吕昌莲
- 作品数：31 被引量：49H指数：4
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 药学分子生物学基因表达调控的教学体会被引量：2
- 2011年
- 针对基因表达调控授课内容的自身特点,根据教学中的实际经验,总结四点教学体会:注重融会贯通、归纳总结;应用多媒体教学;补充科学最新进展;将自身科研经验运用到教学中。
- 吕昌莲
- 关键词：基因表达调控课堂教学教学方法
- 重组大鼠肾胆绿素还原酶在大肠杆菌中表达、纯化及活性测定
- 胆绿素还原酶(BVR)存在于哺乳动物及某些鱼类的细胞液中,并在血红素降解过程中将胆绿素还原成胆红素,BVR是生物体内存在的唯一的一种在不同pH条件下利用不同供氢体的还原酶,BVR还具有核定位功能.目的 将重组的大鼠肾胆绿...
- 吕昌莲
- 关键词：纯化活性测定
- 文献传递
- 大鼠肾胆绿素还原酶cDNA克隆、表达及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的克隆大鼠肾胆绿素还原酶(BVR)的cDNA序列后在大肠杆菌中表达、纯化并进行鉴定。方法采用RT-PCR方法利用设计合成的一对特异性引物从大鼠肾组织扩增BVR的cDNA序列,构建pMW172a-BVR重组质粒,转化扩增后进行序列测定,证实同GenBank[053850]公布的大鼠肾BVR的cD-NA序列相同后,阳性重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中表达并进行纯化。结果 SDS-PAGE鉴定其分子量为33 ku,分光光度仪检测具有催化胆绿素还原为胆红素的活性,证实为胆绿素还原酶。实验还测定了Km值,以NADH和NADPH分别作供氢体,测得Km值分别是380μmol/L、3.5μmol/L。结论 通过克隆表达获得了有活性的大鼠BVR酶蛋白,为进一步研究BVR的性质及功能奠定了基础,也为血红素加氧酶的研究提供了便利条件。
- 吕昌莲孙建平刘明王秀宏周虹
- 关键词：CDNA克隆基因表达大肠杆菌
- 15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响被引量：20
- 2005年
- 目的 通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法 采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果 在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论 15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。
- 张荣孟丽巍张一飞吕昌莲郑秋艳朱大岭
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞CA^2+硝苯地平L-型钙通道钙离子浓度
- 15-脂氧化酶-1分子酶学研究进展
- 2006年
- 吕昌莲朱大岭
- 关键词：酶学研究网织细胞花生四烯酸脂氧化酶动物体内细胞型
- 讲好分子生物学课的几点体会
- 2004年
- 为了上好分子生物学,在教学中采用了理论与实验相结合使抽象的理论变得具体形象;动画'三次重复法'讲授生化反应;通过由感性认识上升为理性认识锻炼学生归纳总结能力;用联系的发展的思路学习分子生物学,防止固守僵化.
- 吕昌莲
- 关键词：分子生物学教学效果课堂教学教学方法
- 高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2被引量：2
- 2009年
- 目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。
- 张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词：STAUROSPORINE细胞外信号调节激酶蛋白激酶A
- 15-HETE对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶苏氨酸495位点(eNOS Thr495)磷酸化的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对肺动脉内皮细胞(pu lm anory artery endothelialcells,PAECs)一氧化氮合酶(endothelia n itric oxide synthase,eNOS)活性的影响。方法:通过测定大鼠离体肺动脉环张力,比较去血管内皮、eNOS抑制剂L-NAME对15-HETE收缩肺动脉的影响;通过免疫沉淀和免疫印迹方法测定牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495磷酸化情况;用免疫印迹方法测定15-HETE对牛PAECs eNOS总蛋白表达的影响;用G re iss法检测15-HETE及15-脂氧酶(15-LO)抑制剂CDC和NDGA对牛肺动脉内皮细胞一氧化氮(NO)产量的影响。结果:(1)除去肺动脉内皮后,15-HETE收缩血管作用明显增强(P<0.01)。(2)抑制剂L-NAME 10-4mol/L可使15-HETE收缩肺动脉的作用明显增强(P<0.05)。(3)牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495位点磷酸化水平增强(P<0.01)。(4)10-6mol/L 15-HETE可抑制亚硝酸盐(NO2-/NO3-)的产生(P<0.05),抑制内源性15-HETE可明显增加NO2-/NO3-的产量,和对照组相比10-5mol/L CDC组P<0.05,10-4mol/L NDGA组P<0.01。结论:肺动脉内皮细胞eNOS/NO通路参与抑制15-HETE收缩大鼠肺动脉,15-HETE抑制肺动脉内皮细胞eNOS活性,使NO产量(NO2-/NO3-)下降。
- 叶宏吕昌莲朱大岭
- 关键词：一氧化氮血管收缩肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶
- ERK1／2通路参与15-羟二十碳四烯酸收缩缺氧大鼠肺动脉的过程(英文)被引量：5
- 2005年
- 缺氧诱导的15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosateteraenoic acid,15-HETE)是引起肺动脉收缩的重要介导因子。15- HETE引起肺动脉收缩的信号转导途径尚不清楚。本研究旨在确定细咆外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase-1／2, ERK1／2)信号转导通路是否参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。采用组织浴槽肺动脉环张力检测、蛋白质免疫印迹 (Western blot)和免疫细胞化学方法。制备缺氧大鼠动物模型,成年雄性Wistar大鼠在低氧环境下(吸入氧分数为0．12)正常喂养 9 d。显微分离直径1～1．5mm肺动脉,剪成长为3 mm的动脉环,进行血管张力检测。用ERK1／2 上游激酶(MEK)抑制剂PD98059 抑制ERK1／2活性。结果显示,PD98059可明显抑制15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环的收缩作用。在去除内皮的肺动脉环, PD98059仍可明显降低15-HETE的缩血管作用。Western blot和免疫细胞化学结果都显示,15-HETE能促进ERK1／2磷酸化。 由此表明ERK1/2信号转导通路参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。
- 吕昌莲叶宏唐晓波朱大岭
- 关键词：缺氧细胞外信号调节激酶
- 15-羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性(英文)被引量：2
- 2005年
- 15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用,低氧肺动脉高压 下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS),使一氧化氮(nitric oxide,NO)的产量下降,但目前尚无关 于15-HETE与eNOS／NO相互作用研究的报道。我们通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO产量、总eNOS 表达及eNOS磷酸化测定等方法对15-HETE与eNOS／NO的相互作用进行研究。首先分离大鼠肺动脉,分为eNOS抑制剂L- NAME组(0．1 mmol／L)、去血管内皮组与内皮完整组,用15-HETE作用大鼠离体肺动脉环,测定肺动脉张力。结果表明, L-NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较,15-HETE对血管的收缩作用增强,且都有统计学意义(P<0．05)。培养牛肺 动脉内皮细胞,分别用15-HETE、15-脂氧酶(15-lipoxygenase,15-LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4-dihydroxy-[alpha]-cyanocinnamate, CDC)利(nordihydroguiairetic acid,NDGA)]处理细胞,通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量,间接测定NO产量,与对照组比较, 1 μmol／L 15-HETE 明显降低肺动脉内皮细胞NO水平(P<0．05), 10 μmol／L CDC和0．1 mmol／L NDGA显著增加NO水平(分别 是P<0．05,P<0．01);通过Western blot检测不同时间(5,10,15,20,30,60 min)eNOS的表达情况,结果显示,15- HETE的小同作用时间,没有引起eNOS表达的明显不同;用苏氨酸495位点磷酸化eNOS(Thr495)抗体进行免疫沉淀,再用 总eNOS抗体和15-LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量,间接测定eNOS活性,结果表明15-HETE增强Thr495磷酸 化型eNOS含量。由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点,因此15-HETE降低eNOS活性。这些数据表明;15-HETE的缩 血管作用有eNOS／NO参与,15-HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性,并且首次发现磷酸化eNOS(Thr495)和15- LO之间存在蛋白质相互作用。
- 叶宏毕海荣吕昌莲唐晓波朱大岭
- 关键词：肺动脉收缩内皮细胞内皮型一氧化氮合酶
