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猪源伪狂犬病病毒gB蛋白抗体阻断ELISA的建立与应用被引量：4: 2018年; 利用伪狂犬病病毒（PRV）ZJ01毒株重组gB蛋白及其对应的HRP标记的单克隆抗体,旨在建立一种检测伪狂犬病病毒gB抗体的阻断ELISA。对ELISA反应条件进行了优化,具体为：包被抗原的质量浓度为0.5 g/mL;待检血清的稀释比例为1∶1,孵育条件是37℃作用1 h;酶标单抗的稀释度为1∶15 000,作用时间为37℃0.5 h。ELISA结果的判定标准为：血清样品阻断率PI≥28.67%时判为阳性;PI≤18.27%时判为阴性;18.27%〈PI〈28.67%时判为可疑。该ELISA能特异性地识别PRV阳性血清,而与PRRSV、PCV2、CSFV和FMDV阳性血清无交叉反应性。ELISA的重复性试验表明,批间和批内的变异系数均小于10%。比较试验结果表明,该ELISA的相对敏感性和特异性分别为80.9%和96.4%,与IDEXX PRV gB ELISA试剂盒的符合率为85.1%。用建立的此ELISA对田间采集的535份猪临床血清样品进行了检测,结果显示,PRV抗体阳性率达61.87%。综上所述,本试验建立的猪源伪狂犬病病毒gB蛋白抗体阻断ELISA具有特异、简单、快速的优点,为建立标准化的检测试剂盒奠定了基础。; 孙海凤徐旋董静孙涛白娟姜平; 关键词：伪狂犬病病毒阻断ELISA

伪狂犬病病毒gB和gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3: 2015年; 采用大肠杆菌表达系统表达获得了伪狂犬病病毒(PRV)超强毒株ZJ01的gB和gE重组蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、克隆和间接ELISA筛选,获得了4株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞培养上清的ELISA抗体效价在1∶1 600~1∶6 400之间,腹水抗体效价达1∶4×105;连续培养20代,抗体效价基本一致。抗gB单克隆抗体B1B6和B3D7属于IgG2b,抗gE单克隆抗体E1B11和E5C10属于IgG1,轻链均为κ型。Western-blot和IFA结果显示,4株单克隆抗体均能与PRV流行毒株ZJ01、HZ、SD、NJ、LA发生特异性反应,B1B6和B3D7还能与PRV gE基因缺失疫苗毒株Bartha-K61发生反应,但E1B11和E5C10不能与Bartha-K61发生反应。; 孙海凤顾真庆董静孙涛白娟姜平; 关键词：伪狂犬病病毒单克隆抗体

伪狂犬病毒流行毒株的抗原性和血清中和特性分析被引量：26: 2014年; 2011年以来,我国多个省份伪狂犬病免疫猪群相继暴发伪狂犬病疫情.为了探明伪狂犬病毒（PRV）流行毒株是否存在抗原变异,本研究从3个规模猪场3种PRV商品疫苗免疫的健康猪群中采集30份血清,经检测PRVgBELISA抗体均为阳性,gE ELISA抗体均为阴性.采用PRV新流行毒株ZJ-01株和传统的LA毒株分别进行血清中和抗体测定,结果显示,3个毒株活疫苗免疫血清与ZJ-01株中和抗体效价明显低于其与LA株中和抗体效价.同时,ZJ-01株抗血清与ZJ-01株和LA株的中和抗体效价相似,其变异系数R值为0.279～0.413,证明PRV分离毒株ZJ-01抗原性发生明显变异.本研究为伪狂犬病的防控提供了重要依据.; 杨文萍顾真庆孙海凤董静侯成才白娟姜平; 关键词：抗原变异

猪伪狂犬病毒变异株TK、gE和gI基因缺失毒株及其应用: 本发明涉及一种猪伪狂犬病毒(PRV)变异株ZJ01的TK/gE/gI基因缺失毒株及其应用，所述毒株为PRV ZJ01毒株的TK/gE/gI基因缺失毒株ZJ01ΔTK/gE/gI(简称ZJ01R)，体外传代试验结果显示，重...; 姜平董静顾真庆白娟王先炜李玉峰; 文献传递

中国东南部猪伪狂犬病毒超强毒株分离与鉴定: 伪狂犬病病毒(PRV)引起多种家畜及野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑炎为主要特征的一种传染病。美国与部分欧国家已宣布根除猪伪狂犬病。近30年来,我国广泛使用基因缺失疫苗有效控制并逐步净化。但是,2011年以来,我国许多...; 顾真庆候成才孙海凤董静姜平白娟

金字塔股权结构对盈余管理的影响——基于民营制造业上市公司的实证研究: 随着我国民营经济的迅速发展，越来越多的民营企业加入到上市公司的行列中，并日益成为一支重要的社会力量。而在我国的民营上市公司中，金字塔股权结构是普遍存在的。由于在金字塔股权结构下会使得最终控制人拥有的现金流权和投票权相分离...; 董静; 关键词：金字塔股权结构现金流权投票权盈余管理

猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株PCR鉴别方法的建立被引量：1: 2016年; 猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒（PRV）变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36区域的基因序列设计了2对引物,建立两步法PCR。第一步PCR针对UL44区域,区分出经典毒株（疫苗株HB98除外）感染与变异毒株感染。第二步PCR针对UL36区域,区分出HB98株与伪狂犬病病毒变异毒株。两步法PCR的敏感度分别达到2~20TCID50和50TCID50病毒量。对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、日本脑炎病毒、脑心肌炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核酸应用此方法进行扩增,结果均为阴性。该方法与猪伪狂犬病病毒国家标准PCR检测方法的符合率达到91%,可用于实验室快速诊断。; 孙涛董静白娟徐璇王先炜姜平; 关键词：伪狂犬病病毒变异毒株

卡介菌多糖核酸对IBDV感染鸡的免疫活性研究被引量：2: 2010年; 为了评价卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)在畜禽病毒性疾病中的作用及其诱导机体免疫的能力,建立了人工感染传染性法氏囊病(IBD)动物模型,通过检测免疫器官指数、IBDV抗体、外周淋巴细胞亚群、诱导干扰素和白介素水平等特异性和非特异性免疫指标,评估不同剂量BCG-PSN对IBDV感染鸡免疫功能的影响。结果显示:免疫器官脾脏指数和胸腺指数在注射BCG-PSN的初期出现上升趋势,而在注射BCG-PSN后期(15d)受试鸡外周血液CD4+/CD8+值显著提升;各BCG-PSN注射组的IBDV抗体滴度在试验初期明显提高;从注射开始,BCG-PSN就显示出其对IFN-γ、IFN-α和IL-2的显著提升效果。上述结果说明:BCG-PSN既能调节IBDV感染鸡的细胞免疫功能,又能调节机体的体液免疫功能,激活组织细胞释放包括IFN-γ、IFN-α和IL-2等多种细胞因子,以0.3mg·kg-1的注射剂量可获得良好的免疫效果。; 辛凌翔董静王宏宇龙燕吕英军鲍恩东; 关键词：卡介菌多糖核酸细胞免疫体液免疫传染性法氏囊病

猪伪狂犬病毒gI和gE基因在其毒力增强中的作用及三基因缺失活疫苗的构建: 伪狂犬病毒(Pseudombies virus，PRV)感染能够引起仔猪高热、神经症状、呼吸困难，妊娠母猪流产、死胎、木乃伊等临床疾病，且隐陛感染猪，终生带毒排毒，给世界养猪业造成巨大经济损失。中国是伪狂犬病毒感染的高发...; 董静; 关键词：GI基因 GE基因; 文献传递

两株抗猪伪狂犬病毒的单克隆抗体制备与鉴定被引量：2: 2017年; 采用猪伪狂犬病毒(PRV)ZJ01株纯化病毒免疫BALB/c小鼠,利用融合细胞技术和间接ELISA抗体筛选技术,制备并获得2株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B3和5C10,其中,2B3单抗为Ig G2a亚类,5C10为Ig G1亚类,轻链均为κ链。间接免疫荧光检测结果表明,2株单克隆抗体均能与PRV发生特异性反应。Western-blot结果表明,2B3单抗针对PRV g C蛋白,5C10单抗针对PRV g E蛋白。本研究为建立快速检测伪狂犬病毒感染的免疫学方法奠定了基础。; 徐璇董静白娟王先炜姜平; 关键词：伪狂犬病毒单克隆抗体杂交瘤

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