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RNA干扰抑制新城疫病毒复制的研究: 新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）属于副黏病毒科、副黏病毒亚科、禽腮腺炎病毒属,由其引发的新城疫（ND）是一种急性、高度接触性禽类传染病,被国际动物卫生组织列为A类动物传染病。ND的预防...; 秦红刚; 关键词：新城疫病毒 RNA干扰 SHRNA; 文献传递

SYBR Green Ⅰ荧光RT—PCR检测新城疫病毒的研究: 2008年; 司昌德秦红刚孟庆文闫丽辉刘加森韩凌霞姜骞曲连东; 关键词：新城疫病毒 PCR检测 SYBR 鸡传染性支气管炎鸡传染性喉气管炎

多靶点串联miRNA表达载体的构建及其抑制禽流感病毒复制: 高致病性禽流感是我国严重危害养禽业发展的Ⅰ类烈性传染病,也已成为我国以至世界范围公共卫生事业的重要课题;由于其病毒高突变性和高度的宿主适应性,给利用药物和疫苗防控禽流感的策略带来巨大挑战.RNAi可以作为一种有效的工具用...; 孟庆文刘丹李文超秦红刚曲连东; 关键词：高致病性禽流感抗病毒治疗; 文献传递

鸡Mx基因的表达及其抗血清的制备被引量：5: 2009年; Mx蛋白已被证明具有抗A型流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的生物活性。本研究通过PCR扩增,将Mx基因克隆至pMD18-T载体;经测序验证后将Mx基因克隆到原核表达载体pProExHTa和pcDNA3.1中。以构建的重组质粒pProExHTa-Mx转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达,以切胶纯化方式回收了Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清;SDS-PAGE和western blot分析表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 ku,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应。以真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性。抗血清的制备为鸡Mx蛋白的功能研究、Mx蛋白在转基因动物机体中表达的检测奠定了基础。; 谭复善李文超崔雷刘丹秦红刚孟庆文; 关键词：MX基因原核表达抗血清

慢病毒介导的转基因鸡研究进展: 近几年来,重组慢病毒介导的转基因鸡方法成功的报道,是转基因禽类方法学研究所取得的最显著的进展.本文就慢病毒载体介导的转基因鸡的研究进行论述.; 孟庆文秦红刚曲连东; 关键词：转基因慢病毒介导; 文献传递

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制被引量：3: 2008年; 根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒(AIV)PB2基因的siRNA(PB2374,PB2665,PB2936,PB21031和PB21233),将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A/Goose/Guang dong1/96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验(HA)和Real-time PCR检测siRNA抑制AIV增殖的效果。血凝试验结果表明:所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68%～71%,PB2963抑制AIV增殖效率为78%～81%;Real-time PCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3.3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3.9～4.2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。; 刘丹亓文宝孟庆文秦红刚李文超司昌德刘家森曲连东; 关键词：AIM SIRNA

靶向新城疫病毒L基因(功能区)的siRNA抑制新城疫病毒的复制被引量：4: 2008年; 本研究以新城疫病毒(NDV)L蛋白的功能区(P1595、P2103和P3277酶活性中心结构区)序列为RNAi的靶位点,设计、构建了3个特异性的siRNA的真核表达质粒pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9,转染到CEF细胞后接种NDV,间接免疫荧光实验结果显示:pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9均能抑制NDV抗原蛋白的表达;Real-timePCR检测到转染pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9的CEF细胞中L基因的转录水平分别降低79.1%、93.9%和91.3%,P基因的转录水平分别降低73%、86.3%和89.8%;病毒滴度测定表明转染pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9质粒的细胞培养上清中病毒的滴度分别低2.19、3.16和5.24倍。本研究中3个特异性的siRNA均能抑制NDV的复制、增殖,表明P1595、P2103和P3277这3个区域对于L蛋白发挥RNA依赖的RNA聚合酶的功能具有重要作用。; 秦红刚孟庆文刘丹李文超韩凌霞姜骞刘家森曲连东; 关键词：NDV RNAI

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秦红刚