李君丽
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 携带HSV-2 gB CTL表位的gD抗原制备及其免疫效果评估
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus 2, HSV-2)为双链DNA病毒,属疱疹病毒科,感染可引起生殖器疱疹。HSV-2感染在全球普遍存在,发展中国家的形势更为严峻。HSV-2还可增加艾滋病和宫颈癌...
- 李君丽
- 关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白D杆状病毒表达系统CTL表位
- 文献传递
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价被引量：1
- 2010年
- 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。
- 姜德玉刘坤张伟张伟周朋李君丽王希良
- 关键词：糖蛋白D免疫原性中和活性
- 淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达被引量：3
- 2010年
- 目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。
- 张伟张伟刘坤姜德玉赵莉群李君丽于三科
- 关键词：淋球菌原核表达
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达被引量：3
- 2010年
- 以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化E.coilDH5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达HSV-2 gD蛋白,为下一步的工作奠定了基础。
- 姜德玉刘坤赵晓燕张伟李君丽王希良于三科
- 关键词：糖蛋白D
- HSV-2 gD融合gB CTL表位重组蛋白的原核表达及免疫原性评价
- 2011年
- 为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达载体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,His TrapTMHP柱纯化目的蛋白并免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测血清抗体效价,结果显示重组蛋白在大肠埃希菌中得到了高效表达,该重组蛋白具有较好的免疫原性。
- 李君丽刘坤姜德玉张伟王希良于三科
- 关键词：HSV-2糖蛋白DCTL表位原核表达免疫原性
