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丁金凤: 作品数：46 被引量：116H指数：6; 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学建筑科学更多>>

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肺动脉高压大鼠血浆肾素—血管紧张素、精氨酸加压素的改变: 1992年; 观察心外左向右分流(LRS)、低压性缺氧(HH)及分流附加低压性缺氧(SHH)所致肺动脉高压(PH)大鼠血浆肾素活性(RA)、血管紧张素Ⅰ(AⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度及AⅠ转变为AⅡ的比率和精氨酸加压素(AVP)的改变。结果LRS组及SHH大鼠RA呈升高趋势,但与对照组比较无显著差异(P>0.05);HH组无改变。LRS组AⅡ浓度显著高于对照组(P<0.05),AⅠ及AⅡ/AⅠ亦呈升高趋势,但未达显著差异(P>0.05);而HH及SHH组较LRS组降低,尤以HH组为著。LRS大鼠AVP显著升高(P<0.05);其他组也呈升高趋势,但未达统计学显著意义(P>0.05)。本文对体液因素在PH形成中的作用进行了分析。; 郭建华吴学军郭加强任兵赵秀文丁金凤; 关键词：肺性高血压精氨酸加压素肾素

CD/TK单、双自杀基因重组腺病毒的制备及初步应用被引量：1: 2002年; 为制备表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,CD)和单纯疱疹病毒 1 胸苷激酶(herpessimplexvirustype 1thymidinekinase ,TK)双自杀基因的重组腺病毒载体 ,为再狭窄基因治疗的应用奠定基础 ,首先构建了含单、双自杀基因的腺病毒穿梭载体 ,细菌内同源重组法获得重组腺病毒质粒 .脂质体介导下转染 2 93细胞进行包装并大量扩增得到Ad TK、Ad CD、Ad TK CD、Ad LacZ 4种重组腺病毒 .氯化铯 (CsCl)梯度离心法纯化后利用报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)测定病毒滴度 ,可达 10 9pfu ml .PCR和Western印迹法对外源基因进行鉴定 ,证明单、双自杀基因均已整合入腺病毒基因组并表达 .重组腺病毒感染血管平滑肌细胞后 ,用MTT法比较了单、双自杀基因的杀伤作用 ,发现在感染复数≤ 2 0时 ,双自杀基因对细胞的抑制作用明显高于单基因 .成功地构建腺病毒双自杀基因共表达载体 ,为进一步的体内外实验奠定了基础 .; 曹慧青赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青丁金凤; 关键词：双基因共表达自杀基因重组腺病毒

共表达胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶双自杀基因杀伤大鼠血管平滑肌细胞的机制研究被引量：2: 2004年; 目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad CMV TK组、Ad EF1α CD CMV TK组和Ad lacZ组。感染原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,感染复数为 2 0。给予相应的前体药物 5 氟胞嘧啶和脱氧鸟苷后 ,用四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法 (MTT)和流式细胞术分析细胞死亡率。荧光染料Hoechst 3 3 3 42核染色观察凋亡细胞。琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞基因组脱氧核糖核酸 (DNA)的降解。结果 :血管平滑肌细胞可被重组腺病毒有效感染 ( 70 % )。MTT检测发现Ad EF1α CD CMV TK组双自杀基因及其前体药物 [5 氟胞嘧啶 ( 3 0 μg/ml)和脱氧鸟苷 ( 0 3 μg/ml) ]的细胞毒效应可达 91% ,高于Ad CMV TK组 ( 68% )和Ad EF1α CD组 ( 63 % )单自杀基因组。流式细胞仪分析Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的杀伤作用是以细胞毒性坏死和凋亡为主。凋亡细胞荧光染色显示Ad EF1α CD CMV TK组和Ad CMV TK组细胞的凋亡率分别为 11 0 %和 12 0 % ,高于Ad CMV LacZ组 ( 1 2 % )和Ad EF1α CD组 ( 5 0 % )。琼脂糖凝胶电泳发现在Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的基因组DNA可?; 曹慧青孟宪敏刘冬青赵秀文丁金凤; 关键词：双自杀基因血管平滑肌细胞胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶凋亡细胞共表达

人尿激酶原cDNA在牛内皮细胞中的表达被引量：1: 1996年; 本实验将人的尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ导人体外培养的胎牛主动脉内皮细胞（ＥＣ），得到了表达该基因的转化细胞，以期覆盖血管内支架或小口径人工血管（＜４ｍｍ）等移植物达到防止血栓形成，提高移植物通畅率的目的。利用磷酸钙盐沉淀法将重组逆转录病毒载体ｐＮ２－ＣＭＶ·ＵＫ导人包装细胞ＰＡ３１７，获得了含有重组逆转录病毒（Ｐｒｏ－ＵＫＲＮＡ序列）的培养上滑。用机械刮取胎牛主动脉内腔面分离ＥＣ，进行常规培养。用重组逆转录病毒感染７代以内的牛ＥＣ，并经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＰｒｏＵＫｃＤＮＡ已整合进ＥＣ基因组。以鼠抗人的Ｐｒｏ－ＵＫ单克隆抗体为一抗，作细胞免疫组化分析（Ｌ５Ａ８法），抗性细胞胞浆中出现阳性棕色颗粒，对照细胞为阴性结果。溶圈实验测得尿激酶原分泌量约为２３Ｕ／１０６细胞／２４小时。上述结果证明人Ｐｒｏ－ＵＫｃＤＮＡ已整合入牛ＥＣ基因组，表达产物具有免疫活性和纤溶酶原激活作用。; 康宁玲赵秀文张少雄杨芳丁金凤; 关键词：内皮细胞血管成形术再狭窄

DNA解链分析法的原理及应用: 1998年; ＤＮＡ解链分析法是测定ＤＮＡ在碱性条件下变性解链后，双链ＤＮＡ含量的方法，它可用于判断ＤＮＡ的损伤程度。运用该技术测定了Ｈ２Ｏ２对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞ＤＮＡ的损伤。结果：对照组双链ＤＮＡ的含量为８５．４％，Ｈ２Ｏ２组双链ＤＮＡ的含量为３４．８％；氯离子通道阻断剂ＮＰＰＢ、ＤＰＣ和甘氨酸，可使受损的ＤＮＡ得到保护，双链ＤＮＡ的含量分别是６６．０％、６０．３％、５７．８％。; 孟宪敏刘玉清赵荣瑞赵荣瑞; 关键词：DNA损伤过氧化氢

降钙素基因相关肽对加压激素的作用被引量：4: 1990年; 麻醉大鼠静脉一次注射2μg CGRP可使SBP及DBP分别降低26%和61%。心率增加11%。注射后5分钟,实验组大鼠的PRA、AⅡ、PAC和AVP的血浆浓度均显著高于对照组,而其垂体和下丘脑的AVP含量则低于正常(P<0.05),提示CGRP是一个很强的降压激素,在体内能刺激肾素、醛固酮和加压素的释放。; 丁金凤罗勇刘冬青赵秀文张琪汤健; 关键词：降钙素基因相关肽肾素加压素

心力衰竭大鼠心肌细胞增殖与心功能的关系研究被引量：9: 2006年; 目的证实成年心力衰竭大鼠心肌细胞存在分化增殖,探讨心肌细胞增殖程度与心功能的相关关系。方法成年SD雄性大鼠分为2组:心肌梗死组(14只,其中心功能代偿8只、失代偿6只),正常对照组(8只)。结扎左冠状动脉前降支形成心肌梗死,建立大鼠心力衰竭模型。1个月后,测血流动力学。心肌组织进行碘化丙啶和α-肌原节肌动蛋白抗体免疫荧光染色,观察心肌细胞有丝分裂相。用增殖细胞核抗原(PCNA)抗体进行免疫组化染色,观察PCNA阳性率。结果(1)成年大鼠左室心肌组织可观察到心肌细胞有丝分裂相。(2)心肌梗死后心功能代偿组PCNA阳性率明显高于对照组(7.2%±1.4%vs2.2%±0.8%,P<0.01),与心功能失代偿组比较差异无统计学意义(3.0%±1.3%vs2.2%±0.8%,P=0.648);心功能代偿组显著高于心功能失代偿组(P<0.01)。(3)心肌梗死组PCNA阳性率与±LVdp/dtmax相关系数分别为0.80(P<0.01)和-0.76(P<0.01)。结论(1)成年心力衰竭大鼠心脏存在心肌细胞增殖;(2)心肌梗死大鼠心肌细胞增殖程度与心脏收缩功能呈正性相关,与舒张功能呈负性相关。; 李灏何建国刘清华邓大君吴振军郭文元丁金凤程显声

氯沙坦及氯沙坦与双氢克尿噻合剂对原发性高血压患者肾素活性影响的比较被引量：1: 2001年; 目的 :比较血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦及氯沙坦与双氢克尿噻合剂对原发性高血压患者的降压疗效和肾素活性水平的影响。　　方法 :坐位舒张压 95～ 115 mm Hg(1mm Hg=0 .133 k Pa)的 76例原发性高血压患者 ,经 1周药物洗脱期 ,2周安慰剂期后 ,随机服用氯沙坦 5 0 mg(氯沙坦组 ,n=37) ,每日 1次或氯沙坦 5 0 mg与双氢克尿噻 12 .5 mg合剂 (氯沙坦 +双氢克尿噻合剂组 ,n=39) ,每日 1次。4周末坐位舒张压≥ 90 mm Hg者 ,剂量分别加倍 ,继续服用 4周。于安慰剂期末及服药 8周末测量诊室坐位血压和测定立位血浆肾素活性水平。　　结果 :服药 8周末平均坐位舒张压氯沙坦组 (n=35 )下降 10 .1± 9.1mm Hg;氯沙坦 +双氢克尿噻合剂组 (n=33)下降 14.6± 7.5 mm Hg(组间比较 P<0 .0 5 ) ;同时服用末次药 2 4小时后氯沙坦组的平均血浆肾素活性从 1.6 ng/ (ml· h)增加至 5 .4ng/ (ml· h) ;氯沙坦 +双氢克尿噻合剂组从 1.2 ng/ (ml· h)增加至 6 .6 ng/ (ml· h)。肾素活性的变化幅度与氯沙坦 +双氢克尿噻合剂组坐位舒张压下降幅度呈正相关 (r=0 .44 ,P<0 .0 1) ,　　结论 :氯沙坦使原发性高血压患者的肾素活性水平增加 ,但其降压疗效与基础肾素活性水平及肾素活性水平升高的幅度不相关。氯沙坦与双氢克尿噻联合?; 黄洁李一石张云贾友宏丁金凤赵秀文张阴凤张健; 关键词：原发性高血压氯沙坦肾素活性

反义凝血酶受体基因的表达对人ASMC增殖的影响被引量：3: 1999年; 介入治疗后再狭窄的发生严重降低了该治疗手段的最终疗效．为探讨再狭窄的发生机理、寻找有效的预防手段，利用反义ＲＮＡ技术构建了含有部分反义凝血酶受体（ＡＴＲ）ｃＤＮＡ片段的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＴＲ，并观察了其对培养的人主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增殖的影响．结果表明ｐｃＤＮＡ３／ＡＴＲ的瞬时转染即能显著抑制人ＡＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量，且该作用与导入的ＤＮＡ量呈剂量依赖性．; 张茜孟宪敏姜玉新丁金凤汤健陈光慧; 关键词：再狭窄凝血酶受体 ATR

携带TIMP-4 cDNA的重组腺病毒载体的构建: 2006年; 目的克隆细胞外基质金属蛋白酶组织抑制因子4(tissue inhibitor-4 of metalloproteinases,TIMP-4)基因,构建包装携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体(Ad/T4),为基因治疗血管再狭窄的实验研究打下基础。方法以人心脏cDNA文库为模板,应用PCR克隆TIMP-4基因,经DNA测序确定克隆结果。构建具有强启动子CMV,携带TIMP-4和报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-T4,利用AdEassy系统,在大肠杆菌BJ5183经同源重组产生重组腺病毒质粒pAd/T4。脂质体介导转染293细胞,包装重组腺病毒载体(Ad/T4)。结果克隆出含TIMP-4全部编码序列的cDNA片断,并通过亚克隆和同源重组等将其重组入腺病毒,构建包装了重组腺病毒载体Ad/T4。结论Ad/T4中含有TIMP-4和GFP的完整表达盒,可用于基因治疗的实验。; 米立国高英孟宪敏丁金凤; 关键词：金属蛋白酶类组织抑制剂腺病毒科基因

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