余艳辉
- 作品数：42 被引量：276H指数：11
- 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NF-κB介导的EBV-LMP1在Rat-1细胞转化和成瘤中的作用被引量：10
- 2007年
- 背景与目的:EB病毒潜伏性膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)是病毒基因组编码的致瘤蛋白。本研究拟探讨LMP1在细胞转化和致瘤过程中的作用机制。方法:采用基因重组方法构建LMP1和显性负突变IκBα逆转录病毒质粒pLNSX-LMP1和pBabe-IκBα,分别与含有转录因子NF-κB启动子的荧光素酶表达质粒共转染293细胞,单光子检测仪测定LMP1对NF-κB的活化作用及IκBα对NF-κB的抑制作用;同时将2种重组病毒载体分别导入PA317细胞包装,获取2种逆转录病毒(retrovirus,RV),单独(RV-LMP1)或先后(先RV-LMP1后RV-IκBα)感染体外培养的Rat1细胞,检测转导细胞的集落形成能力及裸鼠成瘤能力。结果:当pBabe-IκBα与pLNSX-LMP1以1∶1共转染,IκBα能使LMP1活化NF-κB的作用降低75%;当以3∶1共转染,LMP1的活化作用几乎全部被抑制。IκBα能明显抑制RV-LMP1感染细胞的恶性表型:平皿克隆形成数从368±7和287±17分别降至59±6和8±2(n=3,P<0.001);软琼脂集落形成数从477±13和347±10分别降至61±15和95±7(n=3,P<0.001);裸鼠成瘤能力显著降低,瘤体积自(1.61+0.23)cm3降至(0.20±0.08)cm3(n=5,P<0.001)。结论:EB病毒LMP1促Rat1细胞恶性转化作用主要依赖NF-κB的活化。
- 张志伟贺智敏周敏张琼余艳辉陈主初
- 关键词：NF-ΚBIΚBΑ细胞转化
- EB病毒LMP1-CTAR3对NP69细胞增殖和蛋白质表达的影响被引量：14
- 2009年
- 为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)第三个功能活性区域(CTAR3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制,采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1△232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351稳定表达细胞系.通过绘制生长曲线、平皿克隆形成试验和软琼脂集落形成试验比较野生型和突变型LMP1对NP69细胞增殖的影响,运用蛋白质组学方法鉴定NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351细胞间的差异表达蛋白,选用实时荧光定量RT-PCR与Western blot对其中部分蛋白质点差异表达进行验证.结果发现:a.突变型LMP1△232～351促NP69细胞增殖的能力较野生型LMP1明显降低(n=3,P<0.05);b.鉴定了LMP1-CTAR3在NP69细胞中参与调节的16个蛋白质(表达上调的蛋白质8个,下调的8个).c.实时荧光定量RT-PCR和Westernblot证实了部分上述蛋白质的差异表达.以上结果说明,LMP1-CTAR3是其发挥促细胞增殖的重要活性部位,可能通过参与调节G蛋白和异柠檬酸脱氢酶等蛋白质的表达而起作用.
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒差异表达蛋白
- STGC3新基因的克隆及功能初步分析被引量：14
- 2004年
- 背景与目的:研究显示,染色体3p21是鼻咽癌高频率杂合性丢失位点,本研究在对3p21区域与鼻咽癌相关的表达序列标签(expressedsequencetag,EST)筛选的基础之上,进行鼻咽癌相关新基因的克隆和功能研究。方法:采用cDNA克隆质粒测序及RACE方法,获取新基因全长cDNA。利用因特网上核酸、蛋白质数据库及蛋白质分析软件进行生物信息学分析。通过构建pEGFP-C2/STGC3绿色荧光表达载体,与脂质体共转染COS7、CNE2细胞,进行基因表达蛋白质定位分析。用Northernblot法检测STGC3在人其他正常组织及肿瘤细胞系表达状况。结果:在3p21区域获得一个全长为1271bp的cDNA新序列,生物信息学分析与已知基因无明显同源性,属于一个新基因,编码146个氨基酸,定位于染色体3p21,被命名为STGC3(GenBank登录号:AY078383)。蛋白质定位分析显示,STGC3融合蛋白存在于细胞浆及细胞核内;MTETMArray2多组织膜Northernblot显示该基因在人正常组织及肿瘤细胞均有表达,并在淋巴瘤等多种肿瘤细胞株中阳性杂交信号弱。结论:STGC3属于一个新基因,其表达的蛋白质存在于细胞浆及细胞核内。在鼻咽癌及多种肿瘤细胞株表达下调。
- 贺修胜肖志强陈主初赵素萍朱建华贺智敏李友军田芳余艳辉
- 关键词：鼻咽癌新基因胞浆肿瘤细胞株生物信息学分析细胞核
- Tet调控的乳腺癌耐受蛋白表达细胞系的建立及功能研究被引量：8
- 2004年
- 背景与目的:乳腺癌耐受蛋白(breastcancerresistanceprotein,BCRP)是1998年发现的新的ATP结合盒式(ATPbindingcassette,ABC)跨膜转运蛋白超家族成员。本研究拟建立Tet调控的具有功能的BCRP表达细胞系,为研究BCRP介导的药物耐受机制和探寻耐受逆转方法提供理想的实验平台。方法:利用Tet-on基因表达调控系统,先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-BCRP转染入PA317细胞,并用G418和潮霉素分别进行二轮筛选,挑取6个单细胞克隆并扩增培养;不同浓度的强力霉素(doxycycline,Dox)诱导后,用RT-PCR和Westernblot检测并选取BCRP表达量与Dox剂量具有较好量-效关系的PA317/Tet-on/TRE-BCRP细胞克隆;采用MTT方法检测米托蒽醌(mitoxantrone)对不同浓度Dox诱导下的PA317/Tet-on/TRE-BCRP克隆细胞的杀伤作用;采用BCRP特异性抑制剂Ko143的干扰试验来检测PA317/Tet-on/TRE-BCRP细胞对米托蒽醌的药物敏感性;米托蒽醌处理不同BCRP表达量的细胞后,利用流式细胞仪检测细胞内存留米托蒽醌所释放出来的荧光强度。结果:发现5号PA317/Tet-on/TRE-BCRP克隆细胞BCRP表达量与Dox诱导剂量具有较好的量-效关系;其药物耐受性与BCRP表达量呈正相关(r=0.995,P=0.002);Ko143能显著增强PA317/Tet-on/TRE-BCRP细胞对米托蒽醌的药物敏感性(P<0.
- 袁建辉贺智敏余艳辉陈主初
- 关键词：PA细胞系量-效关系克隆细胞超家族
- 新西兰兔血脂值测定被引量：2
- 1998年
- 利用全自动生化分析仪检测８０只新西兰兔的血脂值，包括甘油三脂（ＴＧ）、总胆固醇（ＣＨＯ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬＣ）、载脂蛋白Ａ（ＡｐｏＡＩ）、载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）、脂蛋白（Ｌｐ［ａ］）等７项指标，其数值分别为１．００±０．７３、１．７５±０．９１、０．４７±０．１７、０．８１±０．７１ｍｍｏｌ／Ｌ、０．１９±０．０４、０．０４±０．０１ｇ／Ｌ和１９．８±３０．７ｍｇ／Ｌ，并推算ＨＤＬＣ／ＣＨＯ、ＡｐｏＡ／ＡｐｏＢ为０．３４±０．１５、５．８５±３．６７。
- 余艳辉瞿湘萍李智郭兆贵
- 关键词：血脂值甘油三脂总胆固醇
- HER2介导乳腺癌细胞多药耐药的作用及机制被引量：13
- 2005年
- 目的筛选HER2高表达乳腺癌细胞化疗耐受的药物种类,探讨HER2介导的乳腺癌多药耐药的机制。方法构建HER2稳定高表达的乳腺癌细胞MCF-7/HER2模型;MTT法检测该细胞对多种临床常用的抗乳腺癌药物的敏感性;Hochest33258染色观察药物诱导的MCF-7/HER2的凋亡率,并采用聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中bcl-2和survivin基因的mRNA表达。结果MCF-7/HER2细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16及TSPA的耐药指数分别为对照细胞的74,22,2.5,3.5和2.8倍,出现了明显的药物抗性(P<0.05);而对CDDP,ADM,VBL,VCR,NBV和MTX等的耐药指数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);由Taxol,MMC,5-FU,VP-16诱导的MCF-7/HER2细胞凋亡率明显低于对照细胞;MCF-7/HER2细胞survivin基因表达明显高于对照组,而bcl-2基因表达与对照组比较,差异无统计学意义。结论HER2可介导乳腺癌细胞对Taxol,MMC,5-FU,VP-16和TSPA等的多药抗性,这种多药抗性的产生可能与HER2上调survivin表达所致的凋亡抗性有关。
- 丁渭郑春艳贺智敏吕辉刘孝荣余艳辉陈主初
- 关键词：乳腺癌表皮生长因子受体2存活素药物耐受性
- 银杏叶制剂对小鼠耐力、耐缺氧、寿命的影响及其毒性试验被引量：7
- 1996年
- 湖南麓山天然银杏叶制剂能明显增强小鼠耐力和抗缺氧能力，并能延长饥饿小鼠寿命。小鼠口服与腹腔注射ＬＤ５０分别为大于６ｇ／ｋｇ和１４８ｇ／ｋｇ。
- 赵学军陆吉力李智余艳辉郭兆贵
- 关键词：银杏缺氧症半数致死量
- 人NPCEDRG基因启动子的克隆及CCAAT/NFY结合位点初步分析被引量：12
- 2011年
- NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,联合应用生物信息学和报告基因载体系统分析方法对NPCEDRG基因启动子区进行克隆及功能分析,系统发育进化足迹分析结果表明,NPCEDRG基因5′端调控区-180～+235 bp区间在脊椎动物中高度保守,该保守区域中存在包括CCAAT/NFY、STAT1和SP1等转录因子结合位点.构建Luc和/或EGFP报告基因表达载体并检测其启动子活性,-146～-8 bp区域有较强的启动子活性,电泳迁移阻滞分析实验(EMSA)提示,CCAAT/NFY转录因子结合位点是NPCEDRG基因的转录调控元件.因此,研究确定-146～-8 bp区域是NPCEDRG基因核心启动子区域且启动子核心元件CCAAT/NFY可能参与NPCEDRG基因的转录调控.
- 侯德富关勇军关瑞欧阳咏梅余艳辉陈主初
- 关键词：核心启动子转录调控
- LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端第三活性区在鼻咽上皮细胞生长中的作用。方法采用逆病毒感染的方法,建立稳定表达野生型LMP1(LMP1WT)和突变型LMP1(LMP1△232-351)的鼻咽上皮细胞(NP69)系,然后通过细胞生长曲线、平皿克隆形成与软琼脂集落实验、细胞周期与抗凋亡检测等方法,观察LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响。结果LMP1△232-351体外促转化细胞生长能力较LMP1WT明显降低(P<0.01);NP69-LMP1△232-351细胞的凋亡与细胞G1期分布均较NP69-LMP1WT细胞增加(P<0.01)。结论LMP1羧基末端第三活性区可能通过调节细胞周期与凋亡而影响鼻咽上皮生物学特性。
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒生物学特性
- 高脂血症时血清二乙基对硝基苯磷酸酯酶活性的变化被引量：1
- 2002年
- 目的 :研究tritonWR 13 3 9致小鼠高脂血症时血清二乙基对硝基苯磷酸酯酶 (ParaoxonaseI ,PON 1)活性的变化及PON 1活性与血浆脂质含量之间的关系。方法 :在小鼠尾静脉注射tritonWR13 3 9后的 3h ,6h ,12h ,2 4h ,48h ,72h ,眼球摘除术取血 ,用酶标法测定小鼠血浆总胆固醇 (TC) ,甘油三酯 (TG ) ,高密度脂蛋白 -胆固醇 (HDL -C) ,载脂蛋白AI (ApoAI) ,载脂蛋白B (ApoB含量 ) ,并计算出ApoAI/ApoB ,HDL -C/TC比值 ,用分光光度计法测定PONI活性。结果 :TritonWR 13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆TC和TG含量即急剧增高 ,与对照组相比 ,P <0 .0 1,分别在注射后 2 4h和 3h达到峰值 ,随后逐渐下降 ,其中血浆TG含量在注射后 48h即恢复正常水平。tritonWR13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆HDL -C和ApoB含量急剧增高 ,与对照组相比 ,P <0 .0 5,分别在注射后 2 4h和 6h达到峰值 ,随后逐渐下降 ,分别在注射后 48h和 72h恢复正常水平。tritonWR13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆ApoAI含量即急剧降低 ,与对照组相比 ,P <0 .0 5,随后逐渐增高 ,在注射后 6h即恢复正常水平。tritonWR 13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆ApoAI/ApoB和HDL-C/TC比值减少 ,与对照组相比 ,P <0 .0 1,随后逐渐增高 ,其中ApoAI/ApoB比值在 72h恢复?
- 文军徐明余艳辉郭兆贵
- 关键词：高脂血症小鼠血浆脂质
