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人工设计二硫键增强谷氨酰胺转胺酶热稳定性被引量：2: 2015年; 对S.hygroscopicus来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)进行分子改造,在MTG的N端区域引入二硫键,增强其热稳定性。通过序列比对与结构分析、运用Disulfide by Design软件,构建含有二硫键的突变体MTG(4-284)。在55℃下处理10 min,MTG(4-284)可以保持95%的酶活,而原始酶MTG仅剩15%的酶活。圆二色谱检测结果显示MTG和MTG(4-284)的T50分别为58和65℃。以上结果对MTG的分子水平的深入研究提供了基础,同时进一步满足其工业化应用的需求。; 刘中美杜坤周哲敏; 关键词：谷氨酰胺转胺酶二硫键热稳定性

内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化被引量：5: 2013年; 链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本。为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化。结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达。在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得)。重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近;且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响。; 杜坤周丽堵国成陈坚周哲敏; 关键词：内含肽谷氨酰胺转胺酶吸水链霉菌

吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶两种同源异形体的鉴定及性质分析被引量：1: 2013年; 目的探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定。方法吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物再经阴离子交换层析,分析纯化产物的分子表面带电性质,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和远紫外圆二色谱(far ultra-violet circular dichroism spectrometry,Far-UV CD)法分析纯化产物的肽段序列及二级结构的差异,并检测成熟酶N-末端氨基酸序列。结果经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化获得TGases的两种成熟酶TGases A和TGases B,均具有酶活性;TGase A和TGase B成熟酶分子具有不同的表面带电性质,酶活分别为(28.33±1.45)U/mg和(22.54±1.77)U/mg;TGases A和TGases B在质荷比(m/z)4 536.481和4 873.393处两个低丰度肽段有差异,但N-末端6个氨基酸序列完全相同;两者二级结构均以α-螺旋为主,但二级结构存在一定差异。结论吸水链霉菌TGases A和TGases B是由同一种酶原活化产生的同源异形体,两者的表面电荷性质、肽段序列及分子二级结构均有差异。; 崔文璟杜坤周丽刘中美丁旭周哲敏; 关键词：吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶

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杜坤

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