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温州地区62例HCV感染者的基因型特征研究被引量：5: 2009年; 目的:探讨温州地区丙型肝炎病毒(HCV)感染者的HCV的基因型特征。方法:采用RT巢式-PCR法,对62例HCV-IgG阳性者进行HCV-RNA的检测及基因分型。结果:62例研究者中,HCV基因型1b单阳性率为35.48%,基因型2a单阳性率为3.23%,1b和2a双阳性率为61.29%,1b总阳性率为96.77%,2a总阳性率为50%。结论:温州地区HCV的基因型以1b型占优势,并且基因型1b和2a混合感染率较高。; 文金生段志良陈俊林荣方佩佩孟锐峰; 关键词：丙型肝炎病毒基因型聚合酶链反应

登革病毒抗原肽免疫小鼠诱导特异性CD4^+ T细胞反应: 2009年; 目的:探讨4条登革病毒抗原肽在不同遗传背景小鼠中的免疫原性。方法:4条登革病毒抗原肽(C45-57KLV-MAFIAFLRFL,E396-408SSIGKMFEATARG,NS323-35YRILQRGLLGRSQ和NS3141-155NREGKIVGLYGNGVV)中每条肽分别免疫BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠;3周后,处死小鼠并制备脾细胞悬液;不刺激或同样抗原肽刺激脾细胞后,采用细胞内细胞因子染色流式细胞术(ICS)检测小鼠脾细胞CD4+ T细胞中肽特异性产生IFN-γ或IL-4的CD4+ T细胞的百分比。结果:肽C45-57可诱导BALB/c小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(0.72%±0.04% vs 0.04%±0.02%,P<0.05)而肽E396-408则诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.09%±0.01%vs0.01%±0.01%,P<0.05);肽E396-408、NS323-35和NS3141-155均可诱导C57BL/6小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(分别为0.31%±0.03%vs0.02%±0.01%,P<0.05;0.21%±0.03% vs 0.04%±0.01%,P<0.05;0.44%±0.04% vs 0.02%±0.01%,P<0.05),而肽C45-57可诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.45%±0.05% vs 0.02%±0.02%,P<0.05)。结论:肽C45-57和E396-408在BALB/c小鼠中具有免疫原性而肽C45-57、E396-408、NS323-35和NS3141-155在C57BL/6小鼠中具有免疫原性。; 段志良孟锐峰文金生; 关键词：登革病毒 CD4+T细胞

HPV6L1/CtMOMP多表位融合基因在COS-7细胞的表达及其在小鼠的免疫效果观察被引量：2: 2010年; 研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b结构蛋白L1(HPV6b L1)基因佐剂增强沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)多表位(Ct MOMP168)DNA疫苗的免疫效果的可能性.构建pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168融合重组质粒,转染COS-7细胞,用RT-PCR、激光共聚焦显微技术及Western印迹技术检测其表达.分别用pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168、pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168及pcDNA3.1(+)质粒肌肉免疫BALB/c小鼠,ELISA检测外周血中IgG及阴道分泌物中sIgA.结果表明,pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/CtMOMP168可在COS-7细胞中表达;Ct MOMP168组和HPV6b L1/Ct MOMP168组均可刺激小鼠产生抗Ct MOMP特异性的抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高,且HPV6b L1/Ct MOMP168组小鼠产生的抗体滴度明显高于Ct MOMP168组(P<0.05).结果提示,分子佐剂HPV6b L1与CtMOMP多表位基因融合能够显著增强Ct MOMP多表位DNA疫苗的体液免疫应答.; 许文石朝辉朱珊丽陆丽君孟锐峰李玲张丽芳; 关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白 DNA疫苗

丙型肝炎病毒非结构区5个细胞毒性T细胞表位的鉴定被引量：1: 2009年; 目的采用T细胞表位预测软件结合体外实验鉴定丙型肝炎病毒（HCV）特异性细胞毒性T细胞（CTL）表位。方法采用T表位预测软件Rankpep预测HCV特异性CTL表位，选择候选CTL表位加以合成；用候选CTL表位肽分别刺激HCV感染者以及健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC），采用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的斑点形成细胞（spots forming cells，SFC）的水平，采用细胞内细胞因子染色（intracellularcytokinestaining，ICS）检测PBMC中肽特异性IFN-γ＋CD8＋T细胞的水平。结果用5条候选CTL表位肽[NS3450（TVPQ—DAVSR）、NS3594（GPTPLLYRL）、NS4b78（SMMAFSAAL）、NS5a416（SEENVSVVF）和NS5a367（TVSSALAEL）]分别刺激10个HCV感染者和2个健康者的PBMC后，健康者的PBMC不产生IFN-γ，而7个HCV感染者的PBMC产生IFN-γ；HCV感染者的PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的细胞的频率为（5～36）SFC／10^5PBMC，肽特异性IFN-γ＋CD8＋T细胞占总CD8＋T细胞的百分比为0．02％～0．25％。结论EL／SPOT结果和ICS结果证实5条肽NS3450、NS3594、NS4b78、NS5a416和NS5a367为全新的HCV特异性CTL表位。; 段志良陈永平孟锐峰姜爱英陈俊郑明华文金生; 关键词：丙型肝炎病毒细胞毒性T细胞表位

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孟锐峰