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人肺癌相关基因HLCDG1在大肠杆菌中的表达: 2006年; 目的构建新克隆的肺癌抑瘤基因候选者HLCDG1的融合表达质粒pGEX-6P-1/HLCDG1并在原核表达系统中表达。方法采用多聚酶链式反应(PCR)扩增HLCDG1基因蛋白编码序列,将该片断插入原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL-21扩增。构建的融合表达质粒经酶切和测序鉴定后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色和W estern b lot鉴定实验结果。结果构建的融合表达质粒酶切和测序鉴定阅读框架正确,导入大肠杆菌中经IPTG诱导出一条分子量约为46kD的新蛋白带,主要存在于细菌沉淀中,W estern b lot鉴定其为GST-HLCDG1融合蛋白。结论HLCDG1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中有效表达,为进一步研究该蛋白质的结构和功能奠定研究基础。; 邹飞雁陈主初贺智敏; 关键词：肺肿瘤大肠杆菌

正常人大肠上皮衰老相关蛋白质组研究: 背景与目的大肠上皮衰老是一个渐进性、多基因参与的复杂过程,随着衰老的发生发展,一方面肠上皮的多种生理功能下降;另一方面包括大肠癌在内的肠道疾病的发病率显著升高,但其发生机制尚不明确。本研究的目的是利用蛋白质组学(prot...; 李明肖志强陈主初冯雪萍张鹏飞李峰; 文献传递

人结肠上皮衰老相关蛋白质的筛选被引量：2: 2005年; 目的:筛选与人结肠上皮衰老相关的蛋白质以探讨人结肠上皮衰老及对癌症易感的分子机制。方法:应用双向凝胶电泳技术分离青年人及老年人的正常结肠上皮的总蛋白,经银染显色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图谱,搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:建立了青年人和老年人的正常结肠上皮的双向凝胶电泳图谱,质谱鉴定得到青年人和老年人之间的表达差异大于2倍的蛋白质点19个,包括17种非冗余蛋白质,它们的功能涉及物质代谢、能量产生、物质转运、抗氧化以及蛋白质的翻译、修饰和折叠等。结论:筛选并鉴定了17种结肠上皮衰老相关的蛋白质,提示线粒体功能受伤、抗氧化能力下降是结肠上皮衰老的重要原因,为揭示结肠上皮的衰老机制及衰老的结肠上皮对癌症易感的机制提供了线索。; 朱果肖志强陈主初李建玲张鹏飞杨轶轩冯雪萍袁伟健; 关键词：结肠上皮衰老癌症蛋白质组学

肿瘤:一种蛋白质组病被引量：2: 2010年; 恶性肿瘤的发生是一个涉及多因素、多基因的多阶段病理过程.以往的研究主要集中在基因组和转录组分析.随着人类基因组计划的完成,肿瘤研究开始进入"后基因组时代",肿瘤蛋白质组学应运而生.蛋白质作为基因功能的主要执行者,一方面在肿瘤发生发展过程中扮演重要角色,另一方面在很大程度上决定正常细胞和肿瘤细胞之间的差异(如异型性、恶性特征等).本文提出,肿瘤是一种蛋白质组病,并根据肿瘤比较蛋白质组、表达蛋白质组、功能蛋白质组和结构蛋白质组研究进展,从肿瘤发生发展过程中蛋白质(组)表达水平及状态、蛋白质翻译后修饰、蛋白质相互作用及网络调控等三个方面进行阐述.该观点的提出,将为肿瘤发病机制的研究开辟新的领域,为肿瘤的诊断(如生物标志物筛选)和筛选(如药物新靶标)提供新的思路,具有重要的科学意义和临床应用价值.; 李国庆肖哲锋刘健平李萃李峰陈主初; 关键词：肿瘤蛋白质表达谱蛋白质相互作用

人支气管上皮不典型增生与浸润癌组织的比较蛋白质组学研究被引量：4: 2004年; 为筛选支气管上皮鳞状不典型增生进展的分子标志物 ,采用改良的脱氧胆酸三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质进行双向电泳 (two dimensionalelectrophoresis,2 DE) ,应用ImageMaster 2D分析软件、Student’st 检验识别差异蛋白质点 ,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assistedlaserdesorption/ionizationtime of flightmassspectrometry ,MALDI TOF MS)得到相应的肽质指纹图 (peptidemassfingerprint,PMF) ,搜索数据库鉴定差异蛋白质 .由此获得人支气管上皮不典型增生和浸润癌组织的 2 DE图谱及其凝胶的平均蛋白质点数 (12 73 0 0± 4 3 31,132 6 0 0± 6 6 6 3) ,且两阶段间平均差异蛋白质点数为 5 6 0 0± 8 96 .取 38个差异蛋白质点进行PMF分析 ,鉴定出一些与细胞生长、分化或肿瘤发生等有关的蛋白质 ,随即应用免疫组化检测差异蛋白质EGFR、c Jun、Mdm2在两类组织中的表达 ,其结果也显示了类似的表达差异 .支气管上皮不典型增生恶性转化过程中存在蛋白质的差异表达 ,这些差异蛋白质可能以不同的方式参与了癌变过程 ,且EGFR、c Jun、Mdm2的免疫组化验证结果与质谱结果的一致性表明。; 吴晓英陈主初肖志强李萃汪春年李建玲冯雪萍张鹏飞; 关键词：比较蛋白质组学人支气管上皮差异表达蛋白质

人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达被引量：2: 2001年; 目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDNA真核表达载体pcDNA3 .1 - 2E1 ,并经脂质体介导转入CNE2细胞 ,通过G41 8筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养。结果 :经Southernblot和Westernblot对一系列抗性克隆细胞进行检测 ,获得 2个具有外源CYP2E1cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2 - 2E1 - 1及CNE2 - 2E1 - 2。结论 :建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制研究的体外模型。; 王水良贺智敏陈主初; 关键词：细胞色素P4502E1 CDNA 体外模型鼻咽癌

激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究被引量：7: 2008年; 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物.; 程爱兰黄卫国张鹏飞李茂玉彭芳李峰李萃易红李美香陈主初肖志强; 关键词：激光捕获显微切割鼻咽癌二维凝胶电泳基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

NF-κB介导的EBV-LMP1在Rat-1细胞转化和成瘤中的作用被引量：10: 2007年; 背景与目的:EB病毒潜伏性膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)是病毒基因组编码的致瘤蛋白。本研究拟探讨LMP1在细胞转化和致瘤过程中的作用机制。方法:采用基因重组方法构建LMP1和显性负突变IκBα逆转录病毒质粒pLNSX-LMP1和pBabe-IκBα,分别与含有转录因子NF-κB启动子的荧光素酶表达质粒共转染293细胞,单光子检测仪测定LMP1对NF-κB的活化作用及IκBα对NF-κB的抑制作用;同时将2种重组病毒载体分别导入PA317细胞包装,获取2种逆转录病毒(retrovirus,RV),单独(RV-LMP1)或先后(先RV-LMP1后RV-IκBα)感染体外培养的Rat1细胞,检测转导细胞的集落形成能力及裸鼠成瘤能力。结果:当pBabe-IκBα与pLNSX-LMP1以1∶1共转染,IκBα能使LMP1活化NF-κB的作用降低75%;当以3∶1共转染,LMP1的活化作用几乎全部被抑制。IκBα能明显抑制RV-LMP1感染细胞的恶性表型:平皿克隆形成数从368±7和287±17分别降至59±6和8±2(n=3,P<0.001);软琼脂集落形成数从477±13和347±10分别降至61±15和95±7(n=3,P<0.001);裸鼠成瘤能力显著降低,瘤体积自(1.61+0.23)cm3降至(0.20±0.08)cm3(n=5,P<0.001)。结论:EB病毒LMP1促Rat1细胞恶性转化作用主要依赖NF-κB的活化。; 张志伟贺智敏周敏张琼余艳辉陈主初; 关键词：NF-ΚB IΚBΑ 细胞转化

缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质组学研究被引量：8: 2005年; 目的观察缺血预处理对兔肺缺血再灌注性损伤的蛋白质变化,探讨其可能的肺保护机制。方法12只家兔,随机分为预处理组和对照组,每组6只。对照组经历单纯的缺血再灌注损伤,预处理组在缺血再灌注前予以缺血预处理。以二维电泳分离肺组织中的全部蛋白质,应用PDQuest软件寻找差异表达的蛋白质点并以MALDI-TOF质谱仪和Mascot软件对其鉴定。结果研究发现了35个明显差异表达的蛋白质,包括磷酸肌醇3激酶Δ催化亚单位在内的17个蛋白质达到了鉴定。结论通过磷酸肌醇3激酶信号传导通路抑制炎性反应可能是缺血预处理的保护机制。; 张春芳陈主初郭海周张恒肖志强陈胜喜; 关键词：蛋白质组学缺血预处理磷酸肌醇3激酶 MALDI-TOF

一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法: 本发明提供了一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法，用于制备诊断、预测、检测或筛查肺腺癌的制剂；还可以用于制备诊断、预测、检测或筛查肺腺癌癌细胞扩散、肺腺癌淋巴结转移、肺腺癌临床分期、肺腺癌患者复发的制...; 张鹏飞肖志强陈主初李萃易红李茂玉彭芳; 文献传递

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陈主初

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