钟安清
- 作品数：5 被引量：55H指数：3
- 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 用基因芯片鉴别诊断四种水泡性疾病
- 钟安清杨宝华秦智锋叶奕优
- 该项目是利用基因芯片技术鉴别诊断偶蹄兽的四种水泡性传染病，为国家质量监督检验检疫总局2000年科学研究与技术开发重大项目之一[国家局计划编号：K002-2000]，属动物检验检疫专业类别。该项目主要是对动物（主要是偶蹄兽...
- 关键词：
- 关键词：基因芯片
- 用基因芯片鉴别诊断四种水泡性疾病被引量：17
- 2003年
- 为了对临床上症状非常相似的四种水泡性动物疾病进行大批量、快速准确的检测,我们尝试用基因芯片技术来对这四种水泡性疾病进行快速鉴别诊断。用Qiaquick 96 plate Kit对扩增的39个基因目的片段进行纯化,TE调配浓度至0.36礸/礚,于GMS417点样仪上按预选设计好的布阵方式点样,然后经紫外灯照射进行紫外交联等一系列处理。用Salmon进行非特异性杂交检测芯片点样的质量。大量抽提组织中FMDV和细胞上清液中的SVDV的总RNA,随机引物反转录的同时采用随机荧光标记法,标记FMDV和SVDV。标记好的cDNA超声波随机打断后进行特异性杂交,以最佳光扫描强度进行扫描,Imagene软件扫描结果,对两者信号进行对比,结合各病毒相对应的坐标,可鉴别诊断出四种动物的水泡性疾病病毒。本方法不但快速、灵敏、准确性高,而且可实现对大批量货物的集成化检测,满足我国快速通关的要求。
- 秦智锋钟安清杨宝华叶奕优
- 关键词：基因芯片口蹄疫病毒猪水泡病病毒
- H5N1亚型禽流感疫苗对供港鸡免疫效果评价
- 2007年
- 针对供港活鸡饲养周期长（85日龄～105日龄），禽流感抗体滴度要求高（21／28检测样品抗体滴度需≥4log2）的特点，在原有H5N2疫苗对供港活禽免疫效果不理想的情况下，对哈尔滨兽医研究所研制的H5N1亚型禽流感疫苗进行了免疫效果评估。结果显示，H5N1疫苗免疫效果明显高于原有的H5N2疫苗，初步推荐该禽流感灭活疫苗对供港鸡场的免疫程序为：首免7日龄～10日龄，0．3mL／只，皮下注射；二免45日龄，0．5mL／只，肌肉注射。
- 秦智锋钟安清林庆燕罗焕全姚绵鹏范万红陈书琨许保柱阮周曦吕建强曾少灵毕英佐田国彬
- 关键词：免疫程序
- 禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒灵敏性试验被引量：7
- 2006年
- 为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度,通过测定已知鸡胚半数致死量(ELD50)的标准毒株的进行了定量。利用9～11日龄SPF鸡胚,对深圳出入境检验检疫局保存的H5和H9亚型标准禽流感毒株进行了鸡胚半数致死量(ELD50)的测定,结果为H5亚型禽流感毒株的半数致死量为10-7.75/0.2mL,H9亚型禽流感毒株的半数致死量为10-8.5/0.2mL。用所研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型标准禽流感毒株原液进行10倍连续稀释,进行实时荧光RT-PCR灵敏度的测定,结果发现:试剂盒检测H5亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10-5倍稀释液,该稀释液含有281ELD50病毒量;检测H9亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10-8倍稀释液,该稀释液含有15.8ELD50病毒量。同时检测H5和H9时,试剂盒的灵敏度要比单独检测一个亚型时的灵敏度增加一个数量级。本灵敏度已经能够检测到感染鸡的喉拭子和(或)泄殖腔拭子所采集的病毒量,能够满足检验检疫的实际需要。
- 秦智锋吕建强肖性龙张东林李环玲陈书琨钟安清黄运生林庆燕林镜中刘胜利
- 关键词：禽流感病毒
- 禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：33
- 2006年
- 为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。
- 秦智锋吕建强肖性龙钟安清林镜中黄运生林庆燕陈书琨金显忠林苗刘胜利
- 关键词：禽流感H5亚型H7亚型H9亚型
