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王东阳: 作品数：37 被引量：47H指数：3; 供职机构：陕西师范大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家社会科学基金更多>>; 相关领域：文化科学生物学医药卫生更多>>

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携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2: 2011年; 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。; 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨; 关键词：腺病毒载体

小干扰RNA快速筛选的载体及其构建方法和应用: 一种小干扰RNA快速筛选的载体，小干扰RNA快速筛选载体具有一个3.0kb的骨架载体并含有一个多克隆位点，在载体5’端的多克隆位点处存在报告基因及用于插入一个筛选靶基因表达元件的多克隆位点，其下游存在两个相反方向的任意两...; 夏海滨边晔王东阳孙晓聪冯真真李婧郑晓晶; 文献传递

经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体的构建及体外实验研究: 2013年; 目的:构建经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a的新型腺病毒载体并进行体外实验研究。方法:采用常规基因克隆和同源重组技术,构建在E3区携带hIL-12B(p40)和在纤维蛋白及E4区之间携带hIFN-α2a及eGFP表达框的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的嵌合型腺病毒骨架质粒载体pAd5/35-Backbone.E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。此外,采用分子克隆手段构建携带hIL-12A(p35)的腺病毒E1穿梭载体pAd5-E1-CMV-hIL-12A(p35)。PCR法鉴定腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒。将上述所获得的两种质粒载体经过PacI线性化后共转染HEK293细胞包装新型病毒载体。将纯化的腺病毒感染人恶性胶质瘤细胞U87MG,48小时后,荧光显微镜下观察报告基因eGFP的表达,RT-PCR检测hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结果:PCR法检测到所构建的腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒成功携带所需的目的基因。成功包装并纯化获得新型腺病毒载体pAd5/35.E1-CMV-hIL-12A(p35)/E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。体外感染U87MG细胞,48h后荧光显微镜下可以观察到报告基因eGFP的表达,RT-PCR可以检测到hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结论:体外实验结果表明,成功制备的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体,为进一步探讨其在恶性脑胶质瘤动物模型中的体内治疗研究奠定了基础。; 赵静李星王顺娟王菲王东阳夏海滨

人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3: 2008年; 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.; 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨; 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类

对NBA中各队优秀中锋技术指标的统计分析: 2010年; 本文通过对美国职业篮球联盟NBA中24名现役优秀中锋在2007—2009常规赛季中，7项技术指标的统计数据进行因子分析和聚类分析，并对这24名球员进行了分类。利用因子分析方法找出影响中锋运动员的3个因素并对其进行合理的解释和命名，将其确定为“技术因子”“防守能力因子”“态度意识因子”。再以3个公共因子的得分值作为聚类变量，对所有24名球员进行分类，将这24名中锋运动员划分为了4类，并对每一类型球员的特点以及如何培养成为该类球员进行了分析和解释。; 王东阳谢奇; 关键词：聚类分析 NBA 中锋

速度-节奏感知训练对提高跳远运动员踏板准确性的研究: 2007年; 我国优秀跳远运动员助跑速度已接近国际优秀运动员的助跑速度,但在助跑过程中表现出助跑节奏和速度不稳定,踏板的准确性较差,运动员普遍在后4步中有明显减速现象,对速度的利用率较低,成为影响我国跳远运动成绩的主要因素之一。因此,研究跳远运动员踏板准确性的影响因素,分析其形成原因,制定相应对策,在训练中有的放矢,以提高跳远运动员在快速助跑中起跳踏板的准确性,是目前跳远运动训练亟待解决的问题之一。; 王东阳李振斌; 关键词：跳远运动员踏板准确性

表达小干扰RNA的VA1缺失的腺病毒载体的构建方法: 一种表达小干扰RNA的VA1缺失腺病毒载体，重组腺病毒载体中VA1部分基因缺失，不能产生功能性VA1基因，插入了siRNA表达元件及报告基因。其构建方法为：构建VA1缺失的穿梭载体，用VA1缺失的穿梭载体与腺病毒载体骨架...; 夏海滨张伟锋郑晓晶赵俊丽王东阳; 文献传递

异构体ΔASPP2可拮抗ASPP2对p53(细胞)凋亡功能的增强作用被引量：3: 2012年; p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)能够与p53蛋白结合特异性地增强其促细胞凋亡功能,进而发挥肿瘤抑制作用.我们发现的1个比ASPP2少300多个N端氨基酸的异构体ΔASPP2.目前,ΔASPP2对p53起何种作用尚不清楚.在本研究中,我们构建了rAd-ASPP2、rAd-ΔASPP2腺病毒,利用rAd-p53、rAd-ASPP2、rAd-ΔASPP2感染p53缺失的细胞系H1299,在MMS的作用下研究ASPP2和ΔASPP2对p53介导的细胞凋亡的影响.结果发现,p53自身过表达能明显促进肿瘤细胞的凋亡;ASPP2可显著增强p53介导的MMS引起的H1299细胞凋亡的作用;然而,ΔASPP2对p53介导的细胞凋亡没有明显影响但却显著抑制rAd-ASPP2增强的rAd-p53的促细胞凋亡作用.p53-ASPP2复合体可能改变p53蛋白的构象,促进p53和增强子Bax的结合活性.p53转录调控基因的表达研究显示,ΔASPP2的存在可显著抑制ASPP2增强p53介导的bax基因转录活性,提示ΔASPP2可能与ASPP2结合后来抑制p53的凋亡基因转录活性.; 丁渭侯庆生王东阳刘凯夏海滨石英陈德喜; 关键词：细胞凋亡

不同训练负荷对田径运动员快速力量影响的试验研究: 力量是人体完成各种动作的动力来源，是决定运动成绩的基础素质之一。当前，在运动技术基本保持不变的情况下，专项能力的提高成为决定竞技运动成绩的主要因素。随着科学技术的飞速发展和竞技运动水平的不断提高，对田径运动员快速力量的研...; 王东阳; 关键词：田径运动员; 文献传递

一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2: 2007年; 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。; 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨; 关键词：小干扰RNA 基因沉默微小RNA

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