张林元
- 作品数：26 被引量：52H指数：4
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学建筑科学更多>>
- 利用杆状病毒表达载体研制兽用重组疫苗的进展被引量：4
- 1994年
- 利用杆状病毒表达载体研制兽用重组疫苗的进展罗满林，张林元，陈溥言，蔡宝祥（南京农业大学动物医学系）昆虫杆状病毒正受到人们的日益重视。这不仅因为它可以作为安全、有效、无害的生物防治剂，而且由于Ｓｍｉｔｈ和Ｓｕｍｍｅｒｓ［１］创立并发展起来的昆虫杆状病毒...
- 罗满林张林元陈溥言蔡宝祥
- 关键词：杆状病毒
- 绿色荧光蛋白基因与乙肝病毒e抗原基因在家蚕细胞中的表达被引量：1
- 1997年
- 用绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｅ抗原基因融合，构建了家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）重组转移载体ｐＢｍＧＨｅ，使融合基因处于多角体基因（ｐｌｈ）启动子控制之下。共转染后得到的重组病毒ｒＢｍＧＨｅ能在家蚕细胞中表达约５０ｋＤａ的ＧＦＰ／ＨＢＶｅ融合蛋白。被感染的细胞在紫外光下发射出美丽的绿色荧光。用ＥＬＩＳＡ检测，ＨＢｅＡｇ抗原活性滴度达到１１２８００。这种既能发射绿色荧光又具有抗原活性的双功能融合蛋白为研制一种新型的发光免疫诊断试剂开辟了一条新路。
- 邓小昭刁振宇吴鸿银何亮张林元李光富胡建红黄永秀
- 关键词：GFPBMNPV融合蛋白
- 重组病毒－家蚕细胞系统表达人α_1－干扰素的纯化研究
- 1996年
- 用重组家蚕核多角体病毒（ｒＢｍＮＰＶ－ＩＦＮ－α）感染家蚕细胞，经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析柱及单克隆抗体亲和层析，从细胞培养液中分离纯化α－干扰素，纯化倍数为１０１０，比活性为５．８７×１０８ＩＵ／ｍｇ蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电冰呈单一条带，并用激光解离电离飞行质谱分析测定其分子量为２０４６５Ｄ，毛细管电泳鉴定纯度为９９．１％。表达产物Ｎ端１５个氨基酸分析结果与ＩＦＮ－α１ｃＤＮＡ推导的序列相同。
- 邓小昭刁勇刁振宇李光富陈华标张林元
- 关键词：Α-干扰素纯化重组病毒
- 人α_1－干扰素基因真核表达载体的构建及其活性被引量：1
- 1996年
- 选用与ＨｕＩＦＮ－α１基因及其信号肽相应的引物，采用ＰＣＲ技术，从中国人血白细胞染色体中分离带有信号肽ＩＦＮ－α１基因片段，分别克隆到质粒Ｍ１３ｍｐ１９和Ｍ１３ｍｐ１８中，通过序列分析进行鉴定，然后克隆到家蚕多角体病毒（１３０ｍｂｙｘｍｏｒｉＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）载体ＰＢＦ５的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ之间，用合成的相应寡核苷酸片段为引物进行双链测序，鉴定为阳性重组转移载体后，将其ＤＮＡ和ＢｍＮＰＶ基因组ＤＮＡ共转染家蚕细胞，筛选出重组病毒，再将其感染家蚕细胞，测得细胞培养上清中ＩＦＮ活性为１．０×１０６ＩＵ／ｍｌ。
- 李光富邓小昭张林元刁振宇陈华标柴建华
- 关键词：BMNPV基因表达Α-干扰素
- 马立克氏病病毒糖蛋白B基因克隆及其在家蚕细胞中的表达
- 1996年
- 将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株基因文库中的ＢａｍＨＩＩ３和Ｋ３克隆质粒分别用双酶切消化，获得２．８ｋｂ的ＢａｍＨＩ－ＳａｌⅠ片段和１．１ｋｂ的ＢａｍＨＩ－ＥｃｏＲＩ片段，然后将这２个片段定向克隆于载体ｐＵＲ２２２中，构建了含ＭＤＶ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组质粒。为了基因操作方便和高效表达，设计了１对带有酶切位点的引物，用ＰＣＲ扩增了ＭＤＶｇＢ基因部分片段，并按正确方向插入去磷酸化的载体质粒中，得到起始密码子前带有ＥｃｏＲＩ酶切位点的ＭＤＶｇＢ基因克隆，再将该基因插入去磷酸化的家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）转移载体ｐＢＦ１４中，ＤＮＡ序列分析确证了克隆基因及阅读柜架的正确性。以重组转移载体与野生型ＢｍＮＰＶ共转染家蚕细胞，用有限稀释法点杂交结合空斑技术纯化重组病毒。用荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞。
- 罗满林陈溥言蔡宝祥张林元邓小昭
- 关键词：马立克氏病病毒分子克隆
- 杆状病毒基因工程进展
- 1993年
- 近年来,应用昆虫杆状病毒作载体在昆虫细胞或虫体中高效表达外源基因的技术已得到广泛的推广应用。这一基因工程系统安全、高效、容量大,表达产物具有生物活性,是很有潜力的系统之一,已有数百种动物、植物、微生物,病毒的基因在这一系统中成功表达,并有多篇综述文章和专著详细介绍这一载体表达系统。本文将概述杆状病毒分子生物学及基因工程的基本原理,主要介绍近几年来的研究与进展。
- 邓小昭张林元陈宜峰
- 关键词：杆状病毒基因工程
- 用新法制备K88ac基因探针被引量：1
- 1989年
- 由于遗传工程技术的发展,基因探针被广泛应用。探针的DNA大都来自于大肠杆菌的重组质粒,这样制备的探针易污染该菌的染色体和载体DNA,作菌落杂交时易出现假阳性。为了克服这些缺点,用枯草杆菌质粒作载体克隆K88ac基因的EcoRI小片段。以枯草杆菌重组质粒作探针,与含K88ac基因的菌株杂交呈阳性,而不含K88ac基因的菌株呈阴性,且阴阳性有明显区别。
- 张林元邓小昭
- 关键词：基因探针
- 中国家蚕抗菌肽人工合成类CMⅣ基因在甜菜夜蛾虫体中的表达被引量：12
- 2001年
- 将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠杆菌 ,得到重组Bacmid ABP。将重组Bacmid转染sf2 1细胞及感染甜菜夜蛾 (Laphygmaexigua)幼虫 ,在培养细胞上清及虫体血淋巴中均测到抗菌活性。经Northernblotting证明感染甜菜夜蛾幼虫中有类CMⅣmRNA的存在。且表达产物在酸性电泳中电泳行为与天然抗菌肽CMⅣ组分相似。为进一步利用昆虫细胞及虫体生产抗菌肽药物打下了基础。
- 赵东红戴祝英周开亚张林元
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统甜菜夜蛾幼虫
- 用微载体技术培养家蚕BmN细胞的实验研究被引量：5
- 1995年
- 观察了家蚕ＢｍＮ（从Ｓｉｌｋｗｏｒｍ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，提出其分布符合Ｐｏｉｓｓｏｎ规律，并由此估计了不同细胞接种浓度时裸球的百分比，与实际观测结果基本符合；研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，家蚕ＢｍＮ细胞在Ｃｙｔｏｄｅｘ ３上生长的临界接种数为一珠粒６．４个细胞。当微载体浓度为３ｇ／Ｌ时，最低的接种浓度为１．０×１０＾５／
- 邓小昭周永春张林元刁振宇陈宜峰
- 关键词：家蚕微载体昆虫细胞培养
- 重组人α2b型干扰素的纯化与鉴定被引量：3
- 1997年
- 采用超声波裂解菌体 ,硫酸铵沉淀 ,酸化处理 ,再经离子交换层析和单克隆抗体亲合层析 ,使表达产物纯化了 10 2 9倍 ,比活性达 2 .14× 10 8IU/ mg蛋白 ,SDS- PAGE呈单一条带 ,HPL C纯度 >95% ,回收率达 59.1%。表达产物 N端 2 5个氨基酸序列分析结果与 IFN- α2 b c DNA推导的序列相符合。
- 陈华标邓小昭李光富刁振宇张林元
- 关键词：干扰素蛋白质纯化
