陈娓
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
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- 腺病毒介导的人诱变型低氧诱导因子1α对大鼠后肢缺血模型血管新生的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨腺病毒介导的人诱变型低氧诱导因子1(简称Ad-H564)在大鼠急性后肢缺血模型中的表达及促进血管新生的作用。方法①重组腺病毒在HEK293A细胞内大量扩增,氯化铯浓度梯度离心,透析纯化后用分光光度计法测定病毒滴度。②建立大鼠急性后肢缺血动物模型,将72只大鼠随机均分为4组:Ad-LacZ组、Ad-HIF1α0组、Ad-HIF1α564组和对照组,其中在测定HIF-1αmRNA表达时取生理盐水组作为对照组,在血管造影和铸型时取假手术组作为对照组。实验组分别以Ad-LacZ、Ad-H0和Ad-H564转染术侧后肢骨骼肌,对照组注射生理盐水,假手术组不做任何处理。③于转染后1、3、5、7d,以生理盐水组为对照,采用RT-PCR法测定肌肉中的HIF-1 mRNA表达;④基因转染后28d,以假手术组为对照,选择性后肢动脉造影及血管铸型观察血管密度。结果①经PCR及基因测序鉴定,扩增纯化后的腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异,病毒滴度达1011OPU/ml。②RT-PCR结果显示:Ad-H564组基因相对表达量最高(平均0.5447±0.1412),与生理盐水组,Ad-LacZ组相比差异有统计学意义(P=0.000),但与Ad-H0组(平均0.5330±0.0416)的差异不显著(P=0.368);各组均以基因转染后7d表达量最高,Ad-H564组与其他各组对照间差异有统计学意义(P=0.000)。③基因转染28d后造影结果显示:Ad-H564组和Ad-H0组的侧支血管密度均大于对照组,但两组间无显著差异。动脉血管铸型结果显示:Ad-H564组的微小血管密度较其他各组明显增多。结论单一位点诱变型人HIF-1α基因能够增强局部肌肉内基因表达,促进缺血组织中血管新生,但与野生型基因相比差异无统计学意义。
- 陈娓张红亚郭寿贵王月刚韦莉莉刘城吴平生
- 关键词：腺病毒科低氧诱导因子1Α血管新生
- 常氧下低氧诱导因子1α在传代培养LoVo细胞中的表达
- 2009年
- [目的]探讨常氧下低氧诱导因子1α(HIF-1α)在传代培养LoVo细胞中的表达。[方法]在常氧下传代培养LoVo细胞,MTT法检测细胞增殖,绘制生长曲线,Western blot检测传代后不同时间点HIF-1α蛋白表达。[结果]细胞生长曲线示LoVo细胞在传代后24 h逐渐增加,72 h后迅速增加。Western blot示HIF-1α蛋白表达在传代后24 h最高,随时间延长,表达量逐渐降低。[结论]常氧下HIF-1α在LoVo细胞中可低水平表达,传代可引起HIF-1α表达增高,HIF-1α在促进细胞损伤的修复和细胞增殖中起重要作用。
- 韦莉莉吴平生王月刚赖艳娴陈娓
- 关键词：常氧传代细胞增殖
- 缺血性心脏病的基因治疗与血管新生
- 2006年
- 对于冠状动脉弥漫性狭窄、复发性难治性心绞痛、耐受能力差、合并多种危险因素等不适合用传统治疗方法重建血运的冠心病患者而言,基因治疗是一种促进血管新生的极具吸引力的治疗模式,将成为今后缺血性心脏病治疗上的主要进展。
- 陈娓吴平生
- 关键词：缺血性心脏病血管新生基因治疗难治性心绞痛传统治疗方法重建血运
- 重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制被引量：4
- 2008年
- 背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚。目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制。设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成。材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建。方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞。主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上。②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945,P<0.05)。③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P<0.05)。结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系。②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期。
- 韦莉莉王月刚陈娓唐其东赖艳娴胡英芳吴平生
- 关键词：腺病毒HIF-1ΑP21WAF1/CIP1
- 不同位点诱变体低氧诱导因子1α的动物在体表达比较
- 2009年
- 目的探讨不同位点诱变体低氧诱导因子1α(HIF-1α)(Ad-H564、Ad-H564/402和Ad-H564/803)转染大鼠急性下肢缺血模型后,骨骼肌中HIF-1α的核酸及蛋白表达。方法建立大鼠急性下肢缺血模型,随机分6组,在骨骼肌中分别注入对照基因Ad-lacZ、野生型HIF-1α基因(Ad-H0)、Ad-H564、Ad-H564/402、Ad-H564/803和生理盐水(NS),于第1,3,5,7d处死动物,RT-PCR检测骨骼肌中HIF-1αmRNA的表达,免疫组化法测7dHIF-1α蛋白表达和28d的毛细血管密度。结果3种突变体HIF-1α基因组的HIF-1αmRNA表达均高于Ad-H0组(F=99.380,P=0.000);以7d的表达量最高(F=24.942,P=0.000);各突变体HIF-1α基因组间相比,以Ad-H564/402组表达量最高,Ad-H564/803组为次,再次为Ad-H564组。各突变体HIF-1α基因组7d的骨骼肌组织间及间质组织中均可见明显的HIF-1α蛋白表达阳性细胞,28d均可见明显的CD31蛋白表达阳性细胞。以Ad-H564/803组最为密集,与对照组差异显著。结论外源性人突变体HIF-1α基因Ad-H564、Ad-H564/402、Ad-H564/803均可促进骨骼肌组织中的HIF-1α核酸及蛋白表达,并促进毛细血管新生,且较Ad-H0的作用更强。各突变体基因组间相比较,Ad-H564/402组HIF-1αmRNA的表达最强,Ad-H564/803组的蛋白表达及促毛细血管新生作用最强。
- 陈娓李文强刘城韦莉莉王月刚吴平生
- 关键词：低氧诱导因子1血管新生实时荧光定量PCR
- 人低氧诱导因子1α重组腺病毒载体及其应用
- 本发明涉及突变型低氧诱导因子1α，其编码核酸，含有低氧诱导因子1α野生型编码核酸的载体，特别是重组腺病毒载体，以及含有它们的药物组合物。本发明的突变蛋白质、核酸、载体和药物组合物可用于治疗缺血性疾病例如冠心病、外周动脉缺...
- 吴平生王月刚刘城陈娓傅锐斌郭寿贵谢宜军童铠胡英芳赖艳娴
- 文献传递
- 大鼠下肢缺血模型中双位点诱变体HIF-1α的促血管新生作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨双位点诱变体低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因(Ad-H564/803)在动物体内的表达及生物学功能。方法构建急性大鼠下肢缺血模型,随机分为4组,分别以Ad-LacZ、Ad-H0、Ad-H564/803和生理盐水(NS)转染术侧下肢骨骼肌,于转染后1,3,5,7d,RT-PCR测定骨骼肌中HIF-1αmRNA的表达量;基因转染后28d,选择下肢动脉造影及动脉铸型观察血管密度。结果RT-PCR结果显示:Ad-H564/803组HIF-1αmRNA相对表达量较Ad-H0组高(P=0.000);以转染后7d表达量最高(P=0.000);第3,5,7dAd-H564/803组的表达量均高于其它各组(P=0.000)。基因转染28d后造影显示:Ad-H564/803组的侧支血管密度大于Ad-H0组及其他各组;动脉铸型显示:Ad-H564/803组的绒毛样微血管最为密集。结论外源性双位点诱变体HIF-1α基因(Ad-H564/803)可增强急性下肢缺血模型大鼠骨骼肌内HIF-1αmRNA的表达,促进缺血骨骼肌中的血管新生,且生物学功能较野生型HIF-1α基因更强。
- 陈娓李文强付锐斌胡英芳王月刚刘城吴平生
- 关键词：低氧诱导因子1血管新生
- 人突变型低氧诱导因子1α对大鼠后肢缺血模型血管新生的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨564与402双位点突变的HIF-1α基因(Ad-HIF-1α-564Ala-402Ala,简称Ad-H564/402)在大鼠下肢急性缺血模型中的表达及对血管新生的影响.方法:①将先期构建的Ad-H564/402在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化.用电子显微镜、PCR及测序的方法鉴定并用分光光度计法测定病毒滴度;②构建急性大鼠下肢缺血模型,随机分为4组,分别以Ad-LacZ,Ad-H0,Ad-H564/402和生理盐水(NS)转染术侧下肢骨骼肌,于转染后1,3,5,7 d,应用RT-PCR测定骨骼肌中HIF-1αmRNA的表达量;③基因转染后28 d,选择性下肢动脉造影及血管铸型观察血管密度.结果:①经扩增、纯化后基因突变区信息保存完好,最终滴度达到(6.29±0.26)×1014OPU(optical particle u-nit,光学颗粒单位)/L.②突变体基因Ad-H564/402的相对表达量高于野生型HIF-1α基因(P=0.000);且以第7日最高(P=0.000);经两两比较,不同基因组间及不同转染天数间的表达量均有显著的统计学差异(P=0.000).③基因转染28 d后造影及血管铸型结果显示:Ad-H564/402组的绒毛小血管数大于Ad-H0组及其他各组.结论:①外源性突变体Ad-H564/402基因可促进体内HIF-1αmRNA的表达.②外源性突变体Ad-H564/402基因可促进缺血骨骼肌的侧支血管形成及微血管新生.③突变体Ad-H564/402基因的生物学功能较野生型基因Ad-H0更强.
- 陈娓童锴张红亚王月刚郭寿贵韦莉莉吴平生
- 关键词：低氧诱导因子1逆转录聚合酶链反应动脉造影
