李建辉
- 作品数:9 被引量:5H指数:1
- 供职机构:中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- Y14F/R22L天花粉蛋白的晶体结构研究被引量:1
- 1998年
- Y14F/R2 2LTCS的晶体结构是用同晶差值Fourier法解得 .经X_PLOR程序修正得到Y14F/R2 2LTCS的分子结构 ,并找到了 6 5个水分子 .对 0 2 3nm分辨率衍射数据的晶体学R因子为 0 185,键长和键角的rms偏差分别为 0 0 0 12nm和 2 6 52° .在Y14F/R2 2LTCS中 ,Tyr14变成Phe ,Phe周围变化很小 ,α5的弯折依然存在 ;Arg2 2变成Leu ,余下的空间被水分子 2 56所占据 ,水分子 2 56与Ala16 1,Ala16 2的主链氧成氢键 ,部分代替Arg的作用 .并讨论了二级结构间保守氢键的作用 .
- 吴伸闫军姚宏兵李建辉邵鹏柱董贻诚
- 关键词:天花粉蛋白突变体晶体结构
- 巴马汀结合MYC G-四链体干预结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及分子机制
- 2021年
- 目的:探究巴马汀是否通过结合MYC原癌基因启动子区G-四链体干预结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡及其可能的分子机制。方法:采用荧光光谱分析巴马汀与MYC基因G-四链体的结合能力,采用圆二色谱分析巴马汀对MYC基因G-四链体构型的影响,采用分子对接预测二者的结合模式,采用荧光显微镜分析巴马汀分子在HCT116细胞中的定位,采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析巴马汀对MYC基因转录的影响,采用蛋白免疫印迹法检测巴马汀对MYC蛋白表达的影响,进一步采用噻唑蓝比色法分析巴马汀对HCT116细胞活力的影响,采用流式细胞术分析巴马汀对HCT116细胞凋亡的影响。结果:荧光光谱及分子对接研究表明巴马汀可能以堆积方式与MYC基因G-四链体结合,圆二色谱分析表明马汀能够维持MYC基因G-四链体的平行构型,荧光成像分析表明巴马汀分布于细胞核中且能够与G-四链体结合。此外,巴马汀抑制了MYC基因转录及MYC蛋白表达,抑制了HCT116细胞的增殖并促进了细胞凋亡。结论:巴马汀能够结合MYC基因G-四链体并抑制其基因转录,进而抑制MYC蛋白表达,这可能是巴马汀抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡的分子机制之一。
- 温丽娜李建辉石汉平
- 关键词:MYC基因结肠癌增殖
- Q156A天花粉蛋白的晶体结构研究被引量:1
- 1997年
- 核糖体失活蛋白(RIPs)是一类具有RNA N-糖苷酶活性的毒蛋白,它水解真核细胞28SrRNA第4324位腺苷酸的N-糖苷键,释放出一个腺嘌吟碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白(TCS)是单链核糖体失活蛋白的重要代表。我们早已报道了天花粉蛋白0.173nm分辨率的晶体结构。关于天花粉蛋白结构与功能关系的深入研究,已经发表了天花粉蛋白与底物类似物的复合物晶体结构。我们还对一些保守残基的突变体进行了研究,其中R22LTCS和Y14F TCS的晶体结构已经测定,Arg22和Tyr14是位于活性口袋外,但与活性口袋又有密切联系的保守残基,其侧链形成的氢键也十分保守。在TCS晶体结构中还有一类保守残基形成的氢(盐)键也是十分保守的,它们是处于活性口袋之内的残基形成的,如Q156的NH_2与E189的OE2,Y111的OH与E160的OE2,R122的NH_2与E189的OE1等。为了探讨活性口袋内这些保守氢键对活性部位构象和活性的影响,我们用基因定位突变方法。
- 董贻诚朱日荣陈世芝李建辉邵鹏柱
- 关键词:突变体晶体结构天花粉蛋白核糖体失活蛋白
- E160A天花粉蛋白晶体结构研究
- 李建辉吴伸
- 关键词:天花粉蛋白晶体结构
- 天花粉蛋白Glu160在N-糖苷酶活性中的作用
- 1999年
- 用浸泡法得到了(E160A)天花粉蛋白(trichosanthin, TCS),(E160D)TCS与Ade 和(E160A)TCS与FMP复合物的晶体.在Mar Research 面探测器系统上分别收集了0.20 nm ,0.19nm 和0.205 nm 分辨率的X 射线衍射数据,数据处理用Mar Scale 程序系统完成.用同晶差值Fourier法解析了(E160A)TCS-Ade,(E160D)TCS-Ade 和(E160A)TCS-FMP的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序,修正结果,晶体学R因子分别为0.166,0.176,0.179.键长和键角的RMS偏差分别为0.0010 nm 和2.503°,0.0013 nm 和2.665°,0.0012 nm 和2.676°.在这三个结构中均未见到Glu189侧链方向的改变.Ade 或FMP仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行.这一结果表明:TCS中的Glu160分别突变成Ala 和Asp,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应,但是活性降低了一些.可见Glu160对TCS与AMP的作用是重要的,但不是必要的.
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词:天花粉蛋白N-糖苷酶晶体结构AMP
- (E160A)和(E160D)天花粉蛋白两种突变体晶体结构研究被引量:3
- 1998年
- 培养了(E160A)TCS和(E160D)TCS的单晶。在MARResearch面探测器系统上分别收集了0.193nm和0.20nm分辨率的X射线衍射数据。数据处理用MARSCALE程序系统完成。用同晶差值Fourier法解析了突变体的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序。修正结果,晶体学R因子分别为0.175,0.179,键长和键角的RMS偏差分别为0.0011nm和2.457°,0.0013nm和2.675°。在这两个突变体的结构中均未见到Glu189侧链方向的改变。通过对(E160A)TCS和(E160D)TCS的结构比较,说明(E160D)TCS活性低于(E160A)TCS的原因:这可能是由于在(E160D)TCS中Tyr111和Tyr70的侧链都具有较大的运动性,使它们与腺嘌呤碱基的芳香堆垛作用减弱。
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词:天花粉蛋白突变体晶体结构
- neo Trichosanthin及其突变体Y70A neo Trichosanthin的晶体结构研究
- 1999年
- 天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)的一个亚型,neoTrichosanthin(n-TCS),及其突变体Y70An-TCS被克隆和表达为重组蛋白。用悬滴汽相扩散法得到n-TCS和Y70An-TCS的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了0.20nm和0.205nm分辨率的X射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了结构。最后晶体学R因子分别为0.183和0.184。键长的r.m.s.偏差分别为0.0016nm和0.0014nm,键角的r.m.s.偏差分别为2.930°和2.732°。n-TCS虽然与TCS有11个氨基酸的差别,但它们都不是活性口袋区的关键残基。并且这些氨基酸的替换绝大多数属于保守替换。和TCS相比,这11个残基及其附近残基的主链间形成的保守氢键在n-TCS中没被破坏,它们所处的二级结构也保持不变。所以n-TCS的整体结构与TCS十分相近。Y70An-TCS的晶体在收集数据前曾用含5'AMP的缓冲液浸泡过,活性口袋区没发现可与Adenine相匹配的密度。用HPLC检测Y70An-TCS与5'AMP作用后产物,层析图谱上相应位置也没有出现Adenine。上述结果表明,7?
- 颜丽吴伸李会广李建辉黄岳顺施庆利董贻诚
- 关键词:天花粉蛋白失活蛋白晶体结构
- 天花粉蛋白Glu189在N-糖苷酶活性中的作用
- 1999年
- 培养了(E160A,E189A)TCS(天花粉蛋白)的单晶。用浸泡法得到了(E160A,E189A)TCS与Ade复合物的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了均为0.20nm分辨率的X射线衍射数据,数据处理用MarScale程序系统完成。用同晶差值Fourier法解析了(E160A,E189A)TCS和(E160A,E189A)TCS-Ade的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序.修正结果,晶体学R因子分别为0.180、0.184,键长和键角的RMS偏差分别为0.0012nm和2.566°、0.0012nm和2.622°。在(E160A,E189A)TCS-Ade中,Ade仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行。这一结果表明:TCS中的Glu160和Glu189同时突变成Ala,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应.前文已经证明在(E160A)TCS中Glu189没有援救作用。目前,没有发现Glu189对TCS与AMP的直接作用,但Glu189与其它残基的协同作用及其在TCS与rRNA作用中扮演什么角色,尚待进一步研究。
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词:天花粉蛋白突变体N-糖苷酶晶体结构
- 亚天花粉蛋白突变体(R163H n-TCS和R163Q n-TCS)的晶体结构研究
- 1999年
- 用悬滴汽相扩散法得到了R163Hn-TCS和R613Qn-TCS的晶体,在Mar-Research面探测器系统上分别收集了0.200和0.205nm分辨率的X-射线衍射数据。采用同晶差值傅立叶法解析结构,用X-PLOR软件包进行修正,最后的晶体学R因子分别为0.184和0.185,键长偏差分别为0.0013nm和0.0014nm,键角偏差分别为2.590°和2.815°。结构测定显示R163Hn-TCS和R163Qn-TCS与n-TCS的主链结构无较大变化,活性口袋区的结构和氢键体系发生了明显变化。生化分析表明R163Hn-TCS具有糖苷酶活性,R163Qn-TCS没有糖苷酶活性。这说明,第163位侧链的H+对n-TCS发挥N-糖苷酶活性至关重要。
- 李会广吴伸颜丽李建辉李建辉施庆利黄岳顺
- 关键词:突变体晶体结构