刘春雨
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 对ELISPOT室间质控及其检测样品要求的初步探讨被引量：1
- 2007年
- 目前检测细胞免疫最常用的方法是ELISPOT方法，ELISPOT方法结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术，能够在特异性细胞免疫应答过程中检测产生细胞因子的细胞数目，在单细胞水平分析细胞因子的分泌情况，具有灵敏度高、操作简便以及可检测活细胞功能等优点。然而该方法检测的对象是细胞，因此，细胞的分离、保存、复苏、培养、运输以及检测环境和具体的操作等多个环节都可能会影响实验结果。同一实验室不同操作者以及不同实验室之间的检测结果都可能会存在差异，而且同一实验室或同一操作者使用不同的试剂检测同一样品所得到的结果也可能不同。因此，为减少各环节对检测结果的影响，提高ELISPOT检测的准确性和精确性，使在各种环境条件下检测的结果具有可比性，建立统一的质量评价体系是很有必要的。本研究对用于质量控制细胞的保存时间以及数目等对检测的影响进行了初步探索，并分发到不同的实验室进行检测，比较其差异。现将结果报道如下。
- 张春涛朱义鑫刘春雨于运威吴庆军王佑春
- 关键词：ELISPOT特异性细胞免疫应答室间质控细胞培养技术细胞因子
- 人颗粒酶B的表达及抗原性初步分析
- 2007年
- 目的在原核系统表达人颗粒酶B(GrB)酶原型及活性型基因,并分析表达产物的抗原性。方法从人外周血淋巴细胞中抽提RNA,用RT-PCR方法扩增人颗粒酶B序列,将其克隆至pGEX-5x-1表达质粒,与GST进行融合表达,用SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行分析。结果所克隆的GrB序列与已报道的从人体分离出的GrB完全一致。酶原型和活性型GrB与GST的融合蛋白以包涵体的形式表达,其大小与预期结果一致,并能与GrB特异性抗体发生结合反应。结论已成功构建了GrB原核表达系统,酶原型及活性型GrB均具有抗原性。
- 吴雪伶张春涛刘春雨聂建辉种辉辉王佑春
- 关键词：颗粒酶B原核表达抗原性
- ELISPOT,MHC肽五聚体和ICCD三种检测特异性细胞免疫应答方法的比较研究被引量：6
- 2006年
- 目的比较三种特异性细胞免疫应答的检测方法,寻求一种简便、重复性好、易于质控的评价疫苗细胞免疫的检测方法。方法采用HIVDNA疫苗肌内注射BALB/c小鼠,第6周用艾滋病重组MVA痘苗病毒腹腔注射加强免疫,于第10天制备脾脏细胞悬液,并用酶联免疫斑点法(Enzyme-Linked Immune Spot,ELISPOT)、MHC肽五聚体法和胞内细胞因子染色分析法(Intra-cellular cytokinedetection,ICCD)分别检测细胞免疫应答。结果ELISPOT、MHC肽五聚体染色以及胞内细胞因子染色分析法检测疫苗组细胞免疫应答的阳性率分别为5/5、4/5和3/5;而且ELISPOT和MHC肽五聚体染色法之间有一定相关性(r=0.647),而ELISPOT和胞内因子染色法之间以及MHC肽五聚体染色和胞内因子染色之间无相关性。结论ELISPOT试验操作相对简单,灵敏度高、重复性好,是评价疫苗细胞免疫的有效方法。
- 张春涛刘春雨吴瑜赵晨燕王佑春
- 关键词：免疫酶技术
- 淋巴细胞免疫表型质控品的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究液氮冻存对外周血单个核细胞(PBMCs)CD4+T和CD8+T百分比的影响,探索冻存PBMCs作为淋巴细胞免疫表型质控品的可行性。方法收集健康成人抗凝全血,用淋巴细胞分离液分离PBMCs后液氮冻存。定期复苏PBMCs检测CD4+T和CD8+T百分比,计算细胞存活率、回收率。并分析不同厂家试剂、复苏方法、固定时间等因素对CD4+T和CD8+T百分比的影响。结果液氮冻存0～12个月、12～24个月的PBMCsCD4+T和CD8+T百分比均保持在稳定水平。冻存12个月PBMCsCD4+T和CD8+T百分比的平均变异系数(CV)分别为14.5%和9.8%,细胞存活率为85.4%～94.3%,回收率33.3%～97.8%;冻存12～24个月PBMCs的CD4+T和CD8+T百分比的平均CV值分别为7.1%和6.5%,细胞存活率为88.3%～98.5%,回收率52.3%～101%。不同复苏方法和检测试剂的结果相对稳定,CD4+T和CD8+T百分比的平均CV值分别为8.1%和6.4%。复苏后的PBMCs经多聚甲醛固定可在48h内检测。结论液氮冻存的PBMCs有望作为淋巴细胞免疫表型测定的质控品。
- 吴瑜张春涛赵晨燕刘春雨王佑春
- 关键词：外周血单个核细胞淋巴细胞免疫表型
- 不同试剂检测北京地区健康献血者淋巴细胞CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+百分比参考值调查被引量：1
- 2008年
- 目的探讨北京地区健康献血者CD3+CD4+、CD3+CD8+百分比的参考值范围,并对国产和进口的淋巴细胞免疫表型双染试剂进行比较。方法收集北京地区500例健康献血者全血标本,分别使用进口和国产的CD3FITC/CD4PE和CD3FITC/CD8PE双染试剂,应用同一台流式细胞仪进行检测,并对不同性别、民族和年龄段的结果以及不同试剂的结果进行比较。结果进口试剂检测的北京地区健康献血者CD3+CD4+、CD3+CD8+百分比以及CD3+CD4+/CD3+CD8+的范围(95%可信限)分别为22.92～49.96、14.86～41.70、0.37～2.47,不同年龄段(18～29、30～39与40岁以上组)各项指标均值的差异有统计学意义(P<0.05),而不同性别的比较仅CD3+CD4+(%)的差异有统计学意义(P<0.01),比较汉族(n=484)与少数民族(n=16)中各项指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。国产与进口试剂的检测结果显著相关,CD3+CD4+(%)、CD3+CD8+(%)以及CD3+CD4+/CD3+CD8+的r值分别为0.970、0.953、0.967。u检验结果显示CD3+CD4+(%)的差异无统计学意义(P>0.05),而CD3+CD8+(%)、CD3+CD4+/CD3+CD8+的差异有统计学意义(P<0.01)。结论初步建立北京地区健康献血者CD3+CD4+(%)、CD3+CD8+(%)的参考值,参考值受年龄、性别、民族、检测试剂和仪器等多种因素的影响。国产和进口淋巴细胞免疫表型双染试剂检测结果基本一致,相关性具有显著性。
- 吴瑜张春涛刘春雨赵晨燕张爱华孙可芳王佑春
- 关键词：参考值
