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王健宇: 作品数：13 被引量：6H指数：1; 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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猪VHL基因克隆及敲低克隆胚胎的构建被引量：1: 2013年; 通过在细胞和胚胎水平对猪Von Hippel-Lindau(VHL)基因进行了基因敲低研究,以便为建立VHL疾病模型猪奠定基础。研究首先通过3 RACE和5 RACE克隆得到猪VHL基因cDNA全长序列(2 725 bp),Real-time PCR结果表明VHL基因广泛表达于猪的各种组织器官,其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达。进一步在猪iPS细胞中对5条干扰片段进行筛选,获得2条高效的干扰片段,干扰效率分别达到72%(P=0.0012)和64%(P<0.01)。以稳定干扰VHL基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体,构建克隆胚胎,结果表明,克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异,而且在克隆囊胚中VHL基因的干扰效率达到71%(P<0.01)。综上所述,文中获得了猪VHL基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎,从而为VHL疾病模型猪的构建奠定了良好的基础。; 金红红王健宇王芳马婧牟彦双刘忠华; 关键词：VHL基因 RNA干扰

5-AZA-2'-Deoxyctidine对猪核移植胚胎体外发育的影响: 与体内胚胎相比,核移植来源的体外胚胎往往具有较高的DNA甲基化水平,减少供体细胞或克隆胚胎中DNA甲基化水平,或许能够提高克隆效率。5-aza-2’-deoxyctidine(5-aza-dC)是一种DNA甲基转移酶的抑...; 郇延军朱江王健宇刘忠华; 关键词：5-AZA-DC 核移植胚胎; 文献传递

肠绒毛消化法所得仔猪小肠上皮细胞的培养与鉴定被引量：4: 2011年; 小肠上皮细胞作为肠道的主要功能细胞,在多种肠道疾病和上皮间质转化的研究中发挥着重要的作用。采取组织块消化和肠绒毛消化两种方法对新生仔猪小肠上皮细胞进行分离培养,传代后通过细胞形态学及免疫荧光等方法对其进行鉴定,结果表明:肠绒毛消化法所获得的小肠上皮细胞要远好于组织块消化法所得细胞,细胞在24～48h贴壁,呈现出典型的三角形或多角形样,10～12d细胞汇合成片、单层生长、互不重叠;细胞角蛋白18(cytokeratin-18)和尾型同源盒基因2(Cdx2)阳性,碱性磷酸酶检测阴性,扫描电镜下可以清楚地看到均匀分布的肠绒毛。以上结果表明,该实验成功建立出可连续传代并符合小肠上皮细胞鉴定标准的仔猪小肠上皮细胞。; 李慧格日乐其木格王健宇王娟王芳薛冰华刘忠华; 关键词：小肠上皮细胞

猪原始生殖细胞生物学特性的研究被引量：1: 2014年; 胚胎生殖细胞(embryonic germ cell,EGC)是由胎儿原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)经体外驯化培养获得的一种多潜能干细胞。研究猪PGC生物学特性对于建立猪EGC及了解猪生殖细胞发育机制具有重要意义。该研究以原代培养的猪PGC为对象,探讨了其生长行为特征及其重编程过程中多能性、生殖系标志基因的表达模式。结果显示,26 d胚胎生殖嵴分离的PGC呈碱性磷酸酶阳性,细胞体积及核质比较大;体外培养初期呈现出较强的增殖及迁移能力,培养第5 d细胞增殖达到平台期,此时克隆高表达Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc、Klf4和Ifi tm3(P<0.05),低表达Blimp1(P<0.05),Nanos1和Stella的表达水平与猪胎儿成纤维细胞无差异;猪PGC形成的原代克隆已经具有多向分化潜能。; 马婧张宇王健宇薛冰华伟人悦李妍刘忠华; 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞重编程

猪类胚胎生殖细胞体外诱导分化为神经细胞的研究: 目的探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。方法采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。结果 (1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中...; 丛义梅马婧孙瑞珍王健宇薛冰华胡魁尹智刘忠华; 关键词：体外诱导神经细胞

5-AZA-2'-Deoxyctidine对猪核移植胚胎体外发育的影响: 与体内胚胎相比,核移植来源的体外胚胎往往具有较高的DNA甲基化水平,减少供体细胞或克隆胚胎中DNA甲基化水平,或许能够提高克隆效率。5-aza-2’-deoxyctidine(5-aza-dC)是一种DNA甲基转移酶的抑...; 郇延军朱江王健宇刘忠华; 关键词：5-AZA-DC 核移植胚胎; 文献传递

猪类胚胎生殖细胞体外诱导分化为神经细胞的研究: 2013年; 【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神经元及神经胶质细胞标记物的多种神经细胞类型。【结论】从早期性腺中成功分离培养得到了猪类胚胎生殖细胞,通过简单、快速的神经细胞分化的诱导体系证实了猪类胚胎生殖细胞具有体外定向分化为多种神经谱系细胞的能力。; 丛义梅马婧孙瑞珍王健宇薛冰华胡魁尹智刘忠华; 关键词：体外诱导神经细胞

猪vhl基因克隆及敲低克隆胚胎的构建: Von Hippel-Lindau(vhl)病为常染色体显性遗传病,主要临床表现为中枢神经系统成血管母细胞瘤和形成肾细胞癌等,在小鼠中vhl基因敲除后会引发心血管等疾病.鉴于猪是人类心血管疾病更好的模型,本文在细胞和胚胎...; 金红红王健宇王芳马婧牟彦双刘忠华; 关键词：VHL基因 RNA干扰

猪原始生殖细胞生物学特性的研究: 胚胎生殖细胞(embryonic germ cell,EGC)是由胎儿原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)经体外驯化培养获得的一种多潜能干细胞.研究猪PGC生物学特性对于建立猪EG细胞系及了解...; 马婧张宇王健宇薛冰华伟人悦李妍刘忠华; 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞重编程