因的序列信息,采用RT-PCR方法从灰飞虱中克隆了actin基因的开放阅读框,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。序列分析结果表明,该基因开放阅读框长1 131 bp,编码377个氨基酸,蛋白质理论分子量为4.17×104,理论等电点为5.28。将此序列登录GenBank数据库,登录号为KC683802。序列比对发现,该基因序列在多个物种间保守,与褐飞虱actin基因的同源性高达95%。构建的原核表达载体pET32a-actin,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行获得表达,SDS-PAGE分析结果表明,表达的蛋白质主要存在于包涵体中。
- 陈晴晴李艳舞倪海平徐秋芳张金凤李硕周益军
- 关键词：灰飞虱肌动蛋白基因克隆原核表达
- 灰飞虱不同组织稳定表达的内参基因、其筛选方法及应用
- 本发明公开了一种灰飞虱不同组织稳定表达的内参基因及其筛选方法。以灰飞虱头、中肠、表皮、脂肪体等不同组织为材料，选择7个候选内参基因进行荧光定量PCR分析，各候选内参基因的Ct值数据分别用geNorm、BestKeeper...
- 徐秋芳吴薇王满周益军
- 文献传递
- 抗水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的双价RNA沉默载体的构建被引量：4
- 2012年
- 为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基因;将RBSDV S10基因片段(R10)和SRBSDV S10基因片段(SR10)进行融合,获得600 bp的R10-SR10融合基因。融合基因以反向重复的方式连入pBS载体,并定向插入到pCAMBIA1301载体上,获取了含有发夹结构的植物表达载体pCAMBIA1301-hp(R6-SR6)和pCAMBIA1301-hp(R10-SR10)。抗RBSDV和SRBSDV RNA沉默载体的构建为利用RNA沉默进行植物抗病毒研究奠定了基础。
- 徐秋芳张金凤张晓霞熊如意周益军
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒南方水稻黑条矮缩病毒重组PCR
- 酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白被引量：5
- 2013年
- 为获取灰飞虱体内传播RBSDV相关介体因子,以RBSDV编码的外层外壳蛋白p10为诱饵,采用酵母双杂交方法从灰飞虱cDNA文库中筛选与RBSDV p10互作的蛋白。将RBSDVp10基因构建至pGBKT7载体获得诱饵表达载体pGBKT7-p10。自激活实验结果表明,p10蛋白对酵母细胞无毒性,也不具有自激活活性。通过pGADT7-cDNA文库质粒转化含有pGBKT7-p10的酵母AH109筛选获得灰飞虱cDNA文库中与p10互作的蛋白。文库筛选共获得326个阳性克隆。测序结果表明这些阳性克隆编码14种不同的互作蛋白,包括Actin 1,GAPDH,RACK等。这些互作蛋白参与胞吞胞吐作用和膜融合等过程,可能与病毒在介体内的循回和增殖相关。
- 徐秋芳陈晴晴张金凤李硕倪海平周益军
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白酵母双杂交
- 灰飞虱蛋白与RBSDV P10的互作分析
- 黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)为呼肠孤病毒科(Reoviri-dae)斐济病毒属(Fijivirus)的成员,可侵染水稻、玉米等禾本科植物,引起水稻黑条矮缩病、...
- 徐秋芳周益军陈晴晴倪海平李硕
- 关键词：灰飞虱酵母双杂交多克隆抗体
- 利用RT-LAMP方法快速检测植株中南方水稻黑条矮缩病毒
- 本发明提供了一种水稻和玉米等植株上南方水稻黑条矮缩病毒的快速检测技术及其在病害诊断上的应用方法。利用这一方法可以排除水稻黑条矮缩病的干扰，快速鉴定出南方水稻黑条矮缩病毒植株样品，进而采取针对性的防治策略，减少病害带来的损...
- 周彤周益军杜琳琳兰莹徐秋芳孙枫程兆榜
- 文献传递
