陈倩
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的 构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a（＋）内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果 从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1：2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论 成功构建了pET-28a（＋）-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的 蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.
- 陈倩钟文张群黄远帅张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌多克隆抗体
- 肺炎链球菌热休克蛋白ClpL的原核表达、纯化及抗原特性分析
- 2012年
- 目的原核表达并纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)热休克蛋白ClpL,并评价其作为S.pn疫苗候选蛋白的可行性。方法PCR扩增S.pn D39全长ClpL基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组ClpL蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗ClpL多克隆抗体的效价及亚型;Western blot分析ClpL蛋白在5种常见S.pn中的保守性;流式细胞术及Western blot分析ClpL蛋白在S.pn中的亚细胞定位。结果重组表达质粒pET-28a(+)-ClpL经双酶切及测序证实构建正确;ClpL蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度达90%,浓度为4.97 mg/ml;免疫小鼠可产生高滴度、高特异性的IgG抗体,以IgG1和IgG2b亚型为主;ClpL蛋白在5株常见S.pn中均有表达;ClpL蛋白为分泌型蛋白,不表达于S.pn表面。结论原核表达并纯化了S.pn ClpL蛋白,其作为一种在S.pn中保守存在的分泌型蛋白,可能是一种较好的疫苗候选蛋白。
- 钟文张群龚艺张彦青陈倩陈特董杰王虹张雪梅
- 关键词：链球菌肺炎原核细胞纯化
