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肝癌相关抗原SMP30重组基因的构建、表达及分子伴侣共表达系统的探索被引量：3: 2012年; 旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率。PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coliBL21(DE3)pLysS宿主菌。表达蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化获得HIS-SMP30融合蛋白;分别将4种表达不同分子伴侣的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)转入E.coliBL21(DE3)中;然后再将重组质粒转入含有分子伴侣质粒的细胞中,进行分子伴侣与重组质粒的共表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达量与可溶性分析。经优化表达条件后,目的蛋白以包涵体形式表达,目的蛋白占总蛋白的60%以上;纯化后纯度高达95%以上;诱导共表达后,目的蛋白在上清含量极少,不到总表达目的蛋白的10%。成功构建出高效表达的SMP30重组质粒;加入到诱导表达体系中的4种分子伴侣质粒不能有效的促进可溶性蛋白的表达,pTf16共表达系统能增加目的蛋白表达量。; 黄朋范升龙凌敏贺菽嘉周素芳; 关键词：基因工程共表达

肝癌相关抗原H2-calponin基因重组质粒的构建与表达: 2012年; 目的应用基因工程的方法构建H2-calponin(CNN2)基因工程表达质粒,体外表达、分离、纯化CNN2蛋白。方法以PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pColdⅢ中,转化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamideg elelectrophoresis,SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达情况,优化表达条件,以较大体积培养基因工程菌,菌体经超声波破菌后,过Ni-NTA亲和柱纯化,Western-blot检测表达纯化的融合蛋白。结果转化有pColdⅢ-CNN2重组质粒的基因工程菌能诱导表达CNN2蛋白,表达的目的蛋白占总菌体蛋白的35%;SDS-PAGE检测发现菌体上清液和沉淀物中均有目的蛋白片段,证实部分CNN2蛋白以可溶性形式表达;Western-blot检测结果提示表达纯化的蛋白能与抗CNN2抗体发生反应。结论成功构建出表达可溶性CNN2蛋白的重组质粒,诱导表达的蛋白具有CNN2免疫原性。; 范升龙黄朋涂镇波李玲张胜昌陆巧巧赵赫周素芳; 关键词：肝肿瘤基因工程纯化

肝癌相关抗原CNN2的克隆表达与肝癌血清分析: 目的：应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原H2-calponin(CNN2)；分离纯化CNN2蛋白；利用CNN2作为抗原检测肝癌患者血清中抗CNN2抗体的表达情况。方法：PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因...; 范升龙; 关键词：基因工程 ELISA HCC; 文献传递

肝癌新标记物用于肝癌早期诊断研究体系的建立和应用研究: 周素芳蓝秀万凌敏蔡丹昭邓勇李晓龙张鹏林朝群黄朋范升龙涂镇波李玲张胜昌; 该项目来源于广西科技研究与技术开发项目“肝癌新标记物用于肝癌早期诊断研究体系的建立和应用研究”(桂科攻10124001A-2)。利用改良的SEREX技术从广西肝癌人cDNA文库和人胚胎干细胞cDNA文库中筛选到了30个与...; 关键词：; 关键词：肝癌

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范升龙