赵俊丽
- 作品数：25 被引量：18H指数：3
- 供职机构：陕西师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 腺病毒的标记方法
- 2010年
- 腺病毒载体具有滴度高、容量大及可以同时感染分裂与未分裂细胞等一系列优点,因此在基因治疗领域得到广泛应用。腺病毒颗粒的标记对于腺病毒生物学功能的基础研究及评估腺病毒载体的基因治疗效果具有重要意义。本文通过综述腺病毒标记的方法,回顾腺病毒标记技术的发展过程,同时期望为找到更好的标记腺病毒的方法以及其在基因治疗研究领域的进一步应用提供一些思路。
- 赵俊丽夏海滨
- 关键词：腺病毒病毒载体基因治疗
- 携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。
- 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨
- 关键词：腺病毒载体
- 人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3
- 2008年
- 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.
- 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨
- 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类
- 一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统
- 本发明公开了一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统，由打靶载体和打靶供体两部分组成，其中，打靶供体携带需要引入的外源DNA片段，该外源DNA片段包括T2A小肽、荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomy...
- 夏海滨单琳琳张伟锋赵俊丽
- 一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。
- 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨
- 关键词：小干扰RNA基因沉默微小RNA
- 一种TanCAR的构建及其应用
- 本发明公开了一种TanCAR，在第3代CAR骨架的基础上构建而成，由识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分、跨膜部分及细胞内信号转导部分三部分组成。TanCAR中识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分由具有核苷酸序列表中NO1所示的...
- 夏海滨郑晓晶赵俊丽
- 文献传递
- 肿瘤特异嵌合启动子及其构建方法和应用
- 一种肿瘤特异嵌合启动子，由具有核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列中1-233位的任何碱基的肿瘤特异启动子Survivin序列与具有核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中1-62位的任何碱基的miniCMV序列组成，其肿瘤特...
- 夏海滨张伟锋王东阳郑晓晶赵俊丽
- 文献传递
- 一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统
- 本发明公开了一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统，由打靶载体和打靶供体两部分组成，其中，打靶供体携带需要引入的外源DNA片段，该外源DNA片段包括T2A小肽、荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomy...
- 夏海滨单琳琳张伟锋赵俊丽
- 文献传递
- 基于CRISPR/Cas9靶向基因组修饰技术建立KI-T2A-luciferase细胞系的方法
- 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9靶向基因组定点修饰技术建立KI‑T2A‑luciferase细胞系的方法，采用CRISPR/Cas9技术在基因组上mmp12基因的3’端原位整合入T2A‑luciferase报告...
- 夏海滨杜春花赵俊丽
- 文献传递
- 荧光蛋白标记腺病毒衣壳蛋白pIX和核心蛋白pVII载体的构建及其实验研究
- 赵俊丽
- 关键词：腺病毒核心蛋白衣壳蛋白基因治疗
