张伟锋
- 作品数：32 被引量：15H指数：3
- 供职机构：陕西师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的新方法
- 本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的新方法。该方法涉及两种慢病毒，一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒，另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病...
- 夏海滨李雅张伟锋朱久玲李燕
- 一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用
- 本发明提供了一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用，该抗肿瘤药物是将AAV病毒基因组ITR之间序列去除后，插入Nfil3基因敲低元件和HBVc‑PEP3基因表达元件，并将6型腺相关病毒衣壳蛋白VP1编码框的第663位氨...
- 张伟锋赵婧伊柳玲玲李星
- Rescue the failed Half-ZFN by a sensitive mammalian Cell-Based luciferase reporter system
- ZFN technology is a powerful research tool and has been used for genome editing in cells lines,animals and pla...
- 张伟锋夏海滨孟文鹏赵静王顺娟
- 文献传递
- 携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒及其构建方法和应用
- 一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，缺失E1区和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。构建方法由构建腺病毒骨架载体、构建携带锌指核酸酶表达元件的腺病毒E3区穿梭载体、构建携带供体DNA的腺病毒...
- 夏海滨张伟锋刘思也
- 文献传递
- 应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系被引量：5
- 2016年
- 目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的。首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2串联载体。然后将p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2和p Ad-E1/hRev-erbβdonor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系。最后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβHEK293细胞系(C3-6)进行检测。结果敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβmRNA和蛋白质的表达。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具。
- 陈芳张伟锋赵俊丽杨沛艳马锐夏海滨
- 关键词：293细胞基因敲入基因敲除
- 基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的方法
- 本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的方法。该方法涉及两种慢病毒，一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒，另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病毒...
- 夏海滨李雅张伟锋朱久玲李燕
- 文献传递
- 一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用
- 本发明提供了一种抗肿瘤药物及其在脑胶质瘤治疗中的应用，该抗肿瘤药物是将AAV病毒基因组ITR之间序列去除后，插入Nfil3基因敲低元件和HBVc‑PEP3基因表达元件，并将6型腺相关病毒衣壳蛋白VP1编码框的第663位氨...
- 张伟锋赵婧伊柳玲玲李星
- 一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统
- 本发明公开了一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统，由打靶载体和打靶供体两部分组成，其中，打靶供体携带需要引入的外源DNA片段，该外源DNA片段包括T2A小肽、荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomy...
- 夏海滨单琳琳张伟锋赵俊丽
- 一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。
- 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨
- 关键词：小干扰RNA基因沉默微小RNA
- 肿瘤特异嵌合启动子及其构建方法和应用
- 一种肿瘤特异嵌合启动子，由具有核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列中1-233位的任何碱基的肿瘤特异启动子Survivin序列与具有核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中1-62位的任何碱基的miniCMV序列组成，其肿瘤特...
- 夏海滨张伟锋王东阳郑晓晶赵俊丽
- 文献传递
