曹慧青
- 作品数：22 被引量：91H指数：6
- 供职机构：北京大学分子医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划北京市重大科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自杀基因CD、TK的共表达对人肺腺癌细胞的杀伤作用被引量：12
- 2001年
- 目的 观察双自杀基因的共表达与单自杀基因单独表达对癌细胞的杀伤作用。方法 分别构建了以 CMV为启动子 ,含单纯疱疹病毒胸苷激酶（ HSV-TK）和 /或大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ Ecoli.CD）单、双自杀基因的真核表达载体。在脂质体介导下将基因导入细胞，经 G418筛选出稳定表达的克隆。用 PCR、半定量 RT-PCR检测各组基因的整合及表达。给予前体药物 5-氟胞嘧啶（ 5-flourocytosine， 5-Fc）和 /或无环鸟苷（ Ganciclovir,GCV）后，用 MTT法测定各转基因组细胞的存活率。 结果 单、双自杀基因均在 GLC-82细胞中稳定表达，双基因转染组对细胞增殖的杀伤及旁杀伤效应高于单基因组。 结论 TK＋ CD/5-Fc＋ GCV的双基因共表达体系较 CD/5-Fc或 TK/GCV单基因体系对细胞具有更强的杀伤作用。
- 曹慧青赵勇孟宪敏丁金凤
- 关键词：基因治疗自杀基因共表达CKTK肺腺癌基因治疗
- 人细胞骨架调节蛋白基因Nelin N端片段的原核表达被引量：2
- 2003年
- [目的 ]构建Nelin基因N端片段的原核表达载体并表达此蛋白 .[方法 ]设计带有BamHI/EcoRI酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒pGEX 5X Nelin为模板 ,用PCR扩增Nelin基因N端片段 ,并用BamHI/EcoRI酶切PCR产物和原核表达载体 pGEX 5X 1,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒 pGEX 5X Nelin 1,经双酶切鉴定和测序验证 .重组表达质粒转化大肠杆菌BL 2 1,用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,以SDS PAGE进行分析 .[结果 ]成功构建并表达了分子量约为 43KD的NelinN端片段的融合蛋白 .[结论 ]所表达的蛋白为蛋白纯化。
- 尤昕曹慧青时娜王震赵秀文丁金凤孟宪敏
- 关键词：基因表达原核表达抗体
- CD/TK单、双自杀基因重组腺病毒的制备及初步应用被引量：1
- 2002年
- 为制备表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,CD)和单纯疱疹病毒 1 胸苷激酶(herpessimplexvirustype 1thymidinekinase ,TK)双自杀基因的重组腺病毒载体 ,为再狭窄基因治疗的应用奠定基础 ,首先构建了含单、双自杀基因的腺病毒穿梭载体 ,细菌内同源重组法获得重组腺病毒质粒 .脂质体介导下转染 2 93细胞进行包装并大量扩增得到Ad TK、Ad CD、Ad TK CD、Ad LacZ 4种重组腺病毒 .氯化铯 (CsCl)梯度离心法纯化后利用报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)测定病毒滴度 ,可达 10 9pfu ml .PCR和Western印迹法对外源基因进行鉴定 ,证明单、双自杀基因均已整合入腺病毒基因组并表达 .重组腺病毒感染血管平滑肌细胞后 ,用MTT法比较了单、双自杀基因的杀伤作用 ,发现在感染复数≤ 2 0时 ,双自杀基因对细胞的抑制作用明显高于单基因 .成功地构建腺病毒双自杀基因共表达载体 ,为进一步的体内外实验奠定了基础 .
- 曹慧青赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青丁金凤
- 关键词：双基因共表达自杀基因重组腺病毒
- 重组FN多肽CH50促进化疗小鼠巨噬细胞功能的研究
- 1999年
- 观察重组人纤维结合素多肽CH5 0对化疗小鼠巨噬细胞的影响。结果表明 ,腹腔连续注射CH5 0能防止化疗药物使外周血单核细胞数量和腹腔细胞的数量降低 ,能促进代谢活性、杀瘤活性、细胞因子分泌及脾淋巴细胞的增殖反应。提示CH5 0可提高肿瘤化疗药物的疗效。
- 曹慧青冯作化张桂梅张慧李东
- 关键词：巨噬细胞CH50化疗药物肿瘤治疗联合用药
- 共表达胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶双自杀基因杀伤大鼠血管平滑肌细胞的机制研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad CMV TK组、Ad EF1α CD CMV TK组和Ad lacZ组。感染原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,感染复数为 2 0。给予相应的前体药物 5 氟胞嘧啶和脱氧鸟苷后 ,用四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法 (MTT)和流式细胞术分析细胞死亡率。荧光染料Hoechst 3 3 3 42核染色观察凋亡细胞。琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞基因组脱氧核糖核酸 (DNA)的降解。结果 :血管平滑肌细胞可被重组腺病毒有效感染 ( 70 % )。MTT检测发现Ad EF1α CD CMV TK组双自杀基因及其前体药物 [5 氟胞嘧啶 ( 3 0 μg/ml)和脱氧鸟苷 ( 0 3 μg/ml) ]的细胞毒效应可达 91% ,高于Ad CMV TK组 ( 68% )和Ad EF1α CD组 ( 63 % )单自杀基因组。流式细胞仪分析Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的杀伤作用是以细胞毒性坏死和凋亡为主。凋亡细胞荧光染色显示Ad EF1α CD CMV TK组和Ad CMV TK组细胞的凋亡率分别为 11 0 %和 12 0 % ,高于Ad CMV LacZ组 ( 1 2 % )和Ad EF1α CD组 ( 5 0 % )。琼脂糖凝胶电泳发现在Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的基因组DNA可?
- 曹慧青孟宪敏刘冬青赵秀文丁金凤
- 关键词：双自杀基因血管平滑肌细胞胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶凋亡细胞共表达
- 新的人心肌特异的蛋白激酶及其编码序列
- 本发明涉及一个在心肌特异表达的、与肌小节蛋白cTnI、MyBP－C、心肌α－actin、成人骨骼肌α－actin、转录因子芳香烃受体复合物组分AIP、心肌脂肪酸结合蛋白3和心肌线粒体参与脂肪酸β－氧化的羟脂酰CoA脱氢酶...
- 丁金凤赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青曹慧青
- 文献传递
- 心肌特异表达基因p93在四种心血管疾病中血清水平的差异及其意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究心肌特异表达的新激酶基因p93在冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)、扩张性心肌病(DCM)、先天性心脏病(CHD)和风湿性心脏病(RHD)中的作用。方法以杂交瘤技术制备p93单克隆抗体;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)直接法检测正常人与上述4种疾病患者血清中p93的表达状况及血清浓度的差异。结果成功制备了人p93单克隆抗体,效价达1:100 000;正常人及CAD、DCM、CHD、RHD患者血清中均有p93的表达;正常人血清水平对数值为2．32±0．19;4种疾病患者的p93血清水平(对数值分别为2．46±0．22,2．47±0．20,2．58±0．26,2．49±0．19)均高于正常人(P<0．05)。其中CHD组明显高于正常对照组及CAD组(P<0．05)。结论p93基因与这4种疾病均有密切关系,以CHD尤为突出。推测该基因可能在上述各疾病的发生、发展过程中起着重要作用,但其机制亟待进一步探讨。
- 郑晓静刘冬青时娜曹慧青田野王来元孟宪敏
- 关键词：心血管疾病基因酶联免疫吸附测定细胞凋亡
- 反义TR和p21双基因共表达对人主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的作用被引量：3
- 2002年
- 目的观察携带反义凝血酶受体(ATR)或/和p21的单、双基因重组腺病毒伴随病毒(rAAV)载体对人主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖与凋亡的影响。方法以携带ATR或/和p21的单、双基因rAAV感染人ASMC。半定量RT-PCR检测各基因的整合与表达;MTT法测定感染不同时间点的细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期与凋亡细胞数目的变化;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色检测凋亡细胞的比率。结果单、双基因在ASMC中均获得整合,且双基因发生了共表达;病毒感染4d时,ATR组、p21组和AP双基因组的细胞存活率与对照组相比分别降低了16.7%、21.6%和29.4%;三组的G0/G1期细胞数分别为(61.8±2.9)%、(82.5±4.0)%和(80.4±6.1)%;凋亡细胞数为(4.8±0.5)%、(5.7±0.1)%和(9.2±0.9)%;AO/EB染色显示的凋亡细胞比率分别为:对照组(1.5±0.8)%、ATR组(7.2±3.3)%、p21组(10.7±5.6)%、AP组(18.3±2.7)%。结论(1)双基因共表达对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用均较单基因具有较强的生物学效应。(2)为再狭窄的基因治疗提示了更优化的途径。
- 孟宪敏米立国赵秀文曹慧青刘冬青高润霖丁金凤
- 关键词：细胞增殖P21基因共表达主动脉平滑肌细胞
- 应用酵母双杂交系统筛选与新基因nelin相互作用的蛋白质被引量：3
- 2005年
- 目的 通过筛选能够与新基因nelin的心肌特异表达产物相互作用的蛋白质从而揭示nelin的生物功能。方法 构建表达nelin阅读框全长的诱饵质粒并利用酵母双杂交系统筛选人心脏cDNA文库, 以寻找与nelin蛋白发生相互作用的蛋白质。并利用生物信息学方法对筛选得到的蛋白质进行功能结构域分析。结果 筛选得到3 个蛋白质分别为肌联蛋白 (Titin ) N2B亚型, 细丝蛋白 (Filamin ) C亚型即γ Filamin和α胰蛋白酶抑制物重链前体 (inter alphatrypsin inhibitor heavy chain precursor, ITIH)。对这3种蛋白的C末端结构域进行分析发现Titin和Filamin均含有免疫球蛋白样结构域 (Ig- like domain)。结论 实验结果揭示了新基因nelin很可能表达一个细胞骨架相关蛋白, 它可通过其蛋白质的C末端同Titin和Filamin的免疫球蛋白样结构域发生相互作用而参与细胞骨架网络的形成。
- 王震刘冬青王茵曹慧青丁金凤郭莲军屈伸孟宪敏
- 关键词：新基因蛋白质特异表达酵母双杂交系统相互作用
- 中国中年人群超敏C反应蛋白与心血管事件、总死亡事件的关联研究被引量：25
- 2018年
- 目的 了解超敏C反应蛋白（hs-CRP）与心血管事件、全因死亡事件是否独立相关。方法 2009-2010年在我国12个研究地区各抽取35~64岁调查对象1 000人，实际入选11 623人。收集清晨空腹血标本检测hs-CRP，同时调查心血管病危险因素。2016-2017年对12个地区中的7个地区进行随访，中位随访时间为6.21年（36 075人年），并记录心血管和死亡事件。总共随访6 177例，排除基线感染者、未进行hs-CRP检测和体格测量的研究对象后，5 984例纳入最终分析。根据hs-CRP值（mg/L）将人群分为3组（〈1、1~和〉3）。使用Cox比例风险模型，在调整各混杂因素后，探讨hs-CRP与心血管事件及总死亡事件的关联。结果 随访对象平均年龄50.2岁。hs-CRP〈1、1~和〉3 mg/L 3组人群心血管事件的发生率分别为3.6/1 000人年、7.1/1 000人年和10.4/1 000人年；全因死亡事件发生率分别为3.0/1 000人年、5.7/1 000人年和9.1/1 000人年。调整混杂因素后，与hs-CRP〈1 mg/L组相比，hs-CRP 1~和〉3 mg/L明显增加心血管事件的发生风险，HR值（95% CI）分别为1.33（0.95~1.84）和1.76（1.20~2.60），呈明显上升趋势（趋势检验P=0.003）；发生全因死亡风险也明显增加，HR值（95% CI）分别为1.76（1.23~2.54）和2.64（1.74~4.01），呈明显上升趋势（趋势检验P〈0.001）。结论 hs-CRP增高与心血管事件及全因死亡事件呈独立相关。
- 董莹王增武王馨田野张林峰陈祚曹慧青
- 关键词：超敏C反应蛋白心血管事件中年人群
