李雪萍
- 作品数：12 被引量：26H指数：4
- 供职机构：复旦大学上海医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科技发展基金上海市卫生局科研基金卫生行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎衣原体特异性单克隆抗体的研制及应用
- 2008年
- 采用肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)TW-183的纯化原体免疫BALB/C雄性小鼠,将小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞融合,杂交细胞通过有限稀释法克隆,获得1株稳定分泌Cpn-单克隆抗体(Cpn-McAb)的细胞株,单抗属IgG2b亚型及抗Cpn-MOMP抗体。自制Cpn-McAb与鹦鹉热衣原体原体有较弱的交叉反应;与沙眼衣原体原体无交叉反应,特性与进口Cpn-McAb一致。为了评估Cpn-McAb,用自制和进口Cpn-McAb同时检测外周血单核细胞标本454例,Cpn-Ag阳性率分别为53·3%和52·6%,Kappa值0·714,两者有较高的一致性。结果提示,自制Cpn-McAb几乎和进口Cpn-McAb一样有较高的特异性和敏感性,可替代进口单抗用于临床Cpn感染的检测,有助于相关疾病的诊治。
- 王卫群钱利生史益军李雪萍白永怿徐坚余竹元
- 关键词：微量免疫荧光外周血单核细胞
- 制备肺炎衣原体抗原片检测血清抗体被引量：2
- 2006年
- 目的:探索肺炎衣原体抗原片检测血清抗体法在诊断Cpn感染中的实际应用前景。方法:应用进口肺炎衣原体(Cpn)毒株感染Hep-2细胞,分别以瑞氏-姬母萨染色、吖啶橙染色和直接免疫荧光染色等3种方法鉴定Cpn感染细胞。纯化获取大量Cpn抗原,用于制备斑点抗原片。建立微量免疫荧光染色法(MIF)检测血清抗体,诊断Cpn感染。结果:Cpn感染Hep-2细胞的最适条件是用含1μg/mL放线菌酮的维持液,在35℃、5%CO2孵箱中培养7d,并在培养的第0、3、4、5天以2600r/min离心1h,感染成功率极高。染色反应显示,瑞氏-姬母萨染色可将Cpn包涵体染成蓝紫色或红紫色;吖啶橙染色则使Cpn感染的Hep-2细胞呈现鲜明的橘红色;免疫荧光抗体染色后,在Cpn感染细胞内可见亮苹果绿色包涵体。通过斑点抗原荧光抗体染色的方法抽样检测了100份病人血清中的Cpn抗体,其中抗Cpn-IgG抗体的阳性血清共61份,阳性率为61%。与Cpn-外周血单核细胞(Cpn-PBMC)抗原片比较,阳性检出率无明显差别。结论:用Cpn感染细胞制作的Cpn斑点抗原片可用于临床检测血清Cpn-IgG抗体,且具有特异性、敏感性高的特点,但要求检测人员有一定的经验。
- 陈学勤陈园园李雪萍王卫群余竹元钱利生
- 关键词：肺炎衣原体微量免疫荧光法
- 多主枝孢霉重组变应原Cla h8的制备及其免疫活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:通过基因工程手段,获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8,有利于进行变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础。方法:从多主枝孢霉菌体中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Cla h8编码基因,将其连入pET-19b载体。转入大肠杆菌BL21 Star(DE3)pLysS,经诱导表达后,进行提纯复性,用Western blot和Dot-blot检测其免疫活性。结果:重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可以与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合,与天然蛋白具有相似的免疫活性。结论:制备并获得了具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白,可用于多主枝孢霉变应原的标准化,克服天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。
- 杨柳付永锋李雪萍冯萌程训佳
- 关键词：蛋白表达
- 福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞的毒力被引量：9
- 2004年
- 目的 研究福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞后细菌致病能力的差异 ,探讨痢疾的防治。方法 选用 2 8株福氏志贺菌感染豚鼠眼角膜 ,观察角膜结膜病变反应 ,并进行细胞学、细菌学、病理组织切片检查。然后再选出12株福氏志贺菌强毒株和两株弱毒株 ,通过噬斑形成实验 ,观察对HeLa细胞的侵袭能力。结果 2 8株福氏志贺菌均在 3d之内引起豚鼠发病 ,但症状表现有差异 ,除 2株福氏志贺菌感染豚鼠后发病时间延长、症状轻微外 ,其余菌株则引起较为严重的角膜结膜炎 ,尤其在感染第 3天 ,出现最为典型的临床表现。噬斑形成试验结果与豚鼠感染试验基本相符。结论 检测福氏志贺菌的毒力可用HeLa细胞噬斑形成试验替代Sereny试验。利用Sereny试验和HeLa细胞噬斑形成试验鉴定出 2 6株福氏志贺菌的强毒株和 2株弱毒株 。
- 钱雪琴李雪萍王重振钱利生
- 关键词：HELA细胞毒力角膜结膜炎
- 冠状动脉瘤组织中肺炎衣原体特异性抗原的表达被引量：2
- 2007年
- 目的探讨肺炎衣原体特异性抗原(Cpn-Ag)表达与冠状动脉瘤之间的关系。方法采用自制肺炎衣原体单克隆抗体的直接微量免疫荧光法检测50例冠状动脉瘤标本和20例正常冠状动脉标本中Cpn-Ag的表达。结果冠状动脉瘤和正常冠状动脉标本中Cpn-Ag的阳性率分别是58.0%(29/50)和15.0%(3/20)。冠状动脉瘤标本中有大量Cpn-Ag沉积,分别位于外膜下及粥样硬化斑块内,而正常血管壁中仅有少量Cpn-Ag沉积,两者具有统计学差异(P<0.01)。结论Cpn-Ag在冠状动脉瘤外膜下有高表达率,Cpn可能是参与冠状动脉粥样硬化形成损害的原因之一。
- 王卫群钱利生史益军李雪萍白永怿余竹元
- 关键词：冠状动脉瘤
- 肺炎衣原体主要外膜蛋白重组抗原制备与应用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:为了研究肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,Cpn)抗原作为特异性诊断试剂,本文应用重组技术研制Cpn主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)重组抗原,用于血清IgG抗体的检测。方法:通过构建和表达CpnMOMP重组抗原,应用包涵体纯化法纯化重组抗原后建立ELISA试验,并检测了82份正常人血清及临床标本207份,其中心血管疾病血清118份,呼吸系统疾病血清59份,其他疾病30份。结果:应用克隆技术,获得纯化的Cpn MOMP重组抗原。用重组抗原检测血清IgG,正常人血清阳性检出率仅为3.7%;而207份病人血清,116份为阳性,总阳性率56.0%。其中心血管疾病血清118份,阳性69份,阳性率58.5%;呼吸系统疾病血清59份,阳性38份,阳性率64.4%;其他疾病患者30份,阳性9份,阳性率仅30.0%。结论:与进口ELISA试剂盒相比阳性率基本相符,统计分析无显著意义,但重组MOMP蛋白的抗原特异性较高,且具有抗原制备较为方便和价廉等特点。由于临床标本数量有限,尚需进一步探索MOMP重组抗原作为Cpn感染疾病的辅助诊断。
- 陈学勤陈圆圆李雪萍钱利生
- 关键词：肺炎衣原体ELISA
- 肺炎嗜衣原体菌体抗原的制备及应用
- 2009年
- 目的制备肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)菌体抗原,纯化后建立ELISA方法,用于血清Cpn抗体的检测。方法应用进口Cpn毒株感染Hep-2细胞,利用吖啶橙染色和直接免疫荧光染色判断Cpn感染细胞,制备Cpn抗原。用初步纯化的Cpn抗原建立ELISA方法检测人血清特异性抗体。结果吖啶橙染色和直接免疫荧光检测显示,Cpn成功感染Hep-2细胞。提取Cpn抗原,用ELISA检测84份病人血清特异抗体,阳性率为52.4%,ELISA试剂盒法的阳性率为51.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。用Cpn菌体抗原ELISA检测209份病人血清,阳性率59.3%(其中心血管疾病患者血清138份,阳性率58.0%;呼吸系统疾病患者血清71份,阳性率62.0%);检测84份健康者血清,阳性率2.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cpn菌体抗原ELISA检测血清抗Cpn抗体可用于判断Cpn感染;病人血清Cpn抗体阳性表明,某些心血管和呼吸系统疾病患者的致病原因可能与肺炎嗜衣原体感染有关。
- 李雪萍陈学勤钱利生
- 关键词：肺炎嗜衣原体吖啶橙染色
- 志贺菌GyrA基因突变与耐药相关性研究被引量：4
- 2004年
- 收集 1 1 4株志贺菌流行株 ,分别作血清分型和检查对喹诺酮类药物的敏感性 ;PCR扩增耐药相关的GyrA基因片段 ,作单链构象多态性 (single strandconformationpolymorphism ,SSCP)分析和序列测定 ;最终研究突变与喹诺酮类耐药的相关性。结果发现我国志贺菌流行株仍以福氏志贺菌为主 ,约占 98 2 % ;大多数福氏志贺菌株对环丙沙星、诺氟沙星高度敏感 ,敏感率分别为81 2 5 %和 74 1 % ;流行株GyrA基因耐药相关片段与野生菌株相比 ,部分菌株出现C( 2 4 8) T单位点突变或C( 2 4 8) T和A( 2 60 ) G双位点突变 ;卡方检验显示 ,C( 2 4 8) T单位点突变基础上增加A( 2 60 ) G点突变与环丙沙星、诺氟沙星耐药相关 ,故A( 2 60 ) G可作为耐药监测位点 ;另外 ,可用SSCP分析PCR扩增的GyrA基因耐药相关片断 。
- 王重振李雪萍钱雪琴钱利生
- 关键词：志贺菌喹诺酮类药SSCP耐药性
- 肺炎衣原体单克隆抗体的研制和应用被引量：3
- 2006年
- 目的:以杂交瘤技术制备抗肺炎衣原体(Cpn)单克隆抗体,用于衣原体感染的诊断及相关疾病的研究。方法:以进口Cpn抗原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞。收集接种过杂交瘤细胞的小鼠腹水,分别用ELISA法检测抗体效价、用免疫琼脂扩散试验鉴定单抗的类别、用微量荧光免疫试验(MIF)检测单抗的种属特异性。用克隆表达的主要外膜蛋白(MOMP)通过Dot-ELISA法分析单抗的特异性。通过建立直接免疫荧光法(DIF)检测病人和正常人外周血单核细胞(PBMC)标本,并进行统计处理。结果:小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞的融合率为61.46%(236/384),最终获得4株稳定分泌Cpn单抗的细胞株。用ELISA法检测小鼠腹水,效价高者可达1∶100000。免疫琼脂扩散试验鉴定为IgG类单抗,扩散效价达1∶128。自制单抗能与重组MOMP发生结合反应,表明其为抗CpnMOMP抗体。自制单抗与进口单抗类似,即与鹦鹉热衣原体(Cps)出现一定程度的交叉反应,而与沙眼衣原体(Ct)则无交叉反应。对240份PBMC标本用自制单抗和进口单抗同时检测Cpn抗原,2种单抗检测均阳性的共86份,经SPSS软件分析两者具有较好的一致性。DIF检测显示,心血管疾病和呼吸道疾病Cpn抗原阳性检出率分别为69.34%(95/137)和72.06%(49/68),与正常人标本Cpn抗原阳性率相比,均具有显著性差异。结论:获得IgG类抗CpnMOMP单抗,自制Cpn单抗的特异性和敏感性均与进口单抗具有较好的一致性。PBMCCpn抗原检测的统计分析证实,对于动脉粥样硬化等某些疾病的发生和发展,Cpn感染可能是重要的原因之一,但其中的因果关系还有待深入研究。
- 陈园园王卫群陈学勤李雪萍钱利生
- 关键词：免疫荧光试验外周血单核细胞
- 福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究被引量：6
- 2007年
- 目的研究在一种快速、特异的mPCR方法在检出福氏志贺菌的同时对其毒力进行监测。方法选取福氏志贺菌三种毒力基因ipaH,ial,set1B作为扩增目标,在同一mPCR体系中对86株福氏志贺菌临床分离株进行了检测,并选取12株进行了噬斑形成试验,观察了扩增产物不同的福氏志贺菌对Hela细胞的毒力作用。结果86株福氏志贺菌临床分离株均检测到ipaH基因,阳性率为100%;45株检测到ial基因,阳性率为52%;69株检测到set1B基因,阳性率为80%。噬斑形成试验证明,mPCR结果不同的菌株对Hela细胞的感染能力存在明显差异。结论应用上述mPCR体系在检出福氏志贺菌的同时能够对菌株的毒力进行初步判别,对于临床诊断及治疗具有重要意义。
- 张俊琪钱雪琴李雪萍钱利生
- 关键词：福氏志贺菌
