吴亦亮 作品数:7 被引量:25 H指数:3 供职机构: 厦门大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 博士科研启动基金 甘肃省自然科学基金 甘肃省教育厅研究生导师科研项目 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
AtPCS1基因表达载体构建与转化苜蓿的研究 被引量:9 2011年 扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)螯合肽合成酶(AtPCS1)全长基因;构建AtPCS1植物表达载体pBⅠ121-AtPCS1,进一步转化农杆菌EHA105;利用转化的农杆菌EHA105侵染甘农一号苜蓿(Medicago sativa)叶片,经过80~100 d的筛选与培养,获得57株再生转基因植株。随机抽取其中9株进行PCR检测,其中6株为阳性。初步结果表明,AtPCS1基因已整合到苜蓿基因组中。 王鸣刚 骆换涛 李志忠 吴亦亮关键词:苜蓿 植物表达载体 AtPCS1基因的克隆及其农杆菌介导的苜蓿遗传转化 利用植物修复重金属污染土壤是一种廉价并且可行的修复技术。大部分已发现的超富集植物生物量小,限制了其在植物修复方面的应用。本实验借助基因工程手段将重金属富集、耐受相关的基因AtPCS1转入生物量大且适应性广的苜蓿中,以期获... 吴亦亮关键词:苜蓿 植物修复 文献传递 苜蓿遗传转化体系的优化与AtPCS1基因表达载体的构建 2007年 通过对6种不同基因型苜蓿愈伤组织的形成能力、愈伤组织的分化能力的比较发现,不同苜蓿品种间的分化率存在显著差异(P<0.05),其中甘农1号分化率最高(42.9%);对甘农1号叶片、下胚轴及子叶等外植体的分化再生能力研究发现,叶片起源的愈伤组织分化时间短,且丛生芽形成数量高于下胚轴和子叶;再生芽可在B5培养基上成苗,并在蔗糖浓度为10 g/L的1/2 MS培养基上顺利生根.据此认为,苜蓿甘农1号叶片是适于做遗传转化的理想材料.利用RT-PCR方法扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列构建了AtPCS1的植物表达载体pBI121-AtPCS1,为下一步AtPCS1基因转化苜蓿奠定了基础. 王鸣刚 赵宏 刘晓风 吴亦亮 陈亮关键词:苜蓿 遗传转化体系 植物表达载体 AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备 被引量:2 2008年 利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2 000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性. 王鸣刚 赵宏 刘左军 吴亦亮 陈亮关键词:原核表达 融合蛋白 抗血清 利用高保真酶扩增特性调整基因读码框的方法 2006年 在基因工程研究中,经常要涉及到对目的基因读码框进行调整的研究。本文报道了利用高保真DNA聚合酶扩增DNA后产生平末端的特性,及限制性内切酶对一重组的原核表达载体pET28a-HA进行读码框调整的研究,测序结果显示读码框按照预期设计正确调整,表明高保真DNA聚合酶可以用于DNA 3'凹陷端的补平,在DNA 3'凹陷端平滑化时多了一个有效的选择。 张国广 陈亮 吴亦亮 曾雅明四种启动子调控RFP报告基因在家蚕细胞(Bm-e-HNU5)内的瞬时表达 被引量:6 2006年 以红色荧光蛋白基因(RFP)为报告基因,构建含4种不同启动子的重组表达质粒,用脂质体介导法转染家蚕Bombyxmori细胞(Bm-e-HNU5),观察家蚕细胞质肌动蛋白4基因启动子(A4)、α微管蛋白基因启动子(α-tub)、蚕丝心蛋白重链基因启动子(Fib)和家蚕核型多角体病毒早期即刻蛋白基因启动子(IE)4种启动子调控RFP报告基因在家蚕细胞内的瞬时表达情况。构建的重组表达质粒pDsRed-α-tub、pDsRed-A4、pDsRed-IE和pDsRed-Fib经双酶切和PCR鉴定正确无误。转染和转录实验结果表明,除了pDsRed-A4外,其他3种重组质粒在Bm-e-HNU5细胞中都得到高转染率,α-tub、IE和Fib可依次增强RFP报告基因在家蚕细胞内的瞬时表达活性。 王云 叶向群 吴亦亮 桂慕燕 左正宏关键词:家蚕 启动子 农杆菌介导AtPCS1基因转化苜蓿 被引量:7 2007年 利用RT-PCR扩增拟南芥螫合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列.进一步构建AtPCS1的植物表达载体pB I 121-AtPCS1,转化农杆菌EHA105;然后用转化的农杆菌EHA105以叶盘法侵染苜蓿甘农一号叶片,在50mg/L Kan的筛选压下,经过约80~100d的筛选,获得57棵再生苗.随机取其中9棵再生苗进行PCR检测,其中6棵为阳性.初步鉴定表明AtPCS1基因已整合到苜蓿基因组中. 王鸣刚 任小换 李志忠 李雪雁 吴亦亮 陈亮关键词:植物表达载体 苜蓿