张连成
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 炭疽毒素受体结构和功能研究进展被引量：2
- 2013年
- 肿瘤血管内皮标志物8(TEM8)和毛细血管形态发生蛋白2(CMG2)是已知的两个炭疽毒素受体,它们的主要功能是当炭疽杆菌侵染细胞时介导炭疽毒素进入宿主细胞。这两个受体都是涉及到细胞外基质动态平衡的I型跨膜蛋白,并且都因为它们在血管生成或血管内皮细胞中表达增强而被发现。有研究发现TEM8能够调节内皮细胞迁移和血管形成,而CMG2则在内皮细胞增殖过程中起重要作用。进一步的研究显示它们与整联蛋白同源性较高,但它们确切的生理功能和作用机制尚不明确。本文中,主要讨论这两种蛋白的结构和它们作为炭疽毒素受体介导炭疽毒素进入细胞的分子机制,然后我们简单探讨一下TEM8在靶向肿瘤血管内皮细胞的抗血管生成和抗肿瘤疗法方面的研究进展,最后我们展望了下一步炭疽毒素受体研究的热点-它们的配体及生理功能研究。
- 张连成高丽华郗永义邵勇贾康杰胡显文陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素细胞受体血管生成
- PA4-Fc的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种PA4-Fc的融合蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白，是如下1）或2）中任一所述的蛋白质：1）由序列表中的序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；2）将序列表中的序列2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸...
- 胡显文郗永义段海锋高丽华邵勇陈惠鹏胥照平张连成
- 文献传递
- 重组人VEGF可溶性受体的表达纯化及结合性质初探被引量：2
- 2014年
- 目的:表达优化的血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1(VEGFR1)胞外区第2个类免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)和VEGF受体2(VEGFR2)胞外区第3个类免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)与人IgG1 Fc片段的融合产物VEGF-Trap2,探讨该产物与人源VEGF165(hVEGF165)之间的亲和力。方法:将优化的目的基因VEGFR1D2/R2D3连接到真核表达载体pIRES2-EGFP-Fc中,转染CHO-K1细胞并筛选高表达目的蛋白VEGF-Trap2的细胞系,亲和纯化VEGF-Trap2蛋白,通过非竞争性ELISA及生物膜干涉技术检测VEGF-Trap2与hVEGF165之间的亲和力。结果:DNA测序表明真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2序列正确;获得表达VEGF-Trap2的细胞系;非竞争性ELISA实验中,VEGF-Trap2与hVEGF165功能性亲和常数达到1.86×107L/mol;生物膜干涉实验中,hVEGF165与VEGF-Trap2的平衡解离常数达到3.13×10-9mol/L。结论:构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2并在CHO-K1细胞中稳定表达,重组蛋白VEGF-Trap2与hVEGF165有较高的亲和力,提示其可用于阻断VEGF信号传导途径,为该蛋白进一步的体外及体内实验奠定了基础。
- 李伊培高丽华张连成邵勇刘羽潘芸高招刚张嵘胡显文陈惠鹏
- 关键词：血管内皮细胞生长因子受体FC融合蛋白CHO-K1细胞
- 人尿激酶型纤溶酶原激活因子截短型突变体与绿色荧光蛋白在真核细胞HEK293F中的融合表达
- 2013年
- 目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)截短型突变体与绿色荧光蛋白(EGFP)分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达。方法:采用PCR法,分别以质粒pIRES2-EGFP和重组质粒pcDNA3.1(+)/uPA为模板,扩增出带BamHⅠ和XbaⅠ酶切位点的EGFP及带NheⅠ和HindⅢ酶切位点的uPA截短体基因片段,先后将EGFP和截短型uPA基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,转入HEK293F细胞,用G418对转染细胞进行加压筛选,通过共聚焦显微镜观察和ELISA方法鉴定表达产物。结果:DNA测序结果显示,uPA不同截短型突变体基因片段与EGFP基因融合的真核表达载体构建成功,共聚焦显微镜观察发现HEK293F细胞中有绿色荧光且定位于细胞质中,ELISA检测到HEK293F细胞培养上清中分泌型融合蛋白的表达。结论:构建了uPA截短型突变体与EGFP分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达,为后期研究uPA的相互作用蛋白及其生理功能奠定了基础。
- 张连成高丽华张昕潘芸高招刚李伊培胡显文陈惠鹏
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活因子绿色荧光蛋白真核表达融合蛋白
- 抗VEGF/VEGFR靶向肿瘤血管药物的研究进展被引量：10
- 2014年
- 研究表明,肿瘤的生长转移和新血管的生成有密切关系,其中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其信号途径在肿瘤血管生成中起关键作用。阻断该途径的任何环节均可有效抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移。近年来,已有多种以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物投入临床应用,其中bevacizumab为第一个获批上市的抗肿瘤血管生成药物。继bevacizumab后,一种以基因工程手段获得的人Fc融合蛋白Zaltrap也成功在美国上市,这种杂交分子的药代动力学明显优于单克隆抗体,能更好的遏制肿瘤血管的发生并消退已形成的肿瘤血管。在肿瘤的临床治疗中,Zaltrap比bevacizumab显示出更大的优势。此外,VEGFC/D Trap及小分子酪氨酸激酶抑制剂也能有效抑制肿瘤血管的生成。在此对以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物进行综述。
- 李伊培郗永义张连成高丽华邵勇刘羽潘芸高招刚胡显文陈惠鹏张嵘
- 关键词：VEGF/VEGFR肿瘤血管生成抗肿瘤药物AFLIBERCEPT
- hTEM8-N-RFP融合蛋白真核表达载体的构建及在HEK293F细胞中表达
- 2013年
- 目的:构建人肿瘤内皮标志物8(hTEM8)胞外区(N端)与红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体并在HEK293F细胞中表达,为进一步研究hTEM8的相互作用蛋白及其在肿瘤血管形成过程中的机制奠定实验基础。方法:以质粒pDsRed-Express-C1和重组质粒pcDNA3.1(+)-hTEM8/Fc为模板,PCR扩增RFP和hTEM8-N基因片段,先后插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP,转染HEK293F细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白在转染细胞中的的表达,并用G418对转染的细胞进行加压筛选,Western blot检测hTEM8-N-RFP融合蛋白在转染细胞中的表达。结果:DNA测序、酶切鉴定的结果显示,表达载体pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP构建成功,且序列正确。转染后经荧光显微镜观察到HEK293F细胞中有红色荧光,经加压筛选单克隆后,在荧光显微镜下观察到稳定表达红色荧光的细胞株,Western blot检测到融合蛋白hTEM8-N-RFP在真核细胞HEK293F中获得表达。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-hTEM8-N-RFP真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达,为后期研究hTEM8的相互作用蛋白和其生理功能奠定了良好的基础。
- 张连成高丽华刘羽郗永义邵勇贾康杰胡显文陈惠鹏
- 关键词：红色荧光蛋白真核表达融合蛋白
- 抗CD20融合蛋白在CHO细胞中的表达及其纯化与鉴定
- 2012年
- 目的:构建CD20胞外区与Igβ胞外区和人IgG1 Fc融合基因的表达载体,并在CHO细胞中表达。方法与结果:根据已知的IgM的CH2区域和Igβ胞外区序列,分别设计PCR引物并进行PCR扩增,然后用重叠PCR法扩增得到900 bp的Igβ-CH2序列,插入本实验室构建的pIRIS-EGFP-Fc载体,转化大肠杆菌,得到pIRIS-Igβ-CH2-Fc重组质粒,将其转染CHO-K1细胞,在G418抗性培养基中培养,荧光显微镜观察结合ELISA法筛选高表达细胞系,细胞系扩大培养后,通过亲和层析rProtein A柱纯化得到纯度融合蛋白,SDS-PAGE显示目的蛋白去糖基化后,相对分子质量约为42×103。结论:得到了Igβ-CH2-Fc重链抗体样分子,并鉴定为糖蛋白;须进一步对所得蛋白的生物学活性进行检测,验证其是否能够通过胞外区蛋白定位于B细胞淋巴瘤细胞表面对B淋巴瘤细胞进行杀伤。
- 赵子兰邵勇高丽华张连成胡显文陈惠鹏
- 关键词：CD20B细胞淋巴瘤融合蛋白
- PA4-Fc的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种PA4-Fc的融合蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白，是如下1）或2）中任一所述的蛋白质：1）由序列表中的序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；2）将序列表中的序列2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸...
- 胡显文郗永义段海锋高丽华邵勇陈惠鹏胥照平张连成
- 文献传递
- CMG2-Fc融合蛋白突变体筛选及中和炭疽毒素活性分析
- 2016年
- 目的:筛选能有效中和炭疽毒素和抵抗炭疽毒素损伤细胞的CMG2-Fc(炭疽毒素受体II-人免疫球蛋白Fc段融合蛋白)突变体。方法:运用FoldX等计算软件分析CMG2与PA晶体学结构,设计能提高CMG2-PA亲和力的突变体分子,并与人IgG1Fc片段构成融合基因,转染CHO-S细胞并通过亲和层析获得CMG2-Fc突变体蛋白,通过亲和力检测和细胞保护实验分析各突变体中和炭疽毒素能力。结果:筛选并表达了8个CMG2-Fc突变体分子,亲和力实验显示其中E117Q突变可明显提高CMG2-Fc与PA的亲和力(KD=1.35×10-11 mol/L),细胞保护实验提示E117Q突变能有效提高CMG2-Fc中和炭疽毒素能力(CMG2-Fc(E117Q)的IC50为15 ng/μL,而wt CMG2-Fc的IC50为50ng/μL)。结论:CMG2-Fc(E117Q)突变体分子可作为拮抗炭疽毒素损伤的炭疽治疗药物分子,进行进一步研究。
- 刘宗伟任雨春郗永义岳俊杰张连成邵勇高丽华胡显文周艳荣吴晓洁陈红星
- 关键词：炭疽炭疽毒素FC融合蛋白
- 一种体内标记转录RNA的新技术
- 2012年
- 目的:验证一种体内标记转录RNA的新技术,并用该技术观察一种长寿药物雷帕霉素对真核细胞HEK293中RNA合成的影响。方法:将尿嘧啶类似物5-乙炔尿苷(EU)和雷帕霉素加到HEK293细胞培养基中,共同孵育2h,然后在激光共聚焦显微镜下对EU标记的新合成RNA进行观察;用Image-pro plus软件对图像的荧光强度进行分析,获得反应荧光强度的平均光密度数值;用SPSS软件对数值进行统计分析。结果:激光共聚焦显微镜下,可见EU标记的新合成RNA主要分布在胞质和核仁中,以核仁中荧光最强;Image-pro plus软件和SPSS软件分析表明,加入雷帕霉素前后,细胞新合成的RNA平均光密度无明显差别。结论:EU是一种安全、简单、快速而灵敏的检测新合成RNA的新技术,用该技术检测表明长寿药物雷帕霉素不影响真核细胞HEK293中总RNA的合成。
- 张朵高丽华邵勇郗永义张连成陈惠鹏胡显文
- 关键词：雷帕霉素RNA
