孙世惠
- 作品数：58 被引量：78H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 可调控肝脏特异性表达HCV全基因转基因小鼠模型的建立
- 2015年
- 目的:构建一种可调控肝细胞特异性表达丙型肝炎病毒(HCV)全基因的小动物模型。方法:将9.6 kb的HCV全长基因JFH1插入Tet-on系统效应表达载体p TRE2中,并在HCV全基因3'端插入丁型肝炎病毒(HDV)核酶序列,从而构建转基因载体p TRE2-JFH1(HCV);将该转基因载体线性化后显微注射获得整合有HCV全基因的TRE2-HCV首建鼠;将该阳性鼠与本室保存的Alb-rt TA转基因小鼠杂交,获得肝细胞白蛋白启动子调控HCV全基因表达的Tet-on-Alb-HCV双转基因小鼠;在强力霉素(Dox)诱导后通过PCR、Western印迹、免疫组化等方法鉴定转基因小鼠HCV基因整合及HCV蛋白在肝组织中的表达;实时定量PCR检测小鼠血清及肝组织中的HCV滴度;用HCV反义小分子药物anti-mi R122评价该模型在药物评价中的应用。结果:获得了整合rt TA基因和HCV全长基因的双转基因小鼠;Dox诱导下,该转基因小鼠可在肝组织长期特异性表达HCV全长基因,小鼠血清中可检测到HCV的RNA;分子药物anti-mi R122可降低血清中的HCV滴度。结论:构建了可调控肝组织特异性表达HCV全基因的转基因小鼠模型,该小鼠模型可应用于HCV药物筛选和评价研究。
- 高同同刘晨风姜玉庭王友亮吴小红曾扬赵亚光郭彦于虹赵光宇高基民孙世惠周育森
- 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠药物评价
- 补体在百草枯急性中毒肺损伤中的作用研究
- 2012年
- 目的:研究补体在百草枯(PQ)急性中毒肺损伤中的作用。方法:采用20 mg/kg PQ染毒小鼠,染毒后0 h、4 h、12 h、24 h、48 h检测血清C3c水平、肺组织C3、C5a和C1q沉积和分布;选用PQ染毒剂10 mg/kg、20 mg/kg分别在染毒前48 h、36 h、24 h腹腔内注射眼镜蛇毒因子(CVF)2.5μg/200μl,染毒后48 h留取支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织,与未注射CVF以相同剂量染毒小鼠比较BALF总蛋白浓度、髓过氧化物酶(MPO)活性、组织病理以及存活率差异。结果:20 mg/kg PQ染毒小鼠血清C3c水平在染毒后12 h升高,24 h达到高峰,持续至48 h;免疫组化显示染毒后4 h C3在肺组织沉积,12 h开始C3沉积减少;C5a、C1q自染毒后4 h开始在肺组织沉积,且随病程延长,着色逐渐加重;CVF阻断补体后染毒小鼠肺组织损伤减轻,炎性细胞浸润减少,且存活时间显著延长。结论:在小鼠PQ中毒急性肺损伤早期,补体即被激活,并发挥重要作用,采用CVF进行补体抑制或阻断,可以有效减轻组织病理损伤。
- 安莹波王汉斌吴小红熊锡山孙世惠周育森
- 关键词：百草枯急性肺损伤补体眼镜蛇毒因子
- 禽流感病毒感染小鼠模型病理损伤及抗原定位研究被引量：1
- 2009年
- 目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 d后取小鼠肺、脑、脾、肠、心、肝、肾等组织,制备石蜡切片并进行组织病理损伤和抗原定位研究。结果小鼠肺组织表现为弥漫性肺损伤,脑组织出现轻度炎症反应,脾组织结构完整但脾小体可见凋亡细胞,其它脏器组织结构未查见组织病理损伤;利用M2、NS1单抗,采用免疫组织化学方法检测发现小鼠肺、脑、肠等均有M2、NS1抗原分布。结论高致病性H5N1病毒感染可在小鼠肺、脑、肠等多种组织中复制,引起严重的肺组织病理损伤及轻度的脑组织及脾组织病理损伤。
- 孙世惠赵光宇于虹郭彦吴小红范薇曾林周育森
- 关键词：病理损伤病毒复制
- 重组蛋白ASP-1对高致病性禽流感M2e疫苗分子的佐剂活性被引量：1
- 2011年
- 目的探讨重组蛋白ASP-1对高致病性禽流感M2e疫苗分子的免疫佐剂作用。方法在大肠杆菌原核表达系统中获得融合了pET32(+)表达载体蛋白trxA和M2e三联体的重组蛋白TrxA-M2e3作为高致病性禽流感M2e疫苗分子;在大肠杆菌中截短表达盘尾丝虫活化相关蛋白ASP,获得截短片段ASP-1作为佐剂蛋白。将纯化后的重组蛋白TrxA-M2e3和ASP-1混合或者单独使用,免疫BALB/c小鼠后检测血清中M2e抗体水平。使用不同进化分支H5N1病毒对免疫小鼠进行致死性攻击,检测交叉免疫保护效果。结果获得了纯化的重组蛋白TrxA-M2e3和ASP-1;与TrxA-M2e3单独免疫组相比,应用佐剂蛋白ASP-1可显著提高免疫小鼠血清中M2e特异性IgG抗体滴度(P<0.05)。在不同进化分支H5N1病毒的致死性攻击后,应用ASP-1与TrxA-M2e3联合免疫小鼠的肺组织病毒复制得到有效抑制,免疫小鼠全部存活。而其它免疫组小鼠全部死亡。结论 M2e是发展新型禽流感疫苗应对病毒变异的理想靶抗原分子,而重组蛋白ASP-1可以为一种新型佐剂在M2e疫苗分子诱导交叉免疫保护中发挥关键作用。
- 俞建萍赵光宇肖文珺郭彦孙世惠寇志华于虹温晶何后军周育森
- 关键词：高致病性禽流感疫苗佐剂
- 具有中国人群MHC免疫限制性特征的人MHC转基因小鼠模型研究
- 引言主要组织相容性复合体(MHC)是人体中多态性最丰富的基因系统,在机体免疫细胞分化发育、免疫应答和调节和组织器官发育及免疫耐受等方面发挥重要生物学作用。目前在药物和疫苗发展、致病机制研究中使用的实验小鼠,其主要组织相容...
- 孙世惠曾扬陈月红周育森
- 提高转基因表达水平的策略被引量：6
- 2005年
- 随着转基因相关技术的发展,转基因动物技术在许多方面得到了成功应用。但外源基因在体内的表达仍然难以预测,特别是大动物的转基因,由于制备效率低下,因而难以筛选出足够的高表达的阳性动物数。基因表达调控研究对提高外源基因在动物体内的表达水平提供了一些新手段,本文就避免转基因的位置效应、控制外源基因在动物宿主基因组中的整合、提高转基因的表达效率、构建转基因载体和使用外源基因需要注意的问题等进行综述。
- 孙世惠林艳丽邓继先
- 关键词：转基因技术基因表达同源重组
- 一种HIV-1多表位重组蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种HIV-1多表位重组蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的蛋白是如下a)或b)或c)：a)由序列1的第13-164位所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；c)将a)或b)...
- 周育森寇志华杨裔郭彦于虹孙世惠赵光宇李军锋
- 以ASP-1重组蛋白为佐剂发展H5N1病毒HA重组疫苗的实验研究
- <正>目的:本研究旨在以来源于盘尾丝虫的活化相关蛋白(ASP-1)作为一种新型生物佐剂,利用其佐剂活性进行H5N1病毒HA重组疫苗研究,发展出具有良好免疫原性和免疫保护效果的H5N1病毒新型疫苗。方法:本研究首先通过生物...
- 赵光宇俞建萍肖文珺郭彦于虹寇志华孙世惠周育森
- 文献传递
- 一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用
- 本发明公开了一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用。HNF1α的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。HNF1α能够抑制肝细胞分泌表达s抗原（HBsAg），e抗原（HBeAg）以及降低HBV DNA载量，HNF1α...
- 周育森李军锋代晓朋张伟孙世惠寇志华赵光宇于虹郭彦
- 文献传递
- 内含子中正筛选标记neo基因在转录中的剪切研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究插入内含子中的正筛选标记基因neo在转录中的剪切情况。方法:克隆了猪血清白蛋白基因5'端调控序列,以猪基因组DNA为模板,P10/P11为引物,PCR扩增猪血清白蛋白基因翻译终止密码子后2.9kb的3'端调控序列;以pEGFP-1为模板,P400/P401为引物PCR扩增绿色荧光蛋白(EGFP)基因,插入猪血清白蛋白基因5'端调控区之后,在3'端调控序列的内含子中靠近N端的序列中插入正筛选标记基因neo,构建了表达EGFP的真核表达载体pEXp11。转染人肝癌细胞系HepG2,通过G418药物筛选获得稳定转染的抗药性细胞克隆。提取抗性细胞克隆基因组RNA并进行反转录,获得cDNA序列。结果:用引物D400/D401及分别位于neo基因和3'端调控序列上的一对引物D394/D357进行PCR检测,其中D394/D357并未扩增出目的条带。结论:插入内含子中的neo基因在转录过程中可随内含子一起被剪切。
- 孙世惠周艳荣陈红星林艳丽黄培堂邓继先
- 关键词：RT-PCR
