朱运明
- 作品数：7 被引量：27H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶突变体L200F/D215K的异源表达及酶学性质被引量：2
- 2014年
- 【目的】对北京棒杆菌Corynebacterium pekinense高丝氨酸脱氢酶(homoserine dehydrogenase,HSD)进行空间结构改造从而获得优良性能新酶。【方法】利用定点突变技术构建HSD双突变体L200F/D215A、L200F/D215E、L200F/D215G和L200F/D215K,并将其转入大肠杆菌E.coli BL21中进行高效表达,选取催化效率最高的双突变体L200F/D215K与双突变前的L200F进行动力学和酶学性质比较。【结果】HSD双突变体L200F/D215K的Vmax为36.92 U/mg,较L200F提高1.24倍;最适反应温度为37℃,较L200F提高2℃;最适反应pH为7.5,与L200F经验值相同;最适温度下的半衰期为4.16 h,较L200F提高1.12倍;L200F/D215K和L200F对有机溶剂和金属离子均表现出较好的抗性。【结论】HSD通过空间结构改造活力得到提高,并且其酶学性质得到优化。本研究有助于认识HSD突变体的酶学性质,为其新酶的研发利用提供有力依据。
- 申术霞朱运明闵伟红方丽许金坤
- 关键词：北京棒杆菌异源表达酶学性质
- 北京棒杆菌天冬氨酸激酶G377定点突变及酶学性质表征被引量：10
- 2014年
- 采用饱和定点突变和高通量筛选技术,对北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK)AK Gly377位点进行突变,并筛选获得高活力突变体G377F,分离纯化后对G377F AK酶学性质进行表征。结果表明:突变体AK最适pH值为9.0,较突变前野生型(wide type,WT)最适pH值为8.5有所提高;最适反应温度与WT一致,均为25℃;半衰期由WT的2.6 h提高到5.3 h;pH耐受性在5 h内保持其活力50%以上,与WT 3 h内酶活力保持能力相同。G377F对金属离子和有机溶剂均表现出良好的抗性。其中,Lys的抑制作用在一定程度上被解除,当Lys和Met同时存在时对AK具有明显的激活作用。动力学研究显示:G377F AK Vmax较WT提高9.3倍;n值为1.0明显低于WT的2.7,说明AK正协同性降低,趋向于米氏酶。
- 朱运明王晓飞闵伟红詹冬玲王隆洋
- 关键词：北京棒杆菌天冬氨酸激酶定点突变酶学性质
- 锦葵色素葡萄糖苷和锦葵色素半乳糖苷抑制内皮细胞氧化应激作用
- 2016年
- 目的:研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、黄嘌呤氧化酶-1(xanthine oxidase-1,XO-1)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的影响,确定最佳AngⅡ诱导浓度,探讨不同浓度锦葵色素葡萄糖苷(malvidin-3-glucoside,Mv-3-glc)和锦葵色素半乳糖苷(malvidin-3-galactoside,Mv-3-gal)对AngⅡ诱导的血管内皮细胞氧化应激的抑制作用机理。方法:通过体外培养HUVEC,采用酶联免疫吸附分析法分别测定HUVEC中SOD活力、XO-1和HO-1含量,并采用荧光探针方法检测细胞中ROS水平变化。结果:在HUVEC中,AngⅡ可诱导XO-1的表达,抑制HO-1的表达,AngⅡ在浓度10-2 μmol/L时对HUVEC氧化应激诱导最为显著。不同浓度的Mv-3-glc、Mv-3-gal及其混合物均可显著抑制AngⅡ诱导的内皮细胞氧化应激,通过抑制XO-1蛋白过表达,增加HO-1和SOD表达量,改善细胞抗氧化防御系统,从而减少细胞内ROS水平,达到氧化保护作用,且Mv-3-glc比Mv-3-gal抗氧化活性更强。结论:锦葵色素葡萄糖苷和锦葵色素半乳糖苷具有抑制内皮细胞氧化应激的作用。
- 朱运明黄午阳闵伟红隋中泉李春阳
- 关键词：内皮细胞活性氧氧化应激
- 蓝莓花青素氯化锦葵色素在人脐静脉内皮细胞中的抗氧化作用被引量：6
- 2015年
- 目的:研究氯化锦葵色素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和黄嘌呤氧化酶-1(xanthine oxidase-1,XO-1)含量的影响,探讨氯化锦葵色素在血管内皮细胞中的抗氧化作用。方法:体外培养HUVEC,分别设定空白组(仅加入二甲基亚砜),血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激组(10-2μmol/L),终浓度为1、5、10μmol/L氯化锦葵色素组,以及终浓度为1、5、10μmol/L氯化锦葵色素联合AngⅡ刺激(10-2μmol/L)组。采用荧光免疫法测定HUVEC内ROS含量的变化,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清液中可溶性XO-1含量的变化,Western blotting法检测细胞中XO-1含量的变化。结果:氯化锦葵色素处理HUVEC时,细胞ROS和XO-1含量降低;AngⅡ引起HUVEC内ROS和上清液中XO-1含量显著增加,各浓度氯化锦葵色素预处理能有效抑制ROS和XO-1含量的增加。结论:氯化锦葵色素在HUVEC中具有抑制ROS和XO-1的作用,从而达到抗氧化、保护内皮细胞的功效。蓝莓花青素氯化锦葵色素具有抑制ROS和XO-1的作用,为蓝莓的开发利用提供了理论依据。
- 徐丽萍付琳黄午阳李春阳朱运明
- 关键词：蓝莓人脐静脉内皮细胞
- 北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变体R169H的构建及酶学性质表征被引量：6
- 2014年
- 【目的】提高北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)中天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)活力。【方法】利用定点突变技术对AK基因进行突变,并将突变体转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中异源表达。重组菌经超声破碎后、利用镍柱对AK进行纯化,并经SDS-PAGE和Western blot验证。通过检测酶活力比较突变体和野生型动力学变化并研究突变体和野生型的部分酶学性质。【结果】成功构建突变体R169H。经验证知,AK分子量为48kDa。突变体R169H的Vmax为226.3 U/mg·s-1,较野生型提高2.3倍。最适反应温度为26℃,与野生型经验值相同;最适反应pH为9.0,较野生型经验值8.0有所提高;在最适温度和pH值下的半衰期为5.5 h,比野生型的4h稳定性要好;代谢产物赖氨酸、苏氨酸和蛋氨酸在低浓度时对AK均具有激活作用。【结论】突变体中R169与E92间氢键消失,能够影响亚基间聚合度,降低酶对底物的亲和力,减弱代谢产物对AK的反馈抑制作用,从而使R169H中AK的Vmax提高2.3倍。
- 李慧颖朱运明闵伟红詹冬玲任军
- 关键词：北京棒杆菌天冬氨酸激酶突变酶学性质
- 天冬氨酸激酶突变体G277K中AK基因的克隆表达及酶学性质表征被引量：3
- 2014年
- 通过序列比对和晶体结构分析发现,天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)的G277位点高度保守,并与抑制剂Thr通过氢键相连,对其进行定点突变和酶学性质表征。结果表明:突变体G277K的AK最适反应条件是30℃、pH 8.5;动力学实验结果显示突变体AK的正协同效应降低,趋向于米氏酶,参数S0.5、nH、酶比活力、Vmax分别是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143 U/(mg·min);热稳定性实验显示,其30℃半衰期为2.3 h,3 h后酶活力丧失80%左右;Ni2+在低浓度时表现出显著的激活效应;有机溶剂丙三醇、异丙醇和二甲基亚砜的体积分数为1%时,对AK的酶活力有很好的激活作用,表明突变体AK对一些有机溶剂有一定的抗性;低浓度的赖氨酸和蛋氨酸对AK有激活作用。
- 任军闵伟红詹冬玲方丽李慧颖朱运明
- 关键词：天冬氨酸激酶克隆表达定点突变酶学性质
- 长白山核桃球蛋白的提取、分离纯化及其功能性质研究被引量：7
- 2015年
- 球蛋白是长白山核桃(Juglans mandshurica Maxim)种仁贮藏蛋白主要组分之一,也是深度开发和利用核桃蛋白资源深加工产品的主要成分。在采用改进的Osborne法提取核桃球蛋白并通过离子交换层析纯化球蛋白的基础上,初步研究其结构特性后,将其功能性质与大豆分离蛋白做对比,进行全面分析,为其在食品加工中的应用提供理论依据。结果表明:制备的球蛋白含量为80.71%,阴离子交换层析图谱出现4个峰,经SDS-PAGE分析其相对分子量集中在14.3 ku和27.0 ku,18.0~21.0 ku,30.0 ku和37.0 ku,30.0 ku、37.0 ku以及44.3~59.0 ku区间;必需氨基酸含量基本符合FAO/WHO成人推荐标准;差示扫描量热(DSC)图谱分析表明JMG干粉出现两个吸热峰,变性温度分别为98.08℃和155.33℃,对应焓值为13.06 J/g、764.80 J/g;傅立叶红外光谱(FT-IR)分析其二级结构,显示JMG以α-螺旋为主;除起泡性和持水性明显低于大豆分离蛋白(SPI)外,JMG其它功能性质均与SPI基本相当。
- 王晓飞闵伟红朱运明朱运明吴丹刘春雷刘景圣
- 关键词：分离纯化功能性质
