吴伸
- 作品数：27 被引量：109H指数：5
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国科学院科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 天花粉蛋白1.73分辨率结构测定及其精化被引量：8
- 1993年
- 本文报道了用面探测器收集一套1.73分辨率天花粉蛋白(TCS)正交晶体的X射线衍射数据,利用已知的α苦瓜子蛋白模型,取10—4范围的TCS强度数据,应用分子置换法测定了晶体结构,并且采用限制参数最小二乘法在10—1.73分辨率范围内修正模型结构。修正结果,晶体学R因子为0.186,键长标准偏差为0.013,键角标准偏差为2.48°,一个不对称单位中找到133个水分子。本文详细描述了天花粉蛋白分子的结构、温度因子、氢键、结合水、保守残基的分布以及分子间相互作用。保守残基14Tyr的羟基与157位的羰基氧形成的氢键,对维持活性部位构象有重要作用;保守残基160Glu和它在活性部位的构象对酶的催化活性起着关键性作用。
- 高奔马星奇王耀萍吴伸陈世芝董贻诚
- 关键词：晶体结构分辨率天花粉蛋白
- 我国第2次空间蛋白质晶体生长实验被引量：6
- 1996年
- 1994年7月,在我国返回式卫星FSW-2上进行了第2次空间蛋白质结晶实验.该次实验中的晶体生长状况明显优于首次空间实验结果,参加实验的10种蛋白质中有9种蛋白质在空间长出了晶体,48个样品的单晶产生率达70％以上.其中3种蛋白质在空间长出较大单晶体,能用于X射线衍射实验和收集强度数据.这3种蛋白质中,除了在首次空间实验中长出较大晶体的溶菌酶,还有由于结晶条件优化而结晶效果明显改进的酸性磷脂酶A_2和斑头雁氧合血红蛋白.微重力条件对蛋白质晶体生长的良好效应在本次实验中得到进一步证实.
- 王耀萍潘冀燊牛秀田周元聪华子千徐谦吴伸韩青李宏民刘延顺滕脉坤何海辉林胜祥毕汝昌
- 关键词：蛋白晶体生长
- 丝瓜核糖体失活蛋白的分离与纯化被引量：3
- 1995年
- 采用一种改进的方法，简便快速地从丝瓜（Ｌｕｆｆａｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ）籽中得到丝瓜蛋白α和β．它们在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均呈一区带，其分子量分别为２８０００和２９０００．等电聚焦测定等电点均为１０．它们对无细胞体系蛋白质合成都有强烈的抑制活性，其ＩＤ＿（５０）分别为１０μｇ／Ｌ和５０μｇ／Ｌ，是目前发现的单链核糖体失活蛋白中活性最高的．
- 吴伸朱曰荣郭峰刘朵花
- 关键词：丝瓜核糖体失活蛋白提纯
- Y14F天花粉蛋白的晶体结构研究被引量：1
- 1997年
- 核糖体失活蛋白（Ribosome inactivating protein,RIP）是广泛存在于植物界的蛋白毒素,天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）又是该家族中的一个重要成员。TCS及其同源蛋白的高分辨率晶体结构为进行结构与功能关系的研究打下了良好的基础,通过对同源蛋白的结构比较发现在结构中存在着很保守的氢键。为了探讨这些保守氢键对结构与功能的影响,我们用基因定位突变的方法,对形成保守氢键的残基进行突变,测定这些突变体的活性与晶体结构,可以加深我们对这些保守氢键所起作用的认识。TCS中Tyr14的羟基与Ser157的主链氧之间形成保守氢键,这一氢键在螺旋α5的弯折处,而且Ser157的主链碳基氧明显偏离了正常螺旋中的与螺旋轴平行的方向,这一现象在已知的RIPs结构中都存在。为了考察这一保守氢键对螺旋α5弯折的形成所起的作用,我们将Tyr14突变为Phe,这样突变后将保留芳香环侧链的特性,突变后的构象变化主要来自这一保守氢键的消失。
- 吴伸阎军姚宏兵董贻诚邵鹏柱
- 关键词：天花粉蛋白突变体晶体结构核糖体失活蛋白
- 天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究被引量：2
- 1998年
- 利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术，对天然天花粉蛋白（ｎＴＣＳ）基因在Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２两个保守残基处同时进行定点突变，即Ｔｙｒ１４变成Ｐｈｅ，Ａｒｇ２２变成Ｌｅｕ，然后克隆到ｐＥＴ－８ｃ高效表达载体上，构建成重组质粒ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ．经序列分析，定点突变的结果与预先设计的完全一致，突变后的天花粉蛋白命名为Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ．将ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ转化到Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＬｙｓＳ）中，进行表达．经ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，纯度可达９０％．ＲＩＰ活性测定显示，Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ的活性比ｎＴＣＳ降低了７．５倍，活性变化不显著，因此，ＴＣＳ的Ｔｒｙ１４和Ａｒｇ２２对维持其活性部位构象并不是必需的．但由于Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达量与ｎＴＣＳ相比明显下降，因此，Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２可能与ＴＣＳ翻译后的折叠有关．
- 姚宏兵吴伸董贻诚邵鹏柱
- 关键词：天花粉蛋白定点突变PCR
- 杂氮硅三环化合物(Ⅰ)和(Ⅱ)晶体结构的研究被引量：1
- 1987年
- 杂氮硅三环化合物Ⅰ(■-COOCH_(2)Si(OCH_(2)CH_(2))_(3)N)和Ⅱ(■OCH_(3),COOSi(OCH_(2)CH_(2))_(3)N)的分子结构用直接法解,经全矩阵最小二乘修正,得到它们的晶体学参数。并对它们的结构进行了比较和讨论。
- 林秀云郑启泰吴伸张树德沈福岭王积涛谢庆兰廖仁安李靖
- 关键词：晶体结构分子结构最小二乘COO
- 1.73分辨率天花粉蛋白晶体中的水结构被引量：1
- 1994年
- 本文报道的天花粉蛋白晶体中水的结构模型,包括了133个水分子,其中118个同蛋白的原子成氢键。天花粉蛋白内部有4个分立的水分子,其中2个水分子W251和W252分剔与A5螺旋变形部位的残基156Gln和157Ser的侧链成氢键,对维持活性部位的构象有贡献。晶体中水结构的比较结果表明,核糖体接近蛋白时,会诱导蛋白活性部位残基的构象发生变化,使各催化基团按催化效果最佳的构象排布,并激活一个水分子(W257)直接参与核糖体失活作用。
- 高奔马星奇王耀萍吴伸陈世芝董贻诚
- 关键词：天花粉核糖蛋白晶体
- 天花粉蛋白与单核苷酸作用机制的研究
- 1997年
- 天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是一个Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein,RIP)。亦是一个能使28SrRNA的4324位腺苷酸水解掉腺嘌呤碱基的N-糖苷酶。晶体结构测定和突变体活性测试,确定了两结构域之间分子表面凹陷区就是它的N-糖苷酶活性口袋,并为结构与功能研究提供了扎实的基础。为探索RIPs的N-糖苷酶作用机制,杨洁等人做了TCS-FMP,TCS-Ade(AMP的产物,腺嘌呤)复合物的晶体结构;Xiong等人做了TCS-NADPH复合物的晶体结构;Ren等人做了αMMC-FMP,αMMC-Ade复合物的晶体结构;
- 吴伸芦晓晖余曰荣杨洁董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白核苷酸晶体结构
- 栝楼籽核糖体失活蛋白的纯化及性质研究被引量：1
- 1999年
- 用改进的方法从栝楼籽制得一种单链核糖体失活蛋白（ＴＣＫ），研究其性质，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ显示为单一条带，分子量为２９ｋＤ，ｐＩ≥９．３，含糖量约为１．７５％。在兔网织红细胞裂解液系统中对蛋白质合成有较强的抑制活性，ＩＣ５０为６．７×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ。
- 陈毓荃吕志强吴伸
- 关键词：栝楼核糖体失活蛋白
- Y14F/R22L天花粉蛋白的晶体结构研究被引量：1
- 1998年
- Y14F/R2 2LTCS的晶体结构是用同晶差值Fourier法解得 .经X_PLOR程序修正得到Y14F/R2 2LTCS的分子结构 ,并找到了 6 5个水分子 .对 0 2 3nm分辨率衍射数据的晶体学R因子为 0 185,键长和键角的rms偏差分别为 0 0 0 12nm和 2 6 52° .在Y14F/R2 2LTCS中 ,Tyr14变成Phe ,Phe周围变化很小 ,α5的弯折依然存在 ;Arg2 2变成Leu ,余下的空间被水分子 2 56所占据 ,水分子 2 56与Ala16 1,Ala16 2的主链氧成氢键 ,部分代替Arg的作用 .并讨论了二级结构间保守氢键的作用 .
- 吴伸闫军姚宏兵李建辉邵鹏柱董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白突变体晶体结构
