董贻诚
- 作品数：10 被引量：20H指数：2
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Q156A天花粉蛋白的晶体结构研究被引量：1
- 1997年
- 核糖体失活蛋白（RIPs）是一类具有RNA N-糖苷酶活性的毒蛋白,它水解真核细胞28SrRNA第4324位腺苷酸的N-糖苷键,释放出一个腺嘌吟碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白（TCS）是单链核糖体失活蛋白的重要代表。我们早已报道了天花粉蛋白0.173nm分辨率的晶体结构。关于天花粉蛋白结构与功能关系的深入研究,已经发表了天花粉蛋白与底物类似物的复合物晶体结构。我们还对一些保守残基的突变体进行了研究,其中R22LTCS和Y14F TCS的晶体结构已经测定,Arg22和Tyr14是位于活性口袋外,但与活性口袋又有密切联系的保守残基,其侧链形成的氢键也十分保守。在TCS晶体结构中还有一类保守残基形成的氢（盐）键也是十分保守的,它们是处于活性口袋之内的残基形成的,如Q156的NH_2与E189的OE2,Y111的OH与E160的OE2,R122的NH_2与E189的OE1等。为了探讨活性口袋内这些保守氢键对活性部位构象和活性的影响,我们用基因定位突变方法。
- 董贻诚朱日荣陈世芝李建辉邵鹏柱
- 关键词：突变体晶体结构天花粉蛋白核糖体失活蛋白
- 通力合作攻难关——青蒿素立体结构解析回眸有感被引量：1
- 2015年
- 2015年诺贝尔生理学或医学奖授予了爱尔兰科学家威廉·坎贝尔（William C.Campbell）、日本学者大村智（Satoshi Omura）以及中国药学家屠呦呦,以表彰他们在寄生虫疾病治疗研究方面所取得的成就,其中,屠呦呦在青蒿素的发现和治疗疟疾方面做出了杰出的贡献,使她成为历史上第46位获得诺贝尔奖的女性.
- 董贻诚赫荣乔
- 关键词：青蒿素寄生虫疾病药学家CAMPBELL倍半萜内酯绝对构型
- 天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究被引量：2
- 1998年
- 利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术，对天然天花粉蛋白（ｎＴＣＳ）基因在Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２两个保守残基处同时进行定点突变，即Ｔｙｒ１４变成Ｐｈｅ，Ａｒｇ２２变成Ｌｅｕ，然后克隆到ｐＥＴ－８ｃ高效表达载体上，构建成重组质粒ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ．经序列分析，定点突变的结果与预先设计的完全一致，突变后的天花粉蛋白命名为Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ．将ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ转化到Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＬｙｓＳ）中，进行表达．经ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，纯度可达９０％．ＲＩＰ活性测定显示，Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ的活性比ｎＴＣＳ降低了７．５倍，活性变化不显著，因此，ＴＣＳ的Ｔｒｙ１４和Ａｒｇ２２对维持其活性部位构象并不是必需的．但由于Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达量与ｎＴＣＳ相比明显下降，因此，Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２可能与ＴＣＳ翻译后的折叠有关．
- 姚宏兵吴伸董贻诚邵鹏柱
- 关键词：天花粉蛋白定点突变PCR
- α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析被引量：1
- 1994年
- α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白，具有Ｎ－糖苷酶活性，２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键，其中主链原子间氢键１６５个，主链原子与侧链原子间氢键５４个，侧链原子间氢键２１个，蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个，主链Ｃ＝Ｏ，主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键，Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力，并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大，Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上，Ａｒｇ容易形成远程的氢键，而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键，特别是保守残基间的氢键，对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响，α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。
- 王耀萍陈世芝董贻诚任景山
- 关键词：氢键
- 天花粉蛋白与底物类似物GAGA相互作用的计算机图象模拟被引量：2
- 1994年
- 以天花粉蛋白（ＴＣＳ）晶体结构模型作为ＲＩＰｓ的代表，ＲＮＡ四核苷酸ＧＡＧＡ作为底物类似物，用计算机图象模拟建立了ＴＣＳ和ＧＡＧＡ相互作用的模型。利用这一模型解释了ＲＩＰｓ的Ｎ－糖苷酶活性的作用机制。这一模型对专一性识别也能解释，且与一些生化实验结果相符；对某些实变体的活性改变也能有相应的解释．
- 董贻诚黄岳顺梁曦云邵鹏柱杨显荣
- 关键词：天花粉蛋白核糖体失活蛋白计算机模拟
- α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究Ⅱ疏水相互作用的分析
- 1996年
- α－苦瓜子蛋白结构模型中共有疏水残基１４１个，占践基总数的５７％。其中１２８个疏水残基有相互作用，占疏水残基的９１％。疏水残基之间的相互作用与其是否在α－螺旋或β片层内没有多大关系。本文着重分析了α－螺旋间和α螺旋与β结构之间的疏水相互作用；讨论了α５和大β片层中疏水残基与亲本残基的分布特点，这一特点对该蛋白分子最后折叠成特定的空间结构有重要影响。类似的情况在同源蛋白天花粉蛋白中也是存在的。
- 董贻诚陈世芝朱曰荣王耀萍
- 关键词：疏水相互作用晶体结构
- 栝楼籽核糖体失活蛋白的纯化、性质及晶体生长研究被引量：9
- 1998年
- 栝楼（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｋｉｒｉｌｏｗｉ）籽经粉碎抽提、硫酸铵沉淀、阳离子交换及凝胶过滤柱层析等步骤，得到一种单链核糖体失活蛋白－Ｔｒｉｃｈｏｋｉｒｉｎ（ＴＣＫ）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ显示为单一条带，其分子量为２９ｋＤ，ｐＩ≥９．３，含糖量约为１．７５％．该蛋白对兔网织红细胞裂解液系统的蛋白质合成具较强的抑制活性，ＩＣ５０为６．７×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ．改进了纯化方法，提高了产率，并培养出晶体．
- 吴伸陈毓荃吕志强闫军董贻诚
- 关键词：蛋白质核糖体失活蛋白纯化晶体生长
- 凝乳酶β-转角突变体的构建、表达和性质分析被引量：4
- 1998年
- 为了阐明牛凝乳酶的第二个发夹结构中的Ⅵ型β转角的功能，利用基因突变技术，将该转角的氨基酸残基（Ｌｅｕ２０Ｇｌｙ２１Ｔｈｅ２２Ｐｒｏ２３Ｐｒｏ２４Ｇｌｎ２５）改为（Ｌｅｕ２０ＧｌｙＧｌｙＧｌｎ２５）、（Ｌｅｕ２０ＳｅｒＧｌｙＧｌｎ２５）或（Ｌｅｕ２０ＧｌｙＳｅｒＧｌｎ２５），得到３个突变牛凝乳酶原表达质粒ｐＭＣＧＧ，ｐＭＣＳＧ和ｐＭＣＧＳ。除ｐＭＣＧＳ不能在大肠杆菌中表达外，ｐＭＣＧＧ和ｐＭＣＳＧ均能以包含体的形式进行表达，且表达水平与野生型相当。像野生型凝乳酶原一样，ｐＭＣＧＧ和ｐＭＣＳＧ的表达产物经过变性复性，均能自活化为假凝乳酶，而且复性后的酶原突变体在ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ６Ｂ上的柱行为与野生型相类似，但突变体假凝乳酶的凝乳及水解酪蛋白活性均明显低于野生型。说明突变对酶原的折叠影响较小，但对酶的催化效率影响较大。
- 黎红晔张渝英董贻诚杨开宇
- 关键词：凝乳酶突变体
- neo Trichosanthin及其突变体Y70A neo Trichosanthin的晶体结构研究
- 1999年
- 天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，ＴＣＳ）的一个亚型，ｎｅｏＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ（ｎ－ＴＣＳ），及其突变体Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ被克隆和表达为重组蛋白。用悬滴汽相扩散法得到ｎ－ＴＣＳ和Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ的晶体。在ＭａｒＲｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．２０ｎｍ和０．２０５ｎｍ分辨率的Ｘ射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了结构。最后晶体学Ｒ因子分别为０．１８３和０．１８４。键长的ｒ．ｍ．ｓ．偏差分别为０．００１６ｎｍ和０．００１４ｎｍ，键角的ｒ．ｍ．ｓ．偏差分别为２．９３０°和２．７３２°。ｎ－ＴＣＳ虽然与ＴＣＳ有１１个氨基酸的差别，但它们都不是活性口袋区的关键残基。并且这些氨基酸的替换绝大多数属于保守替换。和ＴＣＳ相比，这１１个残基及其附近残基的主链间形成的保守氢键在ｎ－ＴＣＳ中没被破坏，它们所处的二级结构也保持不变。所以ｎ－ＴＣＳ的整体结构与ＴＣＳ十分相近。Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ的晶体在收集数据前曾用含５＇ＡＭＰ的缓冲液浸泡过，活性口袋区没发现可与Ａｄｅｎｉｎｅ相匹配的密度。用ＨＰＬＣ检测Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ与５＇ＡＭＰ作用后产物，层析图谱上相应位置也没有出现Ａｄｅｎｉｎｅ。上述结果表明，７?
- 颜丽吴伸李会广李建辉黄岳顺施庆利董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白失活蛋白晶体结构
- 亚天花粉蛋白突变体(R163H n-TCS和R163Q n-TCS)的晶体结构研究
- 1999年
- 用悬滴汽相扩散法得到了Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ和Ｒ６１３Ｑｎ－ＴＣＳ的晶体，在Ｍａｒ－Ｒｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．２００和０．２０５ｎｍ分辨率的Ｘ－射线衍射数据。采用同晶差值傅立叶法解析结构，用Ｘ－ＰＬＯＲ软件包进行修正，最后的晶体学Ｒ因子分别为０．１８４和０．１８５，键长偏差分别为０．００１３ｎｍ和０．００１４ｎｍ，键角偏差分别为２．５９０°和２．８１５°。结构测定显示Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ和Ｒ１６３Ｑｎ－ＴＣＳ与ｎ－ＴＣＳ的主链结构无较大变化，活性口袋区的结构和氢键体系发生了明显变化。生化分析表明Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ具有糖苷酶活性，Ｒ１６３Ｑｎ－ＴＣＳ没有糖苷酶活性。这说明，第１６３位侧链的Ｈ＋对ｎ－ＴＣＳ发挥Ｎ－糖苷酶活性至关重要。
- 李会广吴伸颜丽李建辉李建辉施庆利黄岳顺
- 关键词：突变体晶体结构
