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乙型肝炎病毒不同基因型DNA聚合酶对病毒复制水平的影响被引量：1: 2014年; 目的:研究不同基因型聚合酶(polymerase,pol)复制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA的能力是否存在差异。方法:采用不依赖酶切和连接的克隆(restriction digestion and ligation-independent cloning,RLIC)方法和HBV聚合酶反式互补技术表达并检测A、B、C、D 4种基因型聚合酶复制HBV DNA的情况。结果:(1)反式互补技术可使A、B、C、D型HBV重新获得表达,HBV DNA量分别为A=(63.03±8.03)×105 copies/μl,B=(23.23±3.53)×105 copies/μl,C=(17.63±1.25)×105 copies/μl,D=(75.73±9.43)×105 copies/μl。(2)HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异,F(4,10)=91.88,P=0.000。(3)A型和D型聚合酶复制HBV能力强于B型和C型聚合酶,差异有统计学意义,P(A,B)=0.001,P(A,C)=0.001,P(B,D)=0.001,P(C,D)=0.001。结论:HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异;为深入研究不同基因型在地理分布、所致疾病严重性等方面提供了有用信息并奠定了坚实的基础。; 罗英英胡接力陈江燕黄荣黄爱龙; 关键词：基因型聚合酶乙型肝炎病毒DNA

重组HBc融合蛋白: 本发明公开了一种重组HBc融合蛋白，融合蛋白从N端到C端依次含有蛋白(X)、接头肽(L)和人乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)，接头肽(L)的氨基酸序列为：Gly‑Ser‑(Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑Ser)n‑Gly...; 胡接力黄爱龙陈江燕; 文献传递

重组人乙型肝炎病毒核心蛋白融合蛋白: 本发明公开了一种重组人乙型肝炎病毒核心蛋白融合蛋白，所述融合蛋白从N端到C端依次含有蛋白(X)、接头肽(L)和乙肝病毒核心蛋白(HBc)，所述接头肽(L)的氨基酸序列为：Gly-Ser-(Gly-Gly-Gly-Gly-...; 胡接力黄爱龙陈江燕; 文献传递

重组HBc融合蛋白: 本发明公开了一种重组HBc融合蛋白，融合蛋白从N端到C端依次含有蛋白(X)、接头肽(L)和人乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)，接头肽(L)的氨基酸序列为：Gly-Ser-(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n-Gly...; 胡接力黄爱龙陈江燕; 文献传递

乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响: 2013年; 通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽,研究各种改造对HBc功能的影响。采用RLIC方法,构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体,并构建与HBc功能互补的质粒HBV1.1c-,将不同重组体与HBV1.1c-共转染HEK293细胞,通过观察荧光及Southern blotting检测病毒复制中间体,判断相应基因工程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响。RLIC方法可有效地用来进行片段缺失,且缺失片段大小及位置无明显限制。带柔性或刚性接头的重组HBc-EGFP均可产生绿色荧光,但荧光在细胞内分布形态不同,两种重组HBc-EGFP均不能支持正常的HBV复制,各种截短的插入片段以及aa79-80单独缺失体亦不能支持HBV复制。结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具,不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响,aa79-80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用。; 陈江燕黄荣陶颖黄媛罗英英黄爱龙胡接力; 关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白绿色荧光蛋白基因工程

乙肝病毒核心蛋白基因工程改造及其生物学功能鉴定: 目的:探讨基于乙肝病毒核心蛋白(HBc)的改造位点及形式，使形成携带细胞穿膜肽或配体的核心颗粒，以作为HBV感染模型改造的基础。　　方法:　　1.用不依赖酶切连接的分子克隆方法(RLIC)构建HBc、HBV1.1c-及各...; 陈江燕; 关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白基因工程生物学功能

体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立被引量：2: 2013年; 目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoRⅠ酶切,然后用Southern blot检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响。结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多。结论:成功建立了体外培养细胞内HBV cccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA。; 黄荣陈江燕胡接力罗英英黄爱龙; 关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA SOUTHERN BLOT

重组人乙型肝炎病毒核心蛋白融合蛋白: 本发明公开了一种重组人乙型肝炎病毒核心蛋白融合蛋白，所述融合蛋白从N端到C端依次含有蛋白(X)、接头肽(L)和乙肝病毒核心蛋白(HBc)，所述接头肽(L)的氨基酸序列为：Gly‑Ser‑(Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑...; 胡接力黄爱龙陈江燕; 文献传递

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陈江燕