郎秀艳
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学食品学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金黑龙江省高校科技创新团队建设计划项目黑龙江省农垦总局科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛源大肠杆菌ERIC-PCR分型方法的建立及K99-987P-F41融合蛋白免疫效果评价
- 本试验采用大肠杆菌肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法对从黑龙江省各养殖场分离的牛源大肠杆菌进行基因分析,建立基因分型方法。同时,扩增ETEC的三种菌毛K99、F41和987P基因,构建K99-987...
- 郎秀艳
- 关键词：大肠杆菌ERIC-PCR
- 文献传递
- 黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力和耐药基因检测分析被引量：10
- 2015年
- 为了了解黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力基因及主要治疗药物耐药基因的分布,试验采用KB(Kirby-Bauer)法和PCR方法检测了2011—2013年从黑龙江地区各规模化养牛场分离的66株大肠杆菌的毒力和耐药基因。结果表明:66株大肠杆菌中有33株带有毒力基因,检出率达到50.0%,携带1种及其以上的毒力基因分别为30株和3株,占阳性菌株总数的91.0%和9.1%;耐药基因检出率分别为磺胺类耐药基因Sul1/Sul2(32.1%)、Sul3(9.4%),氯霉素类耐药基因Cat1(15.1%)、Cml A(13.2%)、Flor(15.1%),氨基糖苷类耐药基因aph A3(1.9%)、aad A(22.6%)、aac C2(22.6%)、aac C4(20.8%)。
- 张洋龙郎秀艳蒋惠婷刘娇毕莹张建军常春龙倪宏波
- 关键词：大肠杆菌毒力基因耐药基因药物
- 产肠毒素大肠埃希菌K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内免疫效果的评价
- 2016年
- 目的评价产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内的免疫效果。方法制备ETEC融合蛋白K99-987P-F41亚单位疫苗、ETEC全菌体灭活疫苗、ETEC天然菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗及ETEC重组菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗,分别免疫小鼠,同时以免疫PBS的小鼠作为对照。ELISA法检测小鼠血清中IgG、IL-4和IFNγ的水平及小鼠粪便和小肠冲洗液中分泌型免疫球蛋白A(secreted immunogobulin A,sIgA)的含量;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况,并进行攻毒试验。结果 ETEC融合蛋白K99-987P-F41重组亚单位疫苗组小鼠血清中的抗ETEC的特异性IgG抗体、IL-4、IFNγ、粪便和小肠冲洗液中的sIgA、小鼠脾脏B和T淋巴细胞增殖能力均显著高于PBS对照组(P<0.05);ETEC融合蛋白K99-987PF41重组亚单位疫苗对小鼠的保护率为80%,与其他3种疫苗的小鼠保护率相近,而PBS对照组为0。结论 ETEC融合蛋白K99-987P-F41可有效诱导小鼠产生较高滴度的特异性抗体,可作为ETEC重组亚单位疫苗候选蛋白。
- 王欣郎秀艳张洋龙倪宏波
- 关键词：免疫效果亚单位疫苗
- 产肠毒素性大肠埃希菌K99-987P-F41原核表达载体的构建、表达及其纯化被引量：3
- 2016年
- 目的构建产肠毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表达载体,诱导表达后进行纯化。方法利用PCR技术,从ETEC基因组DNA中扩增出K99、987P、F41部分基因片段,将3段目的基因融合亚克隆至大肠埃希菌原核表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化。结果重组表达质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41经PCR、酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约60 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的63.8%,纯度为81.2%,浓度为8.953 mg/ml,可同时被天然和重组抗原多抗识别,具有良好的反应原性。结论 ETEC重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍离子亲和层析柱纯化可获得融合蛋白。
- 王欣王琦郎秀艳张洋龙倪宏波
- 关键词：原核表达纯化
- 牛源大肠杆菌F41菌毛蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体。方法以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性。结果重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确;F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,纯化的重组蛋白纯度可达92%;制备的抗血清效价达1∶2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性。结论已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础。
- 倪宏波郎秀艳邵光喜周玉龙焉秋龙刘银冰宫大庆王春仁
- 关键词：原核细胞基因表达多克隆抗体
- K99-987P-F41重组蛋白及其应用
- 本发明涉及一种K99-987P-F41重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还提供了该重组蛋白的编码基因、制备方法以及在制备产肠毒素大肠杆菌疫苗中的应用。本发明将ETEC黏附素K99、987P、F41...
- 倪宏波郎秀艳张洋龙邢思疑蒋慧婷刘娇
- 文献传递
- 奶牛边缘无浆体MSP2的原核表达及抗原性鉴定
- 2012年
- 为克隆和原核表达牛边缘无浆体(A.marginale)膜表面蛋白2(MSP2),并分析其免疫原性,本研究通过PCR方法扩增A.marginale的MSP2基因,将其连接到pGEX 6p-1载体中,转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析,将纯化的MSP2重组蛋白免疫小鼠。结果表明表达并纯化了A.marginaleMSP2,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 邵光喜马国林衣菲郎秀艳蒋慧婷王春仁刘娇田秋丰倪宏波钱爱东
- 关键词：边缘无浆体原核表达免疫原性
- 奶牛边缘无浆体MSP2基因的原核表达及抗原性鉴定
- 克隆并原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale，A_marginale)膜表面蛋白2(Membrane surfaceDrotein 2，MSP2)，并分析其免疫原性。通过PCR方法扩增A．margi...
- 邵光喜衣菲郎秀艳蒋慧婷王春仁刘娇田秋丰倪宏波
- 关键词：边缘无浆体原核表达免疫原性
- 文献传递
