杜佳
- 作品数：13 被引量：33H指数：4
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- p38MAPK基因RNAi慢病毒载体的构建及在MC3T3-E1细胞的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。重组质粒与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,流式细胞仪检测病毒滴度,p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养MC3T3-E1细胞,荧光定量PCR检测MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达,进行p38MAPK干扰有效靶点的筛选。22.2 mol/L葡萄糖刺激培养MC3T3-E1细胞7 d,Westernblot检测MC3T3-E1细胞p38MAPK蛋白的表达,流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡。结果酶切和测序均证实各重组质粒核苷酸序列插入正确,所得质粒分别命名为p38MAPK-shRNA1、p38MAPK-shRNA2、p38MAPK-shRNA3,流式细胞仪测定病毒滴度分别为2.4×108、2.8×108、2.5×108TU/ml。p38MAPK-shRNA转染MC3T3-E1细胞效率达到74%以上,RT-PCR检测结果显示,各p38MAPK-shRNA转染组MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达较正常对照组分别下降了78.8%、84.3%和60.2%(P<0.01),其中以p38MAPK-shRNA2的干扰效率最高。Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组、空载体转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01)。p38MAPK-shRNA慢病毒转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达水平较高糖组明显下调(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加(P<0.01);p38MAPK-shRNA慢病毒转染组以及p38MAPK信号转导阻断剂组较高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论成功构建了靶向p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,其能有效抑制MC3T3-E1细胞p38MAPK基因表达,减少高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡。
- 冯正平邓华聪姜蓉杜佳陈丹燕梁小燕
- 关键词：P38MAPK成骨细胞RNA干扰慢病毒属
- 活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用
- 目的 观察活化蛋白1 (AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用.方法 将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、p38MAPK-s...
- 王小菊冯正平邓华聪姜蓉杜佳
- 咪喹莫特诱导多品系小鼠脱毛动物模型的建立被引量：6
- 2009年
- 目的:研究咪喹莫特外用建立多品系小鼠脱毛动物模型的可行性及其初步机理。方法:BARB/c、129、C3H/HeJ、C574种品系小鼠各30只,各品系鼠均随机分成两组,实验组4组*15只,背部外用咪喹莫特每周3次;对照组4组*15只,外用不含药物的空白基质,随访一定时间后观察脱毛结果,并用免疫组化法检测毛囊周围TLR7受体的分布。结果:四种品系小鼠在给药7～10d后均出现脱毛现象,形成斑片状脱毛区,成功率100%。TLR7受体在各品系小鼠的毛囊及其周围均有强阳性表达。结论:咪喹莫特外用能稳定地诱导BARB/c、129、C3H/HeJ、C57品系小鼠建立脱毛动物模型,是一种非疤痕性、非炎症性脱发,其机理可能与咪喹莫特诱导激活毛囊周围的TLR7受体有关。
- 杜佳赵恒光李惠
- 关键词：咪喹莫特TOLL样受体7脱毛
- 鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导凋亡的作用与机制
- 目的：研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制和凋亡诱导作用，探讨鱼藤素诱导细胞凋亡作用与线粒体凋亡途径的关系、以及鱼藤素对细胞线粒体通透性转换孔的作用。
方法：以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象...
- 杜佳
- 关键词：鱼藤素细胞凋亡线粒体膜电位乳腺癌通透性转换孔
- 文献传递
- 线粒体在细胞凋亡中的介导作用被引量：6
- 2009年
- 细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡 Programmed cell death, PCD）,是指机体在生理或病理条件下，启动自身内部机制，经过多途径的信号传递，结束其自身生命的过程。它是有一系列酶参与、由基因控制的一个主动的、高度有序的死亡过程。目前已知有3条细胞凋亡信号通路：线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路，其中线粒体凋亡通路是凋亡的主要途径。
- 杜佳邓华瑜
- 关键词：细胞凋亡线粒体介导作用细胞程序性死亡DEATHCELL
- 慢病毒介导p38MAPK基因沉默对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察p38丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用，并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响。方法构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，将体外培养的MC3T3-El成骨细胞分为正常对照组（A组）、高糖组（B组）、p38MAPK-hRNA慢病毒转染组（c组）、信号转导阻断剂组（D组）和尢关shRNA转染组（E组）。RT-PCR检测细胞p38MAPKmRNA的表达，流式细胞术检测细胞凋亡，Western印迹检测p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3、bax、bcl-2蛋白水平，透射电镜观察细胞超微结构。结果构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，并成功导入MC3T3-E1成骨细胞。与高糖组和无关转染组相比，p38MAPK-shRNA转染能显著抑制高糖诱导的MC3T3-El细胞p38MAPK过度活化，明显减少细胞的凋亡（P〈0．01）；同时，p38MAPK-shRNA转染及p38MAPK阻断剂明显降低MC3T3-E1细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3及促凋亡基因bax蛋白表达，上调捌亡抑制基因bcl-2，与高糖组和无关转染组相比，差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。结论慢病毒介导p38MAPK靶向RNAT扰可通过抑制p38MAPK信号通路的活化，降低p-p38MAPK、caspase-3、bax表达，上凋bcl-2表达，最终抑制高糖所诱导的MC3T3-E1成骨细胞的凋亡。
- 冯正平邓华聪姜蓉杜佳陈丹燕梁小燕
- 关键词：MC3T3-E1成骨细胞高糖细胞凋亡
- 儿童室间隔缺损介入封堵术后心律失常及其危险因素分析
- 目的： 探讨室间隔缺损（VSD）介入堵闭术后心律失常及其危险因素，评价VSD介入堵闭术的安全性和疗效。 方法： 回顾分析2014年1月～2016年12月在重庆医科大学附属儿童医院心血管内科行VSD介入堵闭术患者的临...
- 杜佳
- 关键词：室间隔缺损心律失常介入封堵术
- p38MAPK在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用
- 目的 观察高糖对MC3T3-E1成骨细胞凋亡及凋亡相关调控基因Capase3、bax、bcl-2表达的影响。方法 构建成功的p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养的MC3T3-E1成骨细胞,并分为：正常对照组,...
- 冯正平邓华聪姜蓉杜佳陈丹燕梁小燕
- 活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。
- 王小菊冯正平邓华聪姜蓉杜佳
- 关键词：活化蛋白1MC3T3-E1成骨细胞RNA干扰细胞凋亡
- ErbB2受体抑制剂AG825对ErbB2非过表达乳腺癌细胞增殖的作用及意义被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞中是否存在NRGs/ErbB2这种配体作用方式的信号通路活化,进而研究神经调节因子(Neuregulins’NRGs)对ErbB2受体信号转导活化和细胞增殖生长的作用。方法:以ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为研究对象,台盼蓝拒染法检测细胞生长曲线;免疫细胞化学法和Western blot法检测细胞中NRG的表达。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825处理两株细胞,MTT法检测比较两株细胞的增殖抑制作用,求出AG825作用MDA-MB-231细胞48h的IC50。40μmol/LAG825处理MDA-MB-231细胞48h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:与MCF-7细胞比较,MDA-MB-231细胞具有较强的增殖生长能力。NRG在MDA-MB-231细胞内呈显著表达,MCF-7细胞中无NRG的表达。Western blot实验检测MDA-MB-231细胞可见分子量44kD的NRG抗体阳性反应条带。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用明显,AG825作用MDA-MB-231细胞48h的IC50为56.59μmol/L。40μmol/LAG825处理MDA-MB-231细胞48h后,细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231可能通过NRGs自分泌或旁分泌作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,这与其高增殖、低凋亡恶性行为有关。
- 赵婷婷邓华瑜赵敬杜佳陈黎
- 关键词：神经调节因子增殖
