曹飞
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 西尼罗病毒DNA形式复制子的构建及免疫原性研究
- 西尼罗病毒(West Nile virus)属于黄病毒科黄病毒属,该病毒感染人类可导致西尼罗热、西尼罗脑炎、脑膜炎等严重疾病。自1999年首次在美国纽约暴发流行后,西尼罗病毒在北美地区迅速蔓延,每年可导致3000多人患病...
- 曹飞
- 关键词：西尼罗病毒复制子DNA疫苗免疫原性
- 文献传递
- 西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用
- 2013年
- 目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入PacⅠ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(R.luc)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc。将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和R.luc活性。结果与结论获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致。将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,R.luc的活性随时间延长而增强。本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础。
- 张富军李晓峰曹飞赵慧邓永强朱舜亚姜涛秦鄂德秦成峰
- 关键词：RNA西尼罗病毒复制子转染
- 西尼罗热疫苗的研究进展
- 2009年
- 西尼罗病毒感染可导致轻微或严重的疾病甚至死亡,对人畜健康危害较大。疫苗是预防西尼罗病毒感染的重要手段。近年来,西尼罗热疫苗的研究取得了重大进展,尤其是反向遗传学技术的应用进一步加快了其研发进程。本文就近几年西尼罗热疫苗的研究进展作一综述。
- 曹飞姜涛秦鄂德秦成峰
- 关键词：西尼罗热疫苗反向遗传学复制子
- 登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2010年
- 目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白,并通过透析对目的蛋白进行复性;纯化复性后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光法测定抗体效价。结果成功构建了高效表达登革1型病毒NS1蛋白的原核表达载体,表达的重组NS1蛋白占菌体蛋白总量的50%以上,以包涵体形式存在;免疫印迹表明表达的重组NS1蛋白能够为登革病毒兔抗血清识别,纯化后纯度可达95%以上;免疫小鼠后获得了效价>1∶1000的抗登革病毒NS1蛋白的鼠多克隆抗体。结论原核表达的重组NS1蛋白具有良好的免疫原性,诱导产生的多克隆抗体能够有效识别天然NS1蛋白,为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体的生物学功能奠定了基础。
- 梅竹邓永强曹飞于曼朱舜亚秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革热病毒病毒非结构蛋白质类抗体
