张海龙
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人骨保护素对聚乙烯颗粒刺激破骨细胞功能的影响
- 随着人工关节置换术逐渐成为多种骨科疾病的重要治疗手段，其产生的一些远期不良影响日益受到人们的关注，无菌性松动是其中一种重要并发症。无菌性松动的产生机制目前主要认为有两大因素：机械力学因素和生物学因素，生物学因素中，关节假...
- 张海龙
- 关键词：破骨细胞骨保护素人工关节置换术无菌性松动细胞功能
- 文献传递
- Drosha水平与胃腺癌恶性程度及侵袭呈负相关被引量：4
- 2015年
- 目的研究Drosha蛋白在胃腺癌发展进程中的意义及与患者预后的相关性,探究Drosha对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响。方法免疫组织化学染色及Image-Pro Plus软件检测组织芯片889例胃腺癌组织样本中Drosha的表达量,统计分析Drosha与各临床参数及309例胃腺癌患者预后的关系;小干扰RNA(siRNA)干扰人胃腺癌细胞株SGC-7901中Drosha的表达,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 Drosha在高分化胃腺癌组织中高表达(吸光度值中位值为0.4195),在中分化胃腺癌中表达降低、在低分化腺癌中低表达;Drosha的表达与肿瘤大小、Lauren分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肿瘤病理分级及病理分期相关;生存分析显示Drosha高表达的患者拥有更高的生存率;敲低SGC-7901细胞的Drosha水平后,细胞侵袭能力显著增强。结论 Drosha蛋白水平随胃腺癌分化程度降低而逐渐降低,敲低Drosha水平可促进胃癌细胞的侵袭。
- 张海龙徐丽云周明莉杜燕娥文思阳柳满然
- 关键词：DROSHA胃腺癌免疫组织化学技术
- Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移被引量：2
- 2015年
- 目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。
- 周明莉唐石伏张海龙杨丽杨佳佳柳满然
- 关键词：TWIST细胞迁移
- 低氧诱导乳腺癌癌相关成纤维细胞能量代谢重塑细胞模型的构建被引量：2
- 2015年
- 目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NF)和CAF为处理对象,根据[O2]不同,NF和CAF细胞各分为常氧处理组和低氧处理组。不同氧浓度分别处理NF和CAF细胞0、1、3、6、12 h和24 h。葡萄糖消耗实验和乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平;线粒体活性检测实验评估细胞氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OP)活性;Western blot实验检测细胞能量代谢相关蛋白包括单羧酸转运子4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚基(cytochrome oxidaseⅣsubunit,COXⅣ)和低氧诱导因子1α亚基(hypoxia inducible factor 1αsubunit,HIF1α)的蛋白表达量。结果:低氧与CAF细胞EMR呈剂量效应和时间效应关系,1%[O2]作用24 h为最佳低氧处理条件。与NF常氧组相比,低氧处理(1%[O2]作用24 h)使CAF葡萄糖吸收和乳酸产生能力分别增强2倍和3.1倍,明显抑制其氧化磷酸化活性,使CAF细胞中MCT4和HIF1α蛋白表达量分别上升3.1倍和3.9倍及COXⅣ下调90%。结论:低氧(1%[O2]作用24 h)使CAF具有典型的EMR表型。本研究成功构建低氧诱导的乳腺癌CAF细胞EMR模型。
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- 关键词：乳腺癌癌相关成纤维细胞低氧细胞模型
- Drosha蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义
- 2014年
- 目的:探讨胰腺癌组织中Drosha蛋白表达状况及其临床意义。方法:收集胰腺癌样本85例及对应癌旁组织53例,采用H&E和免疫组化法检测胰腺癌组织标本中Drosha蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系。采用定量PCR方法检测Drosha基因表达。结果:胰腺癌组织中Drosha的表达阳性率为72.9%(62/85),而相应癌旁Drosha表达阳性率为100%(53/53),两者表达差异有统计学意义(P=0.000),Drosha蛋白在胰腺癌中的阳性强度平均积分值由10.3分降至2.3分。Drosha蛋白的表达与肿瘤的分期(c2=19.2,P=0.0003)、分级(c2=10.8,P=0.013)、淋巴结转移(c2=23.6,P=0.00003)等密切相关。与对应癌旁组织相比,Drosha基因在胰腺癌组织中表达下调(P=0.000)。结论:Drosha蛋白在胰腺癌组织中表达下降,Drosha可能在胰腺癌的发生、发展中具有重要作用。
- 曾宗跃贾微杨欣张海龙柳满然
- 关键词：胰腺癌DROSHA免疫组化
- 高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移被引量：5
- 2014年
- 目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞,再通过长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺细胞小球(Mammosphere),并通过Western blot法检测myc-Twist及Twist诱导后富集的Mammosphere相关CSC蛋白标记的表达,Transwell法检测细胞的迁移能力。结果成功构建逆转录病毒质粒pBABE-puro-myc-Twist;Twist基因在靶细胞内稳定表达;长程无血清悬浮培养富集出具有干细胞特性的Mammosphere;MCF-7/Twist细胞肿瘤干细胞样细胞富集能力增强(P<0.05);myc-Twist、Twist及SOX2、OCT4蛋白在MCF-7/Twist Mammosphere细胞中表达上调;MCF-7/Twist Mammosphere细胞迁移能力增加(P<0.05)。结论 Twist促进MCF-7肿瘤干细胞样细胞富集能力增强,并促进其迁移。
- 周明莉杨佳佳唐石伏杨丽张海龙杜燕娥文思阳柳满然
- 关键词：TWIST人乳腺癌细胞MCF-7
- 乳腺癌相关成纤维细胞miRNA表达的检测和分析被引量：7
- 2014年
- 目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法和Western blot法分析CAF和NF细胞成纤维细胞分泌蛋白(FSP)的表达情况,对所分离培养的细胞进行纯度和特性鉴定;利用TranswellTM实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片和芯片结果显著性差异(SAM)分析法分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异;对差异miR-205和miR-221,在原代培养的CAF和NF进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证;利用多种生物信息学软件预测差异miRNA的靶基因;利用DAVID软件对靶基因进行信号通路富集度分析。利用ELISA检测TGF-β和IL-6信号通路的核心蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2和MMP-9的表达差异。结果成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,纯度大于95%;与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有10个变化倍数>1.5的异常表达miRNA(P<0.05),其中3个上调表达(miR-221-5p、miR-31-3p、miR-221-3p),7个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-101、miR-342-3p、let-7g)。信号通路富集度分析发现,miRNA靶基因与细胞分化、细胞黏附、细胞迁移、细胞增殖、细胞分泌和细胞间相互作用等密切相关,其中,异常表达的miR-200b/c和miR-141等miRNA通过抑制其靶基因,影响TGF-β信号通路、IL-6信号通路,进而影响CAF的侵袭和转移。结论人乳腺癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化,CAF细胞中异常表达miRNA可能参与了NF向CAF的转化,并与CAF细胞的增殖、黏附、侵袭、转移有密切关系。
- 曾宗跃胡萍唐曦张海龙杜艳娥文思阳柳满然
- 关键词：癌相关成纤维细胞乳腺癌肿瘤微环境
- 胃腺癌标志物Drosha蛋白及其应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种胃腺癌标志物Drosha蛋白及其应用。包括Drosha蛋白在制备胃腺癌的诊疗试剂中的应用，可用于评估胃腺癌预后和/或筛选胃腺癌药品。本发明中用于评估胃腺癌预后和/或筛选胃腺癌药品的试剂盒，...
- 柳满然侯懿烜张海龙
- 文献传递
- Drosha蛋白在胃腺癌及癌前病变中的异常表达和分布
- 第一部分：胃腺癌及癌前病变组织中总Drosha蛋白的表达及其意义 目的：研究Drosha蛋白在胃腺癌发生发展过程中的表达及意义，探讨Drosha对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响。 方法：免疫组织化学染色及IP...
- 张海龙
- 关键词：胃腺癌免疫组化
- 胃腺癌标志物Drosha蛋白及其应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种胃腺癌标志物Drosha蛋白及其应用。包括Drosha蛋白在制备胃腺癌的诊疗试剂中的应用，可用于评估胃腺癌预后和/或筛选胃腺癌药品。本发明中用于评估胃腺癌预后和/或筛选胃腺癌药品的试剂盒，...
- 柳满然侯懿烜张海龙
- 文献传递
