赵颖慧
- 作品数：11 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：“十二五”国家科技计划农村领域中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H1N1流感病毒单链抗体基因的克隆及抗病毒活性研究
- 单链抗体(single-chain antibody variable fragment,ScFv)是抗原与抗体结合的最小单位,由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段5-25个氨基酸的连接肽连接而成的单克隆抗体的可变区片段...
- 李越王伟赵颖慧孟庆文
- 关键词：流感病毒单链抗体基因克隆抗病毒活性
- 文献传递
- 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。
- 周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达
- 鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究被引量：5
- 2013年
- 视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。结果显示,从金定鸭脾脏中扩增的RIG-1基因的CDS序列大小为2 802 bp,编码934个氨基酸;RIG-1基因在不同组织中的表达各不相同,在鸭的脾脏和肾脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肺脏和肌肉低度表达;pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞组与pcDNA3.1(+)转染组相比,病毒TCID50及相对表达量显著降低,IFN-β及Mx的相对表达量显著升高,表明RIG-1产生了显著的抗AIV作用。本研究为禽类RIG-1蛋白功能和家禽的天然免疫研究奠定了基础。
- 张雅春胡卫杰王建超王伟邓瑞坡李越赵颖慧孟庆文
- 关键词：抗病毒
- 抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体
- 本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选...
- 王伟李越赵颖慧臧凤霞周长良孟庆文陈洪岩
- 关键词：抗病毒基因单链抗体
- 文献传递
- 鸡输卵管组织特异性载体的构建和细胞水平表达
- 卵清蛋白(OV)启动子是最强的组织特异性启动子之一,筛选高效特异性强的OV启动子是输卵管生物反应器制备的关键.本文以海兰白鸡基因组为模板,扩增了3.0kb、2.7kb的OV启动子区,克隆到带有EmGFP报告基因的pcDN...
- 赵颖慧朱慧萌王伟李越孟庆文
- 关键词：卵清蛋白输卵管外源基因
- 文献传递
- 鸡OV启动子表达HA对禽流感病毒攻击提供完全保护
- 2018年
- 鸡卵清蛋白（ovalbumin,OV）基因5＇调控序列是构建鸡输卵管生物反应器的首选调控元件。以EGFP为报告基因,构建OV启动子真核表达载体,转染原代输卵管上皮细胞和CHO细胞,筛选得到1.1kb的高效OV启动子。构建1.1kb OV启动子表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白真核表达载体pOV_（1.1k）-HA,转染CHO细胞。PCR、RT-PCR鉴定结果证明HA基因整合至CHO细胞基因组,并进行转录;SDS-PAGE、Western blot及HA试验结果证明HA蛋白在CHO细胞内的表达,并具有免疫反应性和血凝活性。以纯化的HA蛋白免疫4周龄SPF鸡,2周后加强免疫一次,加强免疫3周HI抗体水平为6.3log2;以10~6EID_（50）H5N1（A/Goose/Guangdong/1/96）亚型禽流感病毒鼻腔接种SPF鸡,免疫组100%存活,无排毒现象,对照组100%死亡。结果表明,筛选的1.1kb OV启动子可有效驱动HA蛋白表达,表达的HA蛋白免疫SPF鸡对禽流感病毒攻击提供完全保护;为鸡输卵管生物反应器表达保护性抗原和珍贵药物蛋白奠定了基础。
- 李亚芳赵颖慧刘赛宝王伟曾为俊王金泉陈洪岩孟庆文
- 关键词：HA禽流感病毒免疫保护
- 核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体
- 2014年
- 为制备H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),本试验利用表达猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株HA蛋白的表达质粒pVAX1-HA肌注股内肌免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合;通过间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆,获得9株稳定分泌抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞。中和试验结果显示,单克隆抗体4D5株对H1N1流感病毒起中和作用,该单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1024。这株单克隆抗体与哈尔滨兽医研究所国家重点实验室保存的H3N2流感病毒、H5N1流感病毒均不发生交叉反应,显示出了很好的H1特异性;间接免疫荧光试验结果显示,这株单克隆抗体能与H1N1流感病毒发生特异性反应。制备的特异性抗HA单克隆抗体为建立H1N1流感病毒免疫学检测方法和单链抗体抗病毒复制研究奠定了基础。
- 李越王伟赵颖慧周长良臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体
- 截短鸭RIG-Ⅰ蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
- 目的:制备抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,鉴定其免疫学特性并建立分析检测体系.
方法:利用PCR技术将鸭RIG-Ⅰ基因helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表...
- 孟庆文臧凤霞张雅春王伟赵颖慧李越周长良陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达免疫学特性
- 文献传递
- 1.1kb、2.7kb、3.0kb鸡输卵管组织特异性启动子的克隆及细胞评价被引量：1
- 2014年
- 鸡卵清蛋白基因启动子是指导外源基因高效特异性表达的理想调控区,利用卵清蛋白启动子驱动外源蛋白大量表达,需要包含组织特异性相关序列。本研究以海兰白鸡的基因组为模板,采用PCR扩增了1.1 kb、2.7 kb和3.0 kb的卵清蛋白启动子区,置换pcDNA6.2-GFP中CMV启动子序列,构建了真核表达载体pOV1.1 kb-GFP、pOV2.7 kb-GFP、pOV3.0 kb-GFP;转染原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),PCR、RT-PCR证明重组载体能够整合到细胞基因组内,并进行转录;倒置荧光显微镜下观测到绿色荧光蛋白表达;启动子表达效率由高到低依次是CMV启动子、1.1 kb、2.7 kb、3.0 kb卵清蛋白启动子。研究结果为瞬时表达模型的建立和输卵管生物反应器的研究奠定基础。
- 赵颖慧王伟李越周长良臧凤霞孟庆文陈洪岩
- 关键词：输卵管生物反应器启动子
- H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立
- 2015年
- 为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量。感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至104.5EID50,滴鼻、点眼各0.1mL,对照组接种PBS,感染后24h放入同居鸡;感染后连续观察14d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量。结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.167/0.1mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为104.5 EID50。感染模型试验结果显示,以104.5 EID50的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8d全部死亡;在感染和同居3d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P<0.05)。本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础。
- 王伟张雅春邓瑞坡李越赵颖慧陈洪岩孟庆文
- 关键词：禽流感H5N1
