贺志锐
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高层次人才科研启动基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 结核分枝杆菌CFP10基因真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2013年
- 为研究结核杆菌毒力因子CFP10在结核杆菌感染细胞过程中的功能,本研究根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的CFP10基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到CFP10基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将CFP10基因亚克隆至pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒pEGFP-N1-CFP10,分别转染293T细胞和U937细胞。经western blot分析表明CFP10-EGFP融合蛋白在293T细胞和U937细胞中均获得了表达。通过激光共聚焦显微镜观察显示在293T细胞和U937细胞,CFP10-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质。本研究为进一步研究毒力因子CFP10在感染宿主细胞中的作用奠定了基础。
- 李跃峰张俊波监通贺志锐王讲德张辉陈创夫曹旭东
- 关键词：结核病CFP10ESAT6
- 亚临床酮病奶牛血液生化指标的测定被引量：1
- 2014年
- 检测荷斯坦奶牛亚临床酮病血清中的生化指标,研究新疆亚临床酮病奶牛血液中生化指标的特点。选择产后1d^15d的荷斯坦亚临床酮病奶牛,通过应用自动生化分析仪、紫外分光光度计和酶联免疫分析法测定血清中BHBA、NEFA、GLU、BUN、TP、ALB、AST、ALT、TBI、TG、CT含量。结果表明,血清中GLU、ALB、CT的含量极显著低于对照组水平(P<0.01);血清中BHBA、BUN、NEFA、TG、AST和ALT含量极显著高于对照组水平(P<0.01);血清中TP显著低于对照组水平(P<0.05)。血清中TBI显著高于对照组水平(P<0.05)。由此提示,血清中各生化指标的含量均高于报道水平,可将血清中BHBA的含量1.40mmol/L作为诊断亚临床酮病的标准。血清中GLU、TG、NEFA等的含量可作为诊断亚临床酮病的辅助参考指标。
- 王银龙贺志锐刘强赛务加甫
- 关键词：荷斯坦奶牛亚临床酮病生化指标
- 湖羊FecB基因在新疆细毛羊胎儿成纤维细胞中的表达被引量：4
- 2012年
- 为培育携带FecB多胎基因的高繁殖率新疆细毛羊,本研究提取了湖羊卵巢的总RNA,在此基础上反转录为cDNA,通过PCR扩增得到了湖羊的FecB基因,再与pMD19-T载体连接,构建了pMD19-T-FecB重组质粒。通过双酶切与真核表达载体pEGFP-N1连接,得到了pEGFP-N1-FecB真核表达载体。经测序与酶切证明,成功构建了pEGFP-N1-FecB真核表达载体,并转染新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,通过药物筛选获得了表达湖羊FecB基因的阳性新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,为培育高繁殖率的新疆细毛羊奠定基础。
- 于振兴贺志锐吾热力哈孜刘强孟仁姚建龙赛务加甫
- 关键词：FECB基因真核表达载体胎儿成纤维细胞湖羊新疆细毛羊
- 结核杆菌分泌蛋白ESAT6、CFP10对细胞凋亡及免疫影响的初步研究
- 结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌引起的一种人和动物共患的慢性传染病。结核杆菌属胞内寄生菌,抑制细胞凋亡可以为该菌毒力株提供一个胞内寄生与增殖的场所,当胞内寄生的细菌数达到“阈值”后,导致该宿主细胞...
- 李跃峰曹旭东陈创夫盛金良张辉王鹏雁贺志锐王讲德
- 关键词：结核杆菌细胞凋亡
- 中国美利奴绵羊PLCζ基因的克隆及表达研究
- 目的:中国美利奴绵羊是我国新疆特有的肉毛兼用绵羊品种之一,其屠宰加工量非常大。然而,卵巢组织的回收利用率并不高,核移植产生的克隆动物或转基因动物更是少之又少。目前多使用蛋白激酶抑制剂或蛋白质合成抑制剂来人工激活卵母细胞,...
- 贺志锐
- 关键词：基因克隆孤雌发育
- 文献传递
- 酮病对荷斯坦奶牛抗氧化系统和一氧化氮含量的影响被引量：1
- 2013年
- [目的]研究新疆荷斯坦奶牛酮病血清中的部分生化指标的变化及其酮病致病机理的探讨。[方法]以新疆荷斯坦奶牛为试验动物,用酮粉法和改良的水杨醛检测法对其血清进行检测,应用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性;应用DTNB显色法测定血清中GSH-Px活力,应用黄嘌呤氧化法测定血清中T-SOD活力,应用硫代巴比妥酸法测定血清中MDA含量。[结果]酮病奶牛血清中GSH-Px活力极显著降低(P<0.01),T-SOD活力显著降低(P<0.05),血清中MDA含量显著增高(P<0.05);对照组奶牛血清中的NO含量和NOS活性均显著高于阳性组。[结论]酮病不但影响奶牛的抗氧化系统而且也会降低一氧化氮含量和一氧化氮酶的活性,对于揭示奶牛酮病的发生机理具有重要意义。
- 王银龙高树贺志锐刘强赛务加甫
- 关键词：荷斯坦奶牛酮病一氧化氮抗氧化系统
- 中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达被引量：1
- 2014年
- 构建美利奴绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化,为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,亚克隆到原核表达载体pCzn1中,导入Arctic Express TM(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,收样后进行SDS-PAGE电泳或Western blot检验PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示,重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在Arctic Express TM(DE3)表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74ku的融合蛋白,符合预期大小。成功构建pCzn1-PLCζ原核表达载体,表达并纯化了其融合蛋白,Western blot试验表明其蛋白分子的完整性良好,这将有利于对PLCζ蛋白进行深入的研究。
- 木尔扎提.阿勒腾别克刘强贺志锐王银龙乌热力哈孜赛务加甫
- 关键词：磷脂酶C原核表达WESTERNBLOT
- 中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2013年
- 根据GenBank中公布的牛磷脂酶C zeta(PLCζ)基因序列设计引物,通过RT-PCR方法对中国美利奴绵羊的PLCζ基因进行扩增,以了解其分子生物学特征。测序表明,美利奴绵羊PLCζ基因开放阅读框全长1 905bp,共编码634个氨基酸。生物信息学分析所扩增的中国美利奴绵羊PLCζ基因具有典型的EF-hand钙结合结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶X结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Y结构域、蛋白激酶C2保守区域,其170和215氨基酸位点为组氨酸活性位点。与牛、猪、犬、人、猴、鼠、兔和原鸡的PLCζ基因核苷酸同源性分别为97.32%、88.19%、73.93%、81.42%、83.05%、73.65%、72.42%和65.07%。氨基酸序列的系统进化树表明中国美利奴绵羊PLCζ基因与牛的亲缘关系最近。
- 贺志锐肖红冉于振兴胡圣伟刘强赛务加甫
- 关键词：分子克隆
- 猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析被引量：2
- 2013年
- 为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。
- 肖红冉王大伟贺志锐王鹏雁倪伟胡圣伟陈创夫
- 关键词：猪Α干扰素BHK-21细胞生物活性分析
- 中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究被引量：4
- 2014年
- 旨在构建PLCζ真核表达载体,初步研究其在体细胞系中的表达特性。本研究用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,鉴定无误后,将构建了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ转染293T细胞和绵羊成纤维细胞,在倒置荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察重组质粒在细胞中的表达和分布。经酶切与测序证明,本试验成功的构建了pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体,并且成功与绿色荧光蛋白融合表达。本试验实现了pEGFP-N1-PLCζ在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达,这将有利于进一步通过核移植来研究其重组蛋白对卵母细胞的激活作用。
- 刘强贺志锐王银龙乌热力哈孜赛务加甫
- 关键词：磷脂酶CZETAPEGFP-N1真核表达
